刍议标准化肉羊健康养殖与疾病预防技术

近年来,肉羊产业逐渐由过去散养养殖和中小规模养殖,向着标准化集约化方向转变,规范养殖户的养殖场建设行为,加强现代化养殖技术的有效推广应用,加强疾病针对性防范,降低各类传染性疾病的发生流行率,是有效推动肉羊养殖业的高质量发展的重要内容。本文主要结合实际工作经验,探讨了标准化肉羊健康养殖与疾病预防技术,希望对保障肉羊养殖效益有一定帮助。

马尔堡病毒核蛋白的原核表达及纯化

目的以原核表达的方式获得了马尔堡病毒的核蛋白,并纯化。方法将马尔堡病毒核蛋白基因亚克隆到原核表达质粒pET-28(a)中,构建重组表达质粒pET-28(a)-M-NP,并将重组质粒用热休克方法转化BL21(DE3)感受态细菌,用IPTG诱导蛋白表达后,以SDS-PAGE分析表达形式及表达量,并利用His-Band Ni+柱纯化。结果成功构建重组表达质粒pET-28(a)-M-NP,以1.0mmol/L终浓度的IPTG在37℃诱导表达5h后,破菌沉淀中有目的蛋白表达。结论成功表达并纯化了马尔堡病毒的核蛋白,为后续研究奠定了基础。

羊腹泻疾病治疗和预防

羊养殖业发展较为迅速,显著提升了养殖户的收入水平。但羊只饲养过程中,羊腹泻疾病发生频次显著增加。其中,3周龄内的羊只更容易出现腹泻疾病,具有较高死亡率,不仅损害养殖户经济利益,也对地区养殖业的整体发展造成不利影响。为保障羊只健康生长,该文主要针对羊腹泻疾病的发生原因,采取针对性预防和治疗措施,能最大程度降低羊腹泻疾病的发生几率,控制羊腹泻疾病所造成的不良影响。

人畜共患病对从业者的危害及其防控措施

人畜共患病是能在非人类脊椎动物及人类之间进行传播的感染性疾病,其传播过程已不再依赖动物宿主。随着社会的发展,我国出现了几种新增人畜共患病,一些原有人畜共患病出现了感染范围扩大的现象。畜牧兽医工作者的工作性质决定了他们会经常接触畜禽,易引发感染事故。因此,要特别强化畜牧兽医工作者的安全防范意识和个人防护措施,使其掌握充分的疫病防控知识,降低被感染的概率,提高防控效果。

伪狂犬病PCR检测方法的建立

猪伪狂犬病病毒g E基因缺失疫苗已得到世界各地养殖户的普遍认可,使用范围较广。为建立一种快速区别疫苗毒和野毒的检测方法,本试验针对PRV的g E基因序列设计引物。经过各种条件的不断摸索优化,建立了一套敏感度较高、特异性较好的反应体系,适用于临床诊断、流行病学调查及科学研究,对确诊猪伪狂犬病有重要意义。

人畜共患病对从业者的危害及其防控方法探析

传染病防治是目前社会公共卫生服务中需要重点强调的内容,积极的分析传染病的类型、特点,总结科学有效的防治方法非常必要。人畜共患病是传染病中比较特殊的存在,其不仅能够在动物中传播,也可以在人群中传播。人畜共患病直接威胁的人群是与动物密切接触的从业者,比如检验检疫人员、养殖人员以及动物屠宰人员等。简单来讲,人畜共患病对从业者有显著危害,掌握科学的防控方法和策略是非常必要的。文章就人畜共患病对从业者的危害以及防控方法进行讨论,旨在指导实践工作。

埃博拉病毒科特迪瓦型核蛋白的原核表达及纯化

目的通过原核表达获得埃博拉病毒科特迪瓦型的重组核蛋白,并将蛋白纯化。方法将合成的埃博拉病毒科特迪瓦型核蛋白基因亚克隆入原核表达质粒pET-28(a)中,构建重组表达质粒pET-28(a)-C-NP,并将重组质粒转化BL21(DE3)感受态细菌,以IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE分析表达蛋白及表达量,并用利用His-Band Ni+柱进行亲和层析纯化,Western blot和蛋白序列分析鉴定表达蛋白。结果所构建的重组表达质粒pET-28(a)-C-NP序列正确,SDS-PAGE检测到目的蛋白表达,表达蛋白正确。结论成功表达并纯化了埃博拉病毒科特迪瓦型核蛋白,为后续研究奠定了基础。

浅谈RFID技术在“互联网+”现代养猪业中的应用

1＂互联网＋＂现代养猪业与RFID技术 1.1＂互联网＋＂现代养猪业 什么是＂互联网＋＂现代养猪业呢？顾名思义,就是将移动互联网技术、云计算、物联网、大数据等新一代信息技术运用到传统养猪业中去,包括生猪繁育饲养,疫病防控,病死猪无害化处理、保险理赔,生猪屠宰、加工、存储、运输、销售等各个环节。

高致病性猪蓝耳病的诊断实例

河北省邯郸市某规模化猪场的母猪突然死亡,疑似高致病性猪蓝耳病。通过对该猪场死亡猪只的临床情况调查、剖检症状观察和对无症状猪、发病猪、濒死猪的ELISA抗体检测和病原PCR试验检测,确诊该猪场处于高致病性猪蓝耳病的初发期,并有疫情暴发、流行的风险。经过对该猪场饲养管理水平的改进,年后实现了猪场的高致病性猪蓝耳病净化。

邯郸地区猪繁殖障碍病血清学调查

在猪繁殖障碍病中选出高致病性蓝耳病、猪瘟和伪狂犬病作为血清学调查病种,利用间接ELISA法,对采集的864份猪血清样本进行检测。调查结果显示:高致病性蓝耳病抗体检测中,育肥猪抗体表现最优;猪瘟抗体检测中,母猪和公猪(后备公猪除外)抗体表现最优;伪狂犬检测中,保护抗体合格率达94.6%,野毒感染率为39.6%。本调查为猪繁殖障碍病的防控提供了重要的数据支持。

一例鹅大肠杆菌病及其舌下肿瘤混发的诊断

禽大肠杆菌病是现今养禽业中较为常见、危害又较大的细菌性传染病。对养禽业造成了比较大的经济损失。而在兽医临床中通常会忽视对病禽进行肿瘤病的诊断。本文对临床一例鹅大肠杆菌病及其舌下肿瘤混发进行了诊断,旨在为兽医工作者提供相关技术参考。

猪蓝耳病RT-PCR检测方法的建立

本研究针对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的开放阅读框7(orf7)序列设计扩增引物,建立R T-PCR检测方法,既可检测出高致病性蓝耳病,也可检测出蓝耳病经典毒株,提高了蓝耳病的检出率。

甲型H1N1流感病毒HA蛋白的截短表达、纯化及鉴定

构建pET表达载体,通过原核表达系统制备甲型H1N1流感病毒HA的截短表达蛋白,获得纯化蛋白,并分析HA蛋白的反应原性。人工合成A/California/04/2009 H1N1流感病毒HA基因,以其为模板,PCR扩增HA的一部分基因,去除HA蛋白信号肽、跨膜区、胞内区的基因序列,仅扩增HA1和HA2的基因。将扩增的基因构建到pET 28(a)质粒上,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达HA蛋白,并经过Ni-NTA His Bind柱对其进行纯化,SDS-PAGE电泳鉴定HA蛋白的表达,Western blot鉴定HA蛋白的反应原性。通过原核表达获得了HA的截短表达蛋白,并制备了较高纯度的蛋白,Western blot显示HA蛋白具有很好的反应原性,为建立甲型H1N1流感病毒检测技术奠定了基础。

邯郸市规模猪场伪狂犬病现状调查

针对邯郸市规模猪场伪狂犬病的现状进行调查,发现伪狂犬病毒在邯郸市规模猪场普遍存在,gB抗体阳性率达到91.9%,gpI抗体阳性率达到47.9%。非免疫抗体阳性率较高提示猪场应对伪狂犬病予以净化。

SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测埃博拉病毒方法的建立

为了建立一种快速准确的检测埃博拉病毒(EBOV)亚型的方法。本研究根据GenBank中公布的EBOV NP基因序列,通过设计引物和优化反应条件,建立了一种SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法检测EBOV。以体外转录的EBOV RNA为模板进行试验,该方法检测的灵敏度可以达到1.0×102个拷贝/μL,检测范围达到9个数量级为102～1010,可检测5种亚型EBOV。建立的方法对马尔堡病毒(MARV)、登革病毒(DENV)、新疆出血热病毒(XHFV)、乙型脑炎病毒(JEV)、流感病毒(H1N1和H3N2)和猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)E基因组RNA无非特异性扩增。本文将荧光定量RT-PCR技术用于埃博拉病毒的定量检测中,并且建立了EBOV SYBRGreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法。

埃博拉病毒NP蛋白的单克隆抗体制备及抗原肽的定位

埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)是一种能导致人类及脊椎动物出血热的致死性病毒,对公共卫生具有较严重的危害。EBOV的NP蛋白在病毒复制中具有重要作用,也是诊断该病重要的靶蛋白。文中原核表达重组扎伊尔型EBOV的NP蛋白,重组蛋白免疫bal/c小鼠,制备了一株小鼠抗EBOV-NP的单克隆抗体。利用Western blotting方法,该抗体能特异识别真核表达和原核表达的重组EBOV-NP,并能同莱斯顿型(RestonEbola virus,REBOV)、科特迪瓦型(Cote-d’Ivoire Ebola virus,CIEBOV)和本迪布焦型(Bundibugyo Ebola virus,BEBOV)埃博拉病毒产生交叉反应,而不与苏丹型(the Sudan Ebola virus,SEBOV)和马堡型(the Marburgvirus,MARV)埃博拉病毒产生反应。利用突变PCR和Western blotting方法,定位了该抗体识别的抗原决定簇序列,该序列(PPLESD)位于EBOV-NP蛋白的C端583-588aa。生物信息学研究表明,该序列在已经公布的ZEBOV、CIEBOV、BEBOV共16个型和REBOV的4个型中高度保守。研究结果为建立以上各型埃博拉病毒的检测方法提供了工具,也为研究埃博拉病毒复制及致病机理提供了基础。

埃博拉病毒苏丹型核蛋白的原核表达及纯化

将目的基因NP亚克隆入原核表达质粒pET-28(a)中,构建了重组表达载体pET-28(a)-S-NP,然后用重组质粒转化BL21(DE3)感受态细菌,并利用IPTG诱导蛋白表达。将表达的蛋白利用His-Band Ni+柱进行亲和层析纯化,Western-blot鉴定表达蛋白。结果显示,重组质粒经双酶切后可得到与目的片段长度相同的特异性条带;测序结果显示此特异性条带与参考序列完全匹配,没有突变。纯化后的蛋白经SDS-PAGE和Western-blot鉴定,表达正确。结果表明,成功构建了重组表达质粒,且表达产物正确。

邯郸地区规模化猪场猪瘟抗体检测报告

猪瘟是由黄病毒科猪瘟病毒属的猪瘟病毒引起的一种急性、热性、接触性传染病[1],是猪主要繁殖障碍性疾病之一,猪瘟病毒也是猪高热病中的主要病原之一,对养猪业危害极大。目前我国对猪瘟的防控主要以疫苗免疫为主,抗体水平的高低和抗体整齐度是反映免疫效果的重要指标。为了解邯郸地区规模猪场猪瘟抗体水平,特进行了本次试验,现报道如下。1材料与方法1.1样本来源选取邯郸地区13个大、中型猪场。

甲型H1N1流感病毒HA基因在昆虫细胞中的截短表达

目的:利用Bac-to-Bac Baculovirus Expression System表达重组HA蛋白,Western blot及IFA方法鉴定其表达。方法:采用PCR方法扩增A/California/04/2009(H1N1)HA基因,将其克隆到pFastBacHT A载体上,重组质粒pFastBacHT-HA经双酶切及测序鉴定正确后,转化阳性重组载体进入E.coli DH10Bac感受态细胞中,通过Bluo-gal蓝白斑筛选、PCR鉴定获得重组转座子rBacmid-HA。从重组转座子中提取rBacmid-HA质粒DNA转染sf 9昆虫细胞,制备重组杆状病毒。重组杆状病毒感染sf 9细胞表达重组蛋白,Western blot及IFA鉴定重组蛋白表达情况。结论:成功构建了甲型H1N1流感病毒HA基因的昆虫杆状病毒表达载体,该表达载体转染昆虫细胞后制备的重组杆状病毒病毒滴度较高,重组杆状病毒表达的重组蛋白经Western blot及IFA鉴定后具有良好的免疫反应原性。