酵母双杂交系统筛选与狂犬病病毒M蛋白相互作用的宿主蛋白

为筛选人脑cDNA文库中与狂犬病病毒基质蛋白(M蛋白)具有相互作用的蛋白基因,并对阳性克隆进行初步的分析和鉴定。首先构建了含有M基因的诱饵质粒pGBKT7-CVS11-M,并对其进行自激活和毒性检测,然后采用酵母双杂交技术初步筛选出与M蛋白具有相互作用的12个阳性克隆,对阳性克隆进行PCR鉴定及测序分析,并通过酵母回复性试验最终获得3个无重复性克隆,编码的蛋白质分别为TAB2、P4HA2和RCN1。为研究狂犬病病毒M蛋白在致病机制中的作用提供了参考。

抑制性消减杂交技术在细菌活的非可培养状态研究中的应用

在基因分离与克隆中,构建各种cDNA文库是近些年在发现新基因及研究基因功能常用的基础工具之一。其中,抑制性消减杂交技术是一种高效分离差异表达基因的方法,在分离筛选细菌活的非可培养状态与正常菌株差异基因中,应用这种研究方法是研究细菌VBNC状态株毒力、致病性和耐药性及菌株遗传分化关系的重要途径。本文旨在介绍SSH构建消减cDNA文库在原核生物中的应用及对其在细菌VBNC状态新基因筛选中的应用前景进行综合论述,并对其进一步研究提出了展望。

让班规充满人性化教育力量

班规对学生具有规范、约束和指导功能,有的班主任还依据自己的理解和管理目标增设了许多条款。班规制定的初衷虽好,但执行结果却难以尽如人意。一个好的班规应有普遍的教育意义,充满人性化的味道,能够让学生们普遍认同并愿意遵守。班规应能有效地促进学生相互学习、竞争、上进,而不应是仅以"冷冰冰""硬邦邦"的文字出现,硬性命令学生言行却无明显教育成效的"一纸空文"。近年来。

用“形”帮助学生学数学

用"形"帮助学生学数学,就是在数学教学中借助直观的手段给抽象的内容赋以生动的形象,这样使得抽象的数学表述与学生熟悉的直观形象相通,就可以使得抽象的数学具有现实生活的韵律和色彩,使数学教学充满活力,具有魅力.笔者认为,这是数学教学取得成功的有利因素,尤其是对不善于抽象思维、数学兴趣不浓的学生学习数学不失为有效的方法之一.

p58^(IPK)基因RNA干扰载体的构建及鉴定

针对p58IPK基因设计2个靶位点,并根据靶位点合成2对寡聚核苷酸序列,退火后连接到经BglⅡ和HindⅢ双酶切的pSUPER载体上,分别构建抑制p58IPK蛋白基因表达的p58IPK-siRNA1和p58IPK-siRNA2载体并鉴定其功能。重组构建的pSUPER-p58IPK载体经酶切鉴定及基因序列分析,结果表明60个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致。将构建的2个RNAi载体分别转染到293T细胞中,通过Real-time PCR和Western blotting的方法检测其对p58IPK的抑制效果,结果证明p58IPK-siRNA2可显著抑制细胞中p58IPK基因的表达,可为进一步研究p58IPK在禽流感病毒感染中的作用机制奠定基础。

抑制性消减杂交技术在细菌活的非可培养状态研究中的应用

在基因分离与克隆中,构建各种cDNA文库是近些年发现新基因及研究基因功能常用的基础工具之一。其中,抑制性消减杂交技术(SSH)是一种高效分离差异表达基因的方法,在分离筛选细菌活的非可培养状态(VBNC)与正常菌株差异基因中,应用这种研究方法是研究细菌VBNC状态菌株毒力、致病性和耐药性及菌株遗传分化关系的重要途径。文章旨在介绍SSH构建消减cDNA文库在原核生物中的应用及对其在细菌VBNC状态新基因筛选中的应用前景,并提出了展望。

水中活的非可培养状态病原菌检测方法的研究进展

水中存在大量的致病性微生物,严重威胁人类和动物的健康。目前检测病原菌通常采用培养基培养法。但在不良环境下,一些病原菌能够进入"活的非可培养状态"(VBNC),采用培养基培养方法可能无法检测出。文章介绍几种能够进入VBNC状态的水生病原菌和VBNC病原菌检测方法,为建立敏感特异的检测方法奠定基础。