姜黄素调控转录因子FOXP3影响HIV-1感染辅助受体CCR5的作用机制研究

目的:探讨姜黄素通过调控转录因子FOXP3影响HIV-1感染辅助受体CCR5的作用机制。方法:利用生物信息学方法预测并分析转录因子FOXP3与CCR5启动子的结合位点;采用AutoDock 4.2软件对姜黄素与FOXP3进行柔性对接;MTT法检测姜黄素对Jurkat细胞活性的影响;qRT-PCR和Western blot检测不同浓度姜黄素作用于Jurkat细胞后CCR5和FOXP3 mRNA和蛋白表达水平;构建pcDNA3.1-FOXP3真核表达载体;结合转录因子预测结果,运用Overlap PCR法扩增突变型CCR5基因片段,构建突变型CCR5启动子报告载体pFireRluc-Mt-CCR5;利用双荧光素酶报告基因技术验证转录因子FOXP3与CCR5的启动子结合位点。结果:JASPAR转录因子预测结果显示,CCR5启动子区与转录因子FOXP3存在结合位点;分子对接结果显示,姜黄素能够与FOXP3的酶活区域结合;MTT结果显示,姜黄素作用24 h后对Jurkat细胞活性产生抑制作用,IC50为34.48μmol/L;qRT-PCR和Western bot结果显示,不同浓度姜黄素作用于Jurkat细胞后,CCR5和FOXP3 mRNA和蛋白表达水平均降低,且存在剂量依赖性;双荧光素酶报告基因技术证实FOXP3能够与CCR5启动子结合,且转录因子FOXP3可调控CCR5启动子活性;过表达FOXP3后,姜黄素对CCR5的作用结果显示:当姜黄素浓度为60μmol/L时,作用于共转染pcDNA3.1-FOXP3和pFireRluc-Wt-CCR5的HEK293T细胞CCR5启动子荧光素酶活性相对值明显高于pFireRluc-Wt-CCR5+curcumin-60组(P<0.01)。结论:FOXP3能够调控CCR5启动子活性,其作用机制可能是姜黄素通过作用于FOXP3与CCR5启动子结合位点影响CCR5启动子活性。

葛根芩连汤治疗溃疡性结肠炎研究进展

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种慢性复发性的结肠和直肠的炎症性疾病,其典型表现为腹痛、腹泻、黏液脓血便和吸收障碍等,属中医“肠澼”“痢疾”“滞下”“泄泻”“脏毒”等范畴。葛根芩连汤出自《伤寒论》,善清胃肠湿热,亦可调和气血,原方由葛根、黄芩、黄连和炙甘草4味中药组成,是治疗UC的经典良方。临床应用方面,主要通过葛根芩连汤加减、联合其他方剂、联合西药、联合灌肠、联合针灸等方式治疗UC患者,其优势体现在改善肠道黏膜屏障功能损伤,减少肠道炎症反应,缓解腹泻、腹痛、脓血便、里急后重、肛门灼热等症状,降低复发率,减少不良反应等,有效提高了UC患者的生活质量。作用机制方面,葛根芩连汤治疗UC主要与调节自身免疫、降低炎性细胞因子、调节T细胞、抗氧化应激、改善肠道菌群失调,调节IL-6/JAK2/STAT3、TLR4/NF-κB、Notch、Nrf2等信号通路有关。葛根芩连汤中单味药有效成分的研究表明,黄芩苷、黄芩多糖、葛根素、小檗碱、甘草酸二铵、甘草次酸等是治疗UC的主要有效成分。文章检索近年来国内外文献,从临床应用研究和实验机制研究两个方面综述葛根芩连汤治疗UC的研究进展,以期为葛根芩连汤治疗UC的遣方用药及后续研究葛根芩连汤治疗UC的作用机制提供参考依据,发挥中医药治疗UC的优势。

外泌体相关作用因子在结直肠癌诊治中的研究进展

结直肠癌是最常见的消化系统恶性肿瘤之一,且近年来呈现上升和年轻态趋势。针对结直肠癌的治疗,除传统的手术、放疗、化疗等手段外,免疫治疗和靶向治疗已成为当前临床的研究热点,其中肿瘤源性外泌体在结直肠癌诊治过程中的优势逐渐凸显,参与了肿瘤的发生发展、侵袭和转移过程,可作为结直肠癌的诊断标志物、细胞间信息媒介和药物载体,在结直肠癌的免疫治疗和靶向治疗中发挥重要作用。但外泌体(exosome,Exo)在临床应用中还面临着诸多挑战和问题。本文将对Exo在结直肠癌诊治过程中相关因子的作用,包括作为生物标志物、载体功能、介导耐药、免疫调节、促血管生成等功能进行系统性综述,使其更好应用于结直肠癌的早期诊断、治疗和预后监测等,也为其他肿瘤的诊治提供借鉴。

基于课堂派的信息化辅助教学手段在病理学教学的应用

探讨基于课堂派的辅助教学手段在中医院校病理学教学中的应用和效果。随着后疫情时代网络教学的广泛应用和现代教育信息技术的迅猛发展,课堂派、雨课堂、钉钉、腾讯会议等成为大、中、小学开展网络教学必不可少的智慧教学工具。河南省病理与病理生理学优秀基层教学组织在中医院校病理学课程教学中采用课堂派辅助教学,在课前、课中、课后教师可以随时发布相关教学内容,起到了良好的效果。特别是在形成性成绩的考核过程中,极大地凸显了其辅助教学的优势,教师可从多角度、多方面对学生进行全面考核,使形成性成绩的考核更趋便捷、客观和公平。

不同疗程电针对放射性脑损伤模型小鼠学习记忆功能及Notch信号通路的影响

探讨不同疗程的电针干预对放射性脑损伤小鼠学习记忆的影响及其作用机制。60只4周龄雄性C57/BL6J小鼠随机分为空白组、模型组、电针组1(7 d)、电针组2(14 d)、电针组3(21 d)、电针组4(28 d)。除空白组外,其余各组给予X射线(8 Gy,2 min)照射,构建放射性脑损伤模型,电针组给予针刺“百会”、“风府”及双侧“肾俞”穴,并依据分组分别干预7、14、21、28 d。电针结束后,Y迷宫检测各组小鼠学习记忆功能,苏木精-伊红染色法、透射电镜观察海马齿状回(DG)神经元形态、突触超微结构,Western blot检测Notch信号通路Notch 1、Hes 1、ASCL 1的蛋白表达。结果显示:与空白组相比,模型组小鼠学习记忆功能显著下降(p<0.01);海马DG区神经元数量减少,排列紊乱;神经元突触前膜突触囊泡数量减少,突触界面率减小、突触后致密区(PSD)厚度降低、突触间隙增大均有显著差异(p<0.01);与模型组相比,电针各组小鼠的学习记忆功能均显著提高(p<0.05,p<0.01);电针组小鼠DG区神经元数量增多,排列整齐;各组小鼠DG区突触界面率均有显著改善(p<0.01),电针组2、3和4小鼠PSD厚度显著增加(p<0.01),电针组2、3和4的突触间隙显著减小(p<0.01)。与空白组相比,模型组小鼠Notch 1蛋白表达显著升高(p<0.05),Hes 1蛋白表达显著升高(p<0.01),ASCL 1蛋白表达显著降低(p<0.01);与模型组相比,电针组2、3和4的Notch 1、Hes 1蛋白表达显著降低(p<0.05,p<0.01),电针组3和4的ASCL 1蛋白表达显著升高(p<0.05,p<0.01)。提示不同疗程的电针可以改善放射线照射对小鼠学习记忆功能造成的损伤,该作用与改善DG区突触超微结构及调控Notch信号通路相关蛋白的表达有关。

α-细辛醚对食管癌Eca-109细胞线粒体凋亡通路的影响

目的探讨α-细辛醚对人食管癌Eca-109细胞线粒体凋亡通路Cyt-c、Smac及Caspase3 mRNA和蛋白表达水平的影响。方法体外培养的人食管癌Eca-109细胞设为阴性对照组和α-细辛醚组,α-细辛醚终浓度分别为25,50,100μg·m L^(-1),培养48 h后使用荧光倒置显微镜观察细胞凋亡形态改变,采用TRIzol法提取细胞总RNA,实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞Cyt-c、Smac及Caspase3 mRNA的表达,Western blotting检测其蛋白表达,选取β-actin进行相对定量分析。结果α-细辛醚组细胞形态发生明显凋亡改变;与阴性对照组比较,α-细辛醚组细胞Cyt-c、Smac及Caspase3mRNA和蛋白的表达量均明显增加(P<0.05)。结论α-细辛醚可通过调节线粒体凋亡途径相关基因Cyt-c、Smac及Caspase3的表达增加诱导Eca-109细胞凋亡。

GRP78、CHOP在α-细辛醚诱导的Eca109细胞凋亡中的作用

目的:研究葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)在α-细辛醚诱导的人食管癌Eca109细胞凋亡中的作用。方法:采用0.25、0.50及1.00 g/L的α-细辛醚作用于体外培养的Eca109细胞,并以无干预的细胞作为对照。分别于培养后12、24、36、48 h,采用MTT法检测Eca109细胞的增殖抑制情况;采用免疫荧光染色法检测细胞凋亡情况;运用Real-time PCR和Western blot检测凋亡相关基因GRP78和CHOP的表达水平。结果:α-细辛醚对Eca109细胞的增殖具有抑制作用(P<0.05),且具有时间、剂量效应关系。α-细辛醚作用48 h后,GRP78和CHOP mRNA和蛋白的相对表达量明显增加(P<0.05)。结论:α-细辛醚可抑制Eca109细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制与调节内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP表达有关。

纳米载体介导的hTERT反义核酸对食管癌细胞生物活性的影响

目的:研究聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒(polybutylcyanoacrylate nanoparticles,PBCA-NPs,NPs)介导的端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transeriptase,hTERT)基因反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对食管癌细胞EC9706生物活性的影响。方法:采用乳化聚合法制备聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒作为转染寡核苷酸(SODN)的载体,利用激光粒度分析仪和原子力显微镜测定制备NPs的粒径及zeta电位;以NPs介导8条不同hTERTASODN(NPs-ASODNⅠ、NPs-ASODNⅡ、NPs-ASODNⅢ、NPs-ASODNⅣ、NPs-ASODNⅤ、NPs-ASODNⅥ、NPs-ASODNⅦ和NPs-ASODNⅧ)转染食管癌细胞EC9706,采用MTT法检测转染后对EC9706细胞增殖的影响;采用RT-PCR检测hTERTmRNA表达情况;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:所制NPs粒径均匀、zeta电位较高,较为理想;以NPs介导hTERTASODN转染24h时,EC9706细胞增殖被明显抑制,该抑制作用随转染时间的延长和浓度的增高依次增强,与细胞对照组相比有显著差异(P<0.05);且不同ASODN转染后对EC9706细胞抑制率不同。单纯NPs组、正义寡核苷酸NPs-SODN组和单纯ASODN组转染后对EC9706细胞增殖无明显抑制作用(P>0.05)。NPs-ASODN转染EC9706细胞72h时,hTERTmRNA表达水平明显降低,与细胞对照组相比有显著差异(P<0.05)。NPs-ASODN转染72h时,NPs-ASODNⅠ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ转染组EC9706细胞出现明显凋亡现象(P<0.05),而NPs-ASODNⅡ、Ⅲ、Ⅳ转染组EC9706细胞未发生明显的凋亡现象(P>0.05)。结论:聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒可以作为一种良好的基因载体,在其介导下hTERTASODN能有效抑制食管癌细胞EC9706的增殖和hTERTmRNA的表达,并能诱导细胞凋亡。提示该纳米粒作为一种新型纳米载体为食管癌的基因治疗提供了一条新的途径。这种抑制作用具有时间和浓度依赖性,并具有序列特异性,表明hTERT基因不同位点在端粒酶活性中所起的作用可能不同。

黄芩苷抗肿瘤作用研究进展

我国中医理论认为正虚邪积是导致恶性肿瘤发生的原因,即正气内虚、气滞、湿聚、热毒等相互搏结,积聚日久而成有形肿块,是一种全身属虚、局部属实的疾病[1].因而在中医治疗肿瘤的过程中多选择清热泻火、燥湿的药物.黄芩性寒,具有清热燥湿、泻火解毒的功效,黄芩苷是从其干燥根中提取分离出来的一种黄酮类化合物,具有显著的生物活性.过去认为其主要有抑菌、抗炎、抗血栓形成、清除氧自由基等药理作用.但随着近些年国内外学者对黄芩苷发挥药效机制研究的逐步深入,发现其还具有重要的抗肿瘤作用[2],包括控制细胞周期、诱导肿瘤细胞凋亡、降低细胞的转移和侵袭能力、抑制肿瘤血管形成等.现对黄芩苷在胃癌、肝癌、乳腺癌等恶性肿瘤方面近些年的研究进展作一概述,以期进一步深入挖掘黄芩苷在抗肿瘤方面的潜在价值.

以质量工程为契机推进医学实验精品课程建设

随着国家级、省部级和校级＂质量工程＂项目的深入开展,精品课程建设也是其中的重要工程之一,其目的是通过：①整合教学改革成果和优质教学资源。

围绕显微数码互动教学探究病理学实验教学新模式

显微数码互动教学模式作为一种新兴的教学手段越来越多的应用于形态实验教学中,其在提高学生学习的积极性、进行实时教学监控、资源共享、师生互动及改革实验作业和考试等方面体现出了独特的优越性,在病理学实验教学改革活动中,运用显微数码互动教学模式进行病理学实验教学,对形成病理学实验教学新模式,提高病理学实验教学质量有着重要的意义和价值。

开设《医学实验基本操作技能》课程的经验总结

《医学实验基本操作技能》是河南中医学院为适应当前医学高等院校教学改革而编写的一门独立的实验课教材。它将所有有关医学实验的一些基本操作技能有机整合在一起独立开设,给予学生充分的动手机会,从而增强了学生的实际动手操作能力和独立解决问题的能力,培养学生严谨求实的科学态度。

以打造精品为核心 实现优质实验课程资源共享

"精品课程"的建设目标,主要在于提高该门课程的教学质量,同时,也为同行之间的交流起到一个模范带头作用,《医学实验基本操作技能》是一门实践性很强的独立实验课程,将其打造为省级精品课程,目的就是实现其优质课程资源的共享共用。

临床病理讨论教学模式在病理学教学中的应用及效果

通过在病理学教学中开展临床病理讨论,促进学生综合运用以病理学知识为主的多学科知识,主动思考和分析问题,激发学生学习兴趣,提高病理学教学质量。

运用显微数码互动系统提升病理学实验教学效果

运用显微数码互动实验系统和显微示教系统进行病理学实验教学,在教师和学生、学生和学生的互动中,让学生形象直观地全面掌握病理切片的形态结构特征并及时加深对理论内容的理解,是提升病理学实验教学效果的有效途径。

提高中医院校留学生病理学教学效果的探索

医学留学生教育一直是我国高等教育体系中的重要组成部分,特别是中医院校的留学生,多是慕我国中医博大精深之名而来,为了提高来华留学生的教育教学质量,增强我校的国际影响力,笔者结合近几年的留学生病理学教学的实践,分析探讨如何与留学生良好沟通,如何改进教学方法和手段,更好的激发他们的学习兴趣,提高病理学教学效果,为更好的学习后续的中医学课程打下良好的基础,也为提升我院留学生教育教学水平提供借鉴。

α-细辛醚对Eca-109细胞凋亡及XIAP、caspase-3表达的影响

目的:观察α-细辛醚对人食管癌Eca-109细胞凋亡的影响及XIAP、caspase-3表达的变化,探讨α-细辛醚的可能作用机制。方法:Eca-109细胞分为5组,分别给予5-氟尿嘧啶(阳性对照组),25、50、100 mg/Lα-细辛醚(α-细辛醚低、中、高剂量组)处理,或仅给予等体积的培养液(空白对照组)。培养48 h后,行AO/EB染色,荧光倒置显微镜下观察细胞形态,用MTT法、Annexin-V-PI法分别检测细胞增殖和凋亡,用Western blot、实时荧光定量PCR分别检测空白对照组、α-细辛醚中剂量组及高剂量组XIAP、caspase-3 mRNA及蛋白的表达水平。结果:与空白对照组比较,α-细辛醚低、中、高剂量组及阳性对照组细胞的增殖率降低、凋亡率升高(P均<0.05)。与空白对照组比较,α-细辛醚中、高剂量组XIAP mRNA及蛋白的表达均降低,caspase-3 mRNA及蛋白的表达均升高(P均<0.05)。结论:α-细辛醚可下调XIAP的表达、上调caspase-3的表达,从而抑制Eca-109细胞增殖、促进其凋亡。

近红外光响应性多烯紫杉醇主动靶向脂质体的制备及其体外抗肿瘤活性

目的以亲水性纳米硫化铜(PVP/CuS)为光敏剂,甘草次酸(GA)为肿瘤靶向分子,多烯紫杉醇(DTX)为模型药物,制备近红外光响应性多烯紫杉醇主动靶向脂质体(GA-DTX-PVP/CuS-Lip),并研究其理化性质和体外抗肿瘤活性。方法采用薄膜分散法制备GA-DTX-PVP/CuS-Lip,利用透射电镜观察微观形态,激光粒度仪测定粒径和Zeta电位,超滤-离心法测定包封率。结合808 nm激光照射进行光热转换试验,采用透析法进行37℃和45℃下的体外释放度试验,并选择人肝癌细胞SMMC-7721细胞为模型进行细胞抑制率试验。结果透射电镜下观察到GA-DTX-PVP/CuS-Lip为类圆球形结构,大小较为均匀,平均粒径和电位分别为(226.73±0.17)nm和(-4.05±0.57)mV,包封率和载药量分别为(96.33±0.21)%和(6.63±0.39)%。808 nm激光照射下,GA-DTX-PVP/CuS-Lip具有明显的光热转换效应。体外释放度试验结果显示与DTX溶液比较,GA-DTX-PVP/CuS-Lip具有明显的缓释特征,45℃下的释药速度明显高于37℃下的释药速度。细胞实验结果显示,GA-DTX PVP/CuS-Lip结合808 nm激光照射对SMMC-7721细胞的抑制率增高。结论GA-DTX-PVP/CuS-Lip的制备工艺稳定可行,可为进一步进行肿瘤光热化联合治疗提供一定的理论依据。

运用《矛盾论》破解实验教学改革中的矛盾

在实验教学改革活动中,要不断运用《矛盾论》的哲学思想,充分认识矛盾的普遍性,敢于正视矛盾,善于发现矛盾,明确实验教学现状;积极分析矛盾,抓住主要矛盾,探求实验教学"瓶颈",以有效化解矛盾,不断提高实验教学质量。

乳腺癌骨转移实验动物模型研究进展

乳腺癌是女性最常见的肿瘤相关死因,骨體是其最常见的转移组织[1].流行病学显示,大约85%的患者承受着骨转移的痛苦[2].近年来,乳腺癌骨转移日益成为肿瘤领域研究的热点,专家学者对此进行了大量的实验研究以期为乳腺癌骨转移的预防和治疗提供有效方法,本研究查阅近十年相关文献总结乳腺癌骨转移的相关实验动物模型,现将其阐述如下.