基于甘草次酸与细胞穿膜肽修饰的去甲斑蝥素肝靶向脂质体的制备工艺研究

目的构建一种以肝癌细胞特异性配体甘草次酸(Glycyrrhetinic acid,GA)和转录活化因子(trans-activator of transciption,TAT)共同修饰的包载抗癌药物去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)的肝靶向递药系统。方法以薄膜分散法制备去甲斑蝥素脂质体(NCTD-LP),高速离心法分离脂质体和游离药物,星点设计-效应面法考察制备工艺,高效液相法(HPLC)测定NCTD含量,动态分析法测定NCTD-LP体外释药行为,CCK-8法考察NCTD-LP对肝癌细胞的增殖抑制作用。结果确定NCTD-LP的最优制备工艺参数:温度35.61℃,磷脂浓度4.59 mg·mL^-1,磷脂/胆固醇质量比5.04∶1;透射电镜下脂质体呈均匀分布的球形,平均粒径为175.9 nm,Zeta电位为-48 m V;NCTD-LP在体外模拟正常体液环境和肿瘤环境下24 h累积释放度分别为83.3%和92.2%;NCTD-LP对肝癌细胞Hep G2的抑制作用为NCTD的2.14倍。结论该研究构建的肝靶向递药系统可显著增强NCTD对肝癌细胞的抑制作用,并具有良好的缓释性。

响应面法优化多烯紫杉醇外泌体的载药工艺

目的构建一种多烯紫杉醇的外泌体递药系统。方法采用超速离心法提取A549肿瘤细胞外泌体,电穿孔法制备多烯紫杉醇外泌体(DTX-EXO)。以包封率为考察指标,采用星点设计-响应面法考察制备工艺,动态透析法测定DTX-EXO的体外释药行为。以体外细胞摄取实验和体内小鼠活体成像实验考察外泌体的靶向性。结果DTX-EXO的最优制备工艺参数为:多烯紫杉醇浓度120μg·mL-1,电压0.75 V,电击次数5次。透射电镜下DTX-EXO呈现杯碟状,平均粒径为151 nm。DTX-EXO在体外模拟正常体液环境和肿瘤环境下24 h累计释放度分别为40.5%和56.9%。细胞摄取实验中,香豆素-6(C6)-EXO组细胞摄取荧光强度高于C6组。小鼠活体成像实验中,生理盐水组在肿瘤部位没有荧光,Cy5.5-N-羟基琥珀酰亚胺脂(Cy5.5)-DTX-EXO组在肿瘤部位的荧光最强,Cy5.5-EXO组次之,Cy5.5-DTX组最弱。结论外泌体可以用于多烯紫杉醇的传递载体,并且具有良好的缓释性和靶向性。

广藿香PatTIFY6b基因克隆与功能分析

茉莉酸甲酯能诱导广藿香叶片中百秋李醇含量升高,但是其中的分子机制不清楚。本研究从茉莉酸甲酯处理的广藿香叶片转录组数据中筛选到一个表达量显著增加的基因,经过序列比对发现该基因与唇形科丹参转录因子Sm TIFY6b具有高度同源性,因此将其命名为PatTIFY6b。通过生物信息学对PatTIFY6b编码蛋白的结构和功能进行分析和预测,并以广藿香cDNA为模板,克隆得到PatTIFY6b。PatTIFY6b定位于细胞核,在广藿香不同组织中均有表达,叶片中表达量最高。茉莉酸甲酯处理下,PatTIFY6b和百秋李醇合成途径基因具有相似的表达模式,说明茉莉酸甲酯可能通过PatTIFY6b调控百秋李醇的合成。利用原核表达系统,成功表达了PatTIFY6b蛋白。将PatTIFY6b过表达在双子叶模式植物拟南芥中,筛选到纯合株系PatTIFY6b-ox-17。本研究首次克隆广藿香PatTIFY6b基因并对其功能进行初步探究,为后期研究广藿香百秋李醇生物合成的分子调控机制提供理论基础。