OPAY02型标记与萧山鸡及其杂种早期生产性能相关性的研究

以萧山鸡、SR92A系鸡及其杂交后代为研究对象,以OPAY02为随机引物,将探测到的1660.8与2326.0bp的2条多态性条带分为4种遗传型,2条带同时出现的个体定为A型,1660.8bp带单独出现的个体为B型,2326.0bp带单独出现的个体为C型,2条带均不出现的个体为D型,研究OPAY02型标记与鸡早期生产性能的关系。结果表明:B型标记首次在萧山鸡、SR92A系及其杂交后代检出,其频率为9.30%;在萧山鸡群中,不同带型49日龄体重间效应显著,49、75日龄体重由高到低依次为A>C>B,而在SR92A系和SR92A×萧山的杂交后代中差异不显著,说明不同遗传群体的4种遗传型效应不同。

冷冻卵巢移植研究进展

哺乳动物的卵巢内有数量众多的卵细胞,是雌性生殖细胞的一个资源库。冷冻保存健康的卵巢组织,快速复苏后再原位移植到盆腔或异位移植至皮下及肾被膜等部位,有望恢复母体的生育力和维持正常激素水平。卵巢组织移植的成功与否取决于移植物的大小、局部缺血持续时间、外源性抗氧化剂和血管生成因子等因素。目前,已有少数关于人类卵巢冷冻移植并成功获得活产儿的报道,也有较多动物实验得到证实。现就冷冻卵巢移植的研究进展进行综述。

实验动物学课程实验课教学法初探

实验动物学课程的实践性和操作性非常强,实验教学在整个课程中的地位至关重要。从不同的学生心理、专业特点、教学安排等方面可初步探讨该课程实验课的教学规律,从而采取相应的措施来优化现有的教学方法。

小鼠卵巢玻璃化冷冻原位移植后子代行为学评估

目的 :建立小鼠卵巢玻璃化冷冻原位移植模型,通过对后代的行为学检测,探讨卵巢玻璃化冷冻的长期安全性。方法:选择8周龄的C57BL/6小鼠,将卵巢取出进行玻璃化冷冻,8周后复苏,同种异体原位移植,接受冷冻卵巢移植的母鼠通过自然交配所生后代作为实验对象进行行为学检测,以正常C57BL/6小鼠为对照。结果:6项经典行为学测试结果显示,卵巢玻璃化冷冻复苏移植后出生的子代小鼠的行为学表现与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:卵巢玻璃化冷冻复苏原位移植可使受体母鼠恢复自然生育能力,其后代在行为学方面未见不良影响,是一种安全的生殖力保存方法。

短尾小鼠脊柱发育形态与病理生理学研究

目的:研究脊柱发育异常疾病模型─短尾小鼠生长发育中的病理生理学特征,并与正常B6小鼠比较,为动物模型开发与应用提供有价值资料。方法:短尾小鼠和B6小鼠分别行脊髓的病理切片和电镜切片观察,且测定2种小鼠的心电图数据和精液品质数据进行比较分析。结果:短尾小鼠脊髓外观形态完整,但神经元密度低于正常B6小鼠;短尾小鼠脊髓超微结构有异常现象;2种小鼠平均心率比较差异有统计学意义(P<0.05〉,短尾小鼠P-R间期比B6小鼠略长,QRS群间期、Q-T间期较短,两者比较差异无统计学意义(P>0.05);短尾小鼠精子活力偏低,两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:短尾小鼠脊髓灰质的前角运动神经元数目略有减少;短尾小鼠髓鞘和线粒体结构存在异常;短尾小鼠心电图有异常现象;短尾小鼠生殖力偏低与精液品质无明显关系。

数量遗传学与动物育种

数量遗传学产生于 2 0世纪 2 0年代 ,它为育种工作提供理论依据 。

SNP标记技术在生命科学中的应用

单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)标记技术已被广泛应用于生命科学的各个研究领域中。概述了SNP标记技术的应用情况。随着分子生物学技术的不断发展,SNP标记技术必将不断改进完善。人们也将会不断地发现更多的SNP标记技术应用于生命科学领域的研究中。

鸡Rbbp5基因的生物信息学分析及过表达载体构建

研究旨在利用生物信息学技术分析Rbbp5基因的生物学特征,构建过表达载体,为研究其在鸡生殖干细胞中的调控模式提供试验材料,以探讨其作为组蛋白甲基化修饰酶发挥作用的具体机制。试验利用多种在线工具分析RBBP5的氨基酸序列、保守结构域、亲疏水性、跨膜结构域和信号肽表达,预测其二级、三级结构,进行互作蛋白的预测;采用双酶切和测序鉴定重组载体pcDNA3.1-Rbbp5-Gst;qRT-PCR验证重组载体在PGCs中的表达。结果显示:RBBP5蛋白含有高度保守的结构域——WD40,内含7段典型的WD40重复序列,其亲水性高、不含跨膜结构域、无信号肽表达,可用以构建过表达载体;同源建模和互作蛋白预测显示RBBP5高度保守,互作蛋白为ASH2L、WDR5、DPY30和MLL2等;双酶切和测序结果表明,Rbbp5成功插入pcDNA3.1载体,未出现移码和突变;qRT-PCR结果显示PGCs中重组载体可使Rbbp5过量表达。结果为探明Rbbp5在鸡原始生殖细胞形成中的功能和机制研究提供了试验素材和理论依据。

构建大鼠类似于人类帕金森病中晚期行为模型的实验研究

目的:探讨建立帕金森病模型过程中的关键步骤,摸索提高模型成功率的方法。方法:选择SD大鼠作为实验动物,随机分组为模型组和空白对照组。使用特异性的神经毒素6-羟多巴胺(6-OHDA)损伤一侧的黑质纹状体纤维,建立帕金森病动物模型,损伤后10d起,用阿朴吗啡可诱发大鼠向健侧旋转。结果:模型组诱发成功率达51%;病理学观察,损伤侧黑质致密部TH免疫阳性细胞、TH免疫阳性纤维严重缺失。空白对照组无旋转现象,病理学观察无异常现象。结论:用6-OHDA注射建立的大鼠帕金森病模型类似于人类帕金森病中晚期行为病理,制作方法科学、可靠、成功率高,可为医学研究提供依据。

角膜混浊小鼠突变候选基因Map3k1克隆与序列分析

对具有角膜混浊表型的B6-Co突变系小鼠突变候选基因Map3k1进行克隆及测序分析,寻找该突变系小鼠Map3k1基因的突变位点。以小鼠Map3k1基因的mRNA、全长及上游5 kb序列设计引物,分别以基因组DNA和mRNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术分段扩增目的基因,将目的片段连接在T载体上,转化至感受态细胞,筛选阳性克隆,质粒DNA分子提取,电泳检测,EcoRⅠ酶切释放目的片段,送上海生工生物工程技术服务有限公司测序。成功扩增出Map3k1基因的20个外显子和上游调控序列,B6-Co小鼠测序结果与基因组数据库序列比对,该基因位于13号染色体第112 559 574的碱基由T突变为A,编码的蛋白质第314氨基酸由亮氨酸变为谷氨酸,但是该基因的表达调控及蛋白质剪切机制仍有待深入研究。

中缅树鼩的实验室驯化

树鼩是一种在医学和生物学上用途广泛的实验动物遗传资源,但目前树鼩的驯化工作还没有大规模开展。通过提供适口的饲料,采用雌雄1:1、1:2两种交配方式,研究了树鼩驯化过程中行为、繁殖性能的改变及子一代部分生物学特征。结果表明,树鼩在对驯化环境适应之后,繁殖性能大大提高,驯化后的树鼩及其子一代体重与驯化前的树鼩相比差异显著,颅长、体长和尾长无显著性差异。可以通过驯化培育出更多符合标准实验动物要求的树鼩。

中国野生鹌鹑起源及亲缘系统的研究

在迁飞滞留季节捕获的微山湖地区野生鹌鹑中随机抽取 3 6只 ,检测编码脏器、肌肉酶型的 1 0个结构基因座上的频率分布 ,搜集国内外 2 0个家鹑和野生日本鹌鹑群体的相同资料 ,应用模式判别方法 ,以家鹑群体为识别对象 ,分别与野生日本鹌鹑和微山湖野生鹌鹑群体进行模糊性识别。研究发现 :就起源系统而言 ,微山湖野生鹌鹑比日本列岛各地的野生日本鹌鹑更接近家养鹌鹑群体。这一研究结果表明 :当代关于鹌鹑原始驯化地域的论断 ,值得重新斟酌 ;

SR92A系黄羽肉鸡与萧山鸡及其杂种后代的DNA指纹分析

本文以EAV(禽内源性反转录病毒片段 )为探针 ,EcoRI为限制性内切酶 ,对萧山鸡、SR92A系及其杂交后代进行了DNA指纹图谱的研究。结果表明 :EAV探针适合于鸡的DNA指纹分析 ,能产生清晰可辩的图谱。平均条带总数为11.384± 0 .84 4 ,两品种间、公母间条带总数均无显著差异。萧山鸡和SR92A系品种内相似系数分别为 0 .5 81、0 .5 11,高于品种间相似系数 (0 .2 31)。杂交后代相似系数为 0 .30 1。

鸡分子标记J带与其产生杂种优势关系的研究

对SR92A系及萧山鸡的J带进行检测,并分类杂交,研究其与杂种优势的关系。结果表明:无J带(-)SR92A系与无J带萧山鸡组合的杂种优势为401.4g,比未对亲本选择时高74.1g;有J带(+)的-/+、+/-、+/+组合平均值为311.2g,比-/-组合低90.2g。因此可推测J带所代表的等位基因可能与亲、子代间差异表达的基因有关。

应用16S rDNA克隆文库法分析B6-Co小鼠角膜炎细菌组成

目的鉴定B6-Co突变系小鼠角膜的病原菌组成,并与人类细菌性角膜炎病原菌组成进行比较分析。方法选取10 d龄B6小鼠和B6-Co小鼠各6只为实验动物,提取小鼠角膜组织刮取物细菌基因组DNA,通过PCR扩增构建16S rDNA克隆文库,采用随机测序法分析B6-Co小鼠角膜细菌组成,B6小鼠作为对照。结果 B6-Co角膜混浊小鼠中共鉴定出20种细菌,隶属于15个属,包括葡萄球菌属、假单胞菌属、链球菌属、微球菌属、棒状杆菌属等。葡萄球菌属和假单胞菌属为优势群,葡萄球菌属丰度为19.7%~53.1%,假单胞菌属的丰度为17.4%~32.8%。其中葡萄球菌属主要是表皮葡萄球菌,丰度为13.8%~20.9%;缓慢葡萄球菌,丰度为14.0%~30.9%;金黄色葡萄球菌,丰度为7.4%~20.3%。此外,棒状杆菌和微球菌也比较常见。10 d龄B6小鼠未检测出细菌。结论 B6-Co突变系小鼠角膜细菌组成与人类角膜炎病原菌相似,是研究人类角膜炎诊断方法、发病机理及临床用药的很好的动物模型。

四个近交品系小鼠的生长繁育状况

目的为了解本中心从美国Jackson实验室引进的四个近交品系小鼠生长繁育的基础数据。方法对四个近交品系小鼠生长繁育过程中的体增长、平均产仔数、交配分娩间隔等生长繁育性能进行统计分析。结果 C57BL／6J、DBA／2J小鼠生长繁育情况与文献报道基本一致;129／ SVJ、A／J两个近交品系小鼠的生长繁育情况国内未见任何报道,可以为科研人员提供有价值的参考。结论本中心的饲养环境、饲养管理水平完全达到这四个近交品系小鼠生长繁育要求。

蛋白磷酸酶2A催化亚基α在小鼠胚胎成纤维细胞迁移中的作用研究

利用体外基因敲除技术检测小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)周期和迁移能力的变化,探究蛋白磷酸酶2A的Cα亚基在MEFs细胞迁移过程中的作用。用Cαfl/fl的纯合子雄鼠与雌鼠1∶2配对,取E12.5d的胚胎制作小鼠胚胎成纤维细胞。利用表达Cre重组酶(Ad-Cre-EGFP)以及GFP荧光蛋白(Ad-EGFP)的腺病毒载体,对P3代MEFs进行感染,分别用PCR,RT-PCR和Western blot方法进行基因型鉴定。同时利用流式分选技术检测感染后MEFs的细胞周期的变化,利用细胞划痕试验检测了其细胞迁移能力的变化。结果显示,胰酶消化的方法成功获得了小鼠胚胎成纤维细胞,DNA,RNA和蛋白水平的鉴定获得了3对3的野生型和基因敲除MEFs。流式分选发现Ad-Cre处理的MEFs与Ad-EGFP处理的MEFs相比,处于G2期的细胞比例为30.8%±2.57%,高于Ad-EGFP MEFs的23.9%±2.46%,并且细胞碎片的比例也远高于后者。划痕试验表明,Cα亚基缺失后细胞迁移能力下降,12h就显著低于对照组。结果表明,腺病毒携带的Cre重组酶能够在体外有效地敲除掉MEFs中的蛋白磷酸酶2A的Cα亚基,PP2ACα亚基的缺失会导致MEFs细胞周期倾向于阻滞在G2期,并会降低细胞迁移的能力。

蛋白磷酸酶2A的Cβ亚基在胚胎成纤维细胞凋亡过程中的作用

为探究蛋白磷酸酶2A的Cβ亚基在胚胎成纤维细胞(MEFs)凋亡过程中的作用,用Cβ+/-的杂合子雄鼠与雌鼠1∶2配对,取胚胎期12.5d(E12.5)的胚胎制备MEFs,用PCR、RT-PCR和Western blot方法进行基因型鉴定。同时对P3代MEFs利用流式分选技术检测其细胞凋亡和细胞周期的变化,并采用Western blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结果采用胰酶消化方法成功获得了MEFs,DNA、RNA和蛋白水平鉴定显示获得了3对3的野生型和Cβ基因敲除MEFs。流式分选发现Cβ基因敲除MEFs和野生型之间细胞分裂期前期(M1期)细胞分别为53.95%±2.81和46.94%±4.17,细胞分裂期后期(M2期)细胞分别为21.14%±2.53和29.83%±3.25。但Bcl-2的蛋白表达量和mRNA表达量没有显著差异。结果表明,虽然蛋白磷酸酶2A的Cβ亚基的缺失并不会导致小鼠胚胎死亡,但Cβ亚基的缺失会轻微影响胚胎成纤维细胞(MEFs)的细胞周期。

泰和乌骨鸡组织器官中黑色素沉积研究

取240、450日龄不同性别的泰和乌骨鸡,对其不同部位的黑色素沉积量按照0～9级标准进行肉眼观察、比较发现,不同日龄间肝脏、颈部肌肉中黑色素沉积差异极显著(P<0.01),肉垂、羽区皮肤、气管、腓骨、胫骨、龙骨上黑色素沉积差异显著(P<0.05);不同性别间十二指肠膜、生殖腺中黑色素沉积差异极显著(P<0.01),耳叶上黑色素沉积差异显著(P<0.05)

哺乳期间树生活规律的初步研究

为了摸索哺乳期间树的生活规律 ,根据其所处的生理阶段提供相应的营养 ,提高仔树的断奶成活率 ,对 19只哺乳期间的树的生活规律进行了初步研究。结果表明 ,哺乳期间树的体重维持恒定 ,采食量增加 ,对饲料中营养成分的吸收率较高。