朝医治疗太阴人发作期与缓解期哮喘的作用机制研究进展

支气管哮喘(Bronchial asthma,BA)是一种气道慢性炎症性疾病,受诸多因素的影响,发病率呈逐年升高趋势^([1]).朝医认为肝肺、脾肾脏器功能失调可导致津液运行不畅、肃降不利、痰湿聚集,引起伏痰内生.痰阻气道,痰随气升,气因痰阻,相互搏击,进而引发哮喘.吸烟、气候变化、尘螨等因素易引发喘息、胸闷、咳嗽和气急等症状^([2]).研究^([3-5])结果显示,气道平滑肌及气道基底膜变厚、炎性细胞渗透、细胞外基质堆积均可导致气道长期反应,从而引发持续的气道高反应性和不可逆的气流阻塞.

Pyrin重组蛋白通过TGF-β1/SMAD及Jagged1/Notch1信号通路减轻慢性支气管哮喘小鼠气道炎症及气道重塑

目的探讨pyrin重组蛋白是否通过抑制转化生长因子β1(TGF-β1)/SMAD及Jagged1/Notch1信号通路缓解卵清蛋白(OVA)诱导的慢性哮喘小鼠气道炎症及气道重塑。方法选取雄性BALB/c小鼠32只,分为4组,每组8只。分别为对照组、OVA模型组、pyrin重组蛋白治疗组(100μg/kg)、地塞米松(DEX)治疗组(1 mg/kg)。ELISA测定各组小鼠肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子的表达,HE染色观察小鼠支气管炎症浸润情况,过碘酸雪夫反应(PAS)染色观察杯状细胞数量变化,Masson染色观察胶原纤维沉积,免疫组织化学染色法观察α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1和Notch1蛋白在肺组织中表达分布情况,Western blot法检测肺组织中α-SMA、上皮钙黏素(E-cadherin)、TGF-β1、SMAD2/3、SMAD7、Jagged1、Notch1、Hes1蛋白水平。结果Pyrin重组蛋白能够改善OVA诱导的支气管哮喘小鼠气道炎症反应,抑制杯状细胞的增生及胶原纤维沉积,降低BALF中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-4、IL-13含量,抑制肺组织中TGF-β1、SMAD2/3、Jagged1、Notch1、Hes1、α-SMA的蛋白表达。结论Pyrin重组蛋白通过下调TGF-β1/SMAD及Jagged1/Notch1信号通路减轻哮喘小鼠气道炎症及气道重塑。

牛蒡子苷元通过SIRT1/NLRP3途径减轻哮喘小鼠气道炎症

目的探讨牛蒡子苷元对哮喘小鼠模型中对气道炎症的疗效以及其机制是否与SIRT1/NLRP3信号通路有关。方法选取40只♀清洁级BALB/c小鼠,分为control组,OVA模型组,ATG组(5、10和20 mg·kg^(-1))。HE及PAS染色法观察肺组织病理改变;Diff-Quick染色法对小鼠BALF中细胞分类及计数;流式细胞术测定小鼠肺组织中细胞因子在CD4阳性细胞群中的阳性比例;Western blot测定肺组织SIRT1、NLRP3、caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白表达;免疫荧光法检测小鼠肺组织中NLRP3荧光强度。结果牛蒡子苷元能抑制OVA诱导的炎症细胞的渗出及杯状细胞增生;牛蒡子苷元抑制小鼠肺泡灌洗液中总细胞数及NEU、EOS、LYM的生成,并升高肺组织中IFN-γ水平的同时降低IL-4的水平;Western blot结果显示,牛蒡子苷元增加SIRT1蛋白表达同时抑制NLRP3、caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白表达;免疫荧光结果显示,牛蒡子苷元可以减弱肺组织NLRP3的荧光强度。结论牛蒡子苷元通过SIRT1/NLRP3途径减轻哮喘小鼠气道炎症。

强流脉冲相对论电子束加速器——闪光二号

本文介绍了在西北核技术研究所建成的一台低阻抗脉冲电子束加速器——闪光二号。它主要用于核辐射效应模拟。加速器系统由Marx发生器、水介质同轴线和二极管三大主机部件以及十几个配套设备所组成。文中给出了在允电电压±55kV和±70kV两个电压等级下调试和运行的结果。最大输出电流600kA,管电压1.2MV。目前该加速器已用于电子束和X射线的实验研究。

川芎嗪通过AMPK/NF-κB和Nrf-2/HO-1途径减轻过敏性气道炎症和氧化应激的实验研究

目的本研究旨在探讨川芎嗪对过敏性炎症反应和氧化应激的影响,并探讨其机制是否与AMPK/NF-κB和Nrf-2/HO-1信号通路有关。方法用组织化学染色来观察小鼠肺组织病理学改变;小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中炎症细胞数量用Diff-quik染色法检测;用ELISA法检测BALF中各种细胞因子和IgE的含量以及SOD,CAT活性和MDA表达水平;免疫荧光法检测p-AMPK和NF-κBp65在肺组织中表达水平;免疫组化法检测Nrf-2和HO-1在肺组织中表达水平;肺中的AMPK、p-AMPK、NF-κBp65、Nrf-2和HO-1蛋白进行定量分析采用Westernblot方法。结果哮喘小鼠模型中,川芎嗪可减少炎症细胞的渗出和浸润,抑制杯状细胞增生。川芎嗪治疗后,哮喘小鼠BALF中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-13和IgE等蛋白表达水平明显降低,而干扰素-γ(IFN-γ)的表达增高。川芎嗪治疗后可使哮喘小鼠BALF中SOD和CAT活性升高,而MDA表达水平降低。川芎嗪也可降低OVA诱导哮喘小鼠NF-κBp65的表达,增加p-AMPK、Nrf-2和HO-1的表达。结论川芎嗪可以改善哮喘小鼠气道炎症反应和氧化应激,其机制可能与AMPK/NF-κB和Nrf-2/HO-1信号通路有关。

靶向DEK适配体DTA-64可通过阻断TGF-β1信号通路抑制支气管哮喘小鼠气道上皮细胞的上皮间质转化

目的 本研究旨在探讨靶向DEK适配体64(DTA-64)对卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠气道炎症和EMT的抑制作用。方法 选取雌性BALB/c小鼠32只(8周龄),随机分为PBS组、 OVA模型组、 DTA-64组(1μg/只)和对照适配体组,每组8只。肺组织HE染色检测气道周围炎性细胞浸润,免疫组织化学染色检测气道周围DEK表达;ELISA检测血清IgE以及支气管肺泡灌洗液(BALF)的2型辅助T(Th2)细胞因子白细胞介素4(IL-4)、 IL-5、 IL-13以及Th1细胞因子γ干扰素(IFN-γ)水平。Western blot法检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、兔抗锌指转录因子(Snail+Slug)、波形蛋白(vimentin)和上皮钙黏素(E-cadherin)相关蛋白以及转化生长因子β1/Smad(TGF-β1/Smad)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的蛋白表达;流式细胞术检测肺单细胞悬液中α-SMA,探讨DTA-64对哮喘EMT和气道重塑中的作用机制。结果 DEK蛋白在哮喘模型小鼠肺组织高表达,在DTA-64组中低表达;DTA-64能够降低气道周围嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的浸润,下调血清OVA特异性IgE和BALF中IL-4、 IL-5、 IL-13水平,上调IFN-γ水平;DTA-64还能降低肺组织vimentin、α-SMA、 Snail+Slug表达,上调上皮标志物E-cadherin表达;DTA-64能抑制TGF-β1及其下游经典通路Smad2/3、 Smad4表达,以及非经典通路ERK1/2、 p38 MAPK、 JNK和PI3K/AKT/mTOR的磷酸化水平。结论 DTA-64可能通过阻断TGF-β1/Smad、 MAPK、 PI3K信号通路抑制OVA诱导的哮喘小鼠气道炎症和EMT的进程,从而抑制哮喘气道重塑。

隐丹参酮通过抑制p38 MAPK/NF-κB通路改善哮喘气道炎症

目的探究隐丹参酮(CTS)对哮喘小鼠气道炎症的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将50只雌性BALB/c小鼠随机分为5组:生理盐水对照组(Control)、OVA哮喘组(OVA)、CTS低剂量组(CTS 50)、CTS高剂量组(CTS 100)、地塞米松阳性对照组(DEX),每组10只。建立卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)诱导的哮喘小鼠模型,分别用50 mg·kg^-1、100 mg·kg^-1 CTS及10 mg·kg^-1地塞米松腹腔注射处理各组小鼠,对照组用等量生理盐水代替。末次激发24 h后处死小鼠,取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺脏。以Diff-Quick染色对小鼠BALF中炎症细胞进行分类计数;ELISA法检测小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13含量;小鼠肺石蜡包埋,切片,行HE和PAS染色,观察小鼠肺组织的病理学改变;Western Blot观察核因子(NF)-κB p65表达水平,以及IkB-α、p38 MAPK磷酸化水平。结果 CTS显著减少哮喘小鼠BALF中炎症细胞数量,并降低小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13含量(P<0.05);CTS显著抑制肺组织中炎症细胞浸润、杯状细胞增生及黏液分泌;CTS抑制NF-κB p65活化并抑制IkB-α、p38 MAPK磷酸化(P<0.05)。结论 CTS可抑制哮喘小鼠气道炎症,其机制可能与抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路有关。

虎杖苷对实验性哮喘小鼠气道炎症的影响及其机制

目的:探讨虎杖苷(PD)对卵清蛋白(OVA)诱导哮喘小鼠气道炎症的影响,阐明其可能作用机制。方法:将50只雌性BALB/c小鼠随机分成对照组,OVA组和低、中、高剂量PD组,每组10只。采用OVA致敏及激发制备实验性小鼠哮喘模型。于实验第1、7和14天采用OVA+Al(OH)3混合液腹腔注射致敏小鼠。从第21天起,低、中和高剂量PD组小鼠分别腹腔注射15、30和45 mg·kg-1PD治疗液,对照组和OVA组小鼠采用生理盐水代替。每次给药1 h后,OVA组和各剂量PD组小鼠连续采用3%OVA雾化激发,对照组小鼠采用生理盐水代替。HE和PAS染色法观察各组小鼠肺组织病理形态表现,Diff-Quick法检测各组小鼠肺泡灌洗液中(BALF)细胞总数和嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数,ELISA法检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素5(IL-5)和白细胞介素13(IL-13)水平,免疫组织化学染色法观察各组小鼠肺组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)及核因子κB(NF-κB)p65表达情况,Western blotting法检测各组小鼠肺组织中SIRT1和乙酰化NF-κB p65蛋白表达水平。结果:与对照组比较,OVA组小鼠气管壁增厚,气道周围大量炎症细胞浸润,杯状细胞明显增生;与OVA组比较,各剂量PD组小鼠上述表现改善。与对照组比较,OVA组小鼠BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数明显增多(P<0.05),IL-4、IL-5和IL-13水平明显升高(P<0.05);与OVA组比较,中和高剂量PD组小鼠BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞减少(P<0.05),IL-4、IL-5和IL-13水平降低(P<0.05)。与对照组比较,OVA组小鼠肺组织中SIRT1和NF-κB p65及乙酰化NF-κB p65蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与OVA组比较,中和高剂量PD组小鼠肺组织中SIRT1乙酰化水平升高(P<0.05),NF-κB p65和乙酰化NF-κB p65蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:PD能减轻哮喘小鼠气道炎症,其作用机制可能与SIRT1/NF-κB通路有关联。

蓝萼甲素通过HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路缓解卵清蛋白诱导的哮喘小鼠气道炎症

目的探讨蓝萼甲素(GLA)对卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠模型中气道炎症的治疗作用,以及其机制是否与HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路相关。方法选取雄性BALB/c小鼠40只,分为5组(每组8只),分别为正常对照组、模型组、蓝萼甲素10 mg/kg组(GLA-L)和40 mg/kg组(GLA-H)、地塞米松阳性对照组(Dex 1 mg/kg)。HE及PAS染色法观察小鼠肺组织的炎症浸润情况及杯状细胞数量变化;Diff-Quick染色法对小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中各类细胞计数;ELISA法检测小鼠BALF中炎性及促炎细胞因子的含量;Western印迹法检测肺组织HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κB(nuclear)和NF-κB(cytosol)表达;免疫组化法检测小鼠肺组织中HMGB1、TLR4、NF-κB p65蛋白表达水平。结果GLA能减少OVA诱导的哮喘模型肺组织中炎症细胞渗出及杯状细胞增生,可明显降低哮喘小鼠BALF中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞计数,并降低促炎细胞因子的水平(均P<0.05);Western结果显示,GLA抑制HMGB1、TLR4、MyD88及NF-κB(nuclear)的蛋白表达(P<0.05);免疫组化结果显示,GLA可减少肺组织中HMGB1、TLR4、NF-κB p65蛋白表达(P<0.05)。结论GLA可能通过干预HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路改善OVA诱导的哮喘小鼠气道炎症。

芝麻素通过AMPK/NLRP3信号通路缓解哮喘小鼠气道炎症的作用机制

目的探讨芝麻素通过AMPK/NLRP3信号通路缓解卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱导的哮喘小鼠模型的气道炎症。方法将40只雄性清洁级Balb/c小鼠,随机分为5组,分别为正常组(control)、OVA模型组、芝麻素低剂量组(50 mg/kg)、芝麻素高剂量组(100 mg/kg)、阳性对照地塞米松(dexamethasone,DEX)治疗组(1 mg/kg),每组8只。使用Diff-Quick染色法对每组小鼠肺泡灌洗液(BALF)中的各种炎症细胞进行分类、计数;小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ的含量使用ELISA法进行检测;流式细胞术测定小鼠肺组织CD4阳性细胞群中细胞因子的阳性百分率;对各组小鼠的肺组织进行HE、PAS染色,并观察其病理学改变;对小鼠肺组织进行免疫组织化学染色,观察NLRP3蛋白的表达分布情况;Western blot方法检测AMPK、p-AMPK、NLRP3、Caspase-1、ASC和IL-1β蛋白表达水平。结果芝麻素能够减少OVA引起的哮喘小鼠BALF中各种炎症细胞数量,降低小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13的含量,提高IFN-γ的表达水平。通过芝麻素治疗后可抑制哮喘小鼠肺组织中炎性细胞浸润和气道上皮杯状细胞产生和黏液分泌,增加肺组织中p-AMPK的表达,降低NLRP3、Caspase-1、ASC和IL-1β蛋白表达,在哮喘小鼠肺组织中,Th2细胞因子IL-4水平降低,Th1细胞因子IFN-γ水平升高,恢复Th1/Th2平衡。结论芝麻素可以减轻哮喘小鼠气道炎症反应,其机制可能与AMPK/NLRP3信号通路有关。

对草苁蓉环烯醚萜苷抑制人肝癌细胞进行上皮-间质转化机理的研究

目的:探讨草苁蓉环烯醚萜苷(IGBR)抑制人肝癌细胞(SMMC-7721)进行上皮-间质转化(EMT)的机理。方法:对SMMC-7721进行体外培养。将经体外培养的SMMC-7721分为对照组、模型组和IGBR组。为对照组SMMC-7721使用RPMI培养基进行造模,为模型组SMMC-7721使用TGF-β1进行造模,为IGBR组SMMC-7721使用TGF-β1+IGBR进行造模。对三组SMMC-7721模型进行划痕实验和WesternBlot蛋白定性和半定量实验。然后,比较三组SMMC-7721的细胞形态学变化、细胞的迁移能力及E-cadherin蛋白表达的水平和N-cadherin蛋白表达的水平。结果:与对照组SMMC-7721相比,模型组SMMC-7721发生迁移的细胞数更多,P<0.05。与模型组SMMC-7721相比,IGBR组SMMC-7721发生迁移的细胞数更少,P<0.05。与对照组SMMC-7721相比,模型组SMMC-7721中E-cadherin蛋白的表达水平显著降低,其中N-cadherin蛋白表达的水平显著增加;与模型组SMMC-7721相比,IGBR组SMMC-7721中E-cadherin蛋白表达的水平有所增加,其中N-cadherin蛋白表达的水平有所减少。结论:IGBR可以抑制SMMC-7721进行上皮-间质转化,其作用机制与E-cadherin蛋白表达的上调及N-cadherin蛋白表达的下调有关。

蓝萼甲素通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路减轻肥大细胞脱颗粒引起的过敏反应

研究蓝萼甲素(glaucocalyxin A,GLA)对肥大细胞介导的过敏反应的影响。动物福利和实验过程均遵循延边大学动物伦理委员会的规定。动物实验采用BALB/c小鼠耳部皮内注射anti-DNP-IgE(anti-dinitrophenylimmunoglobulin E)致敏,尾静脉注射DNP-HSA(human serum albumin)和4%伊文思蓝混合液激发制备动物皮肤被动过敏反应(passive cutaneous anaphylaxis,PCA)模型,收集双耳用于测量染料着色和组织学。细胞实验选用大鼠腹腔肥大细胞(rat peritoneal mast cells,RPMCs),分为对照组、IgE+antigen(Ag)组和IgE+Ag+GLA组,测定组胺释放以及钙内流水平。Western blot法检测高亲和力IgE受体(FcεRI)介导的信号通路蛋白及HMGB1/TLR4/NF-κB(high mobility group box 1/toll like receptor 4/nuclear transcription factor kappa B)信号蛋白。动物实验结果提示,GLA抑制小鼠PCA反应,减少伊文思蓝染料渗出,减轻耳朵炎症反应及耳朵厚度。细胞实验结果提示,GLA能减少组胺释放及钙离子内流,并抑制肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-4、IL-13和IL-1β生成;Western blot实验结果显示GLA可抑制FcεRI介导的脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)、Lck/Yes新型酪氨酸激酶(Lck/Yes novel tyrosine kinase,Lyn)、酪氨酸激酶Fyn(tyrosine kinase,Fyn)、生长因子受体结合蛋白2(growth-factor receptor-bound protein 2,Gab2)和磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1,PLCγ1)的磷酸化水平,同时GLA抑制HMGB1/TLR4信号通路使NF-κB p65核转移受限。结果表明,GLA通过HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路抑制肥大细胞脱颗粒并减轻过敏性炎症。

PCT等临床指标在鉴别肿瘤晚期患者感染性发热与肿瘤热中的意义

目的探究PCT等临床指标在鉴别肿瘤晚期患者感染性发热与肿瘤热中的意义,指导临床感染预防和治疗。方法收集52例肿瘤晚期感染性发热患者和29例肿瘤热患者临床资料,鉴定患者感染病原菌并分析主要病原菌耐药性。监测患者临床指标,并进行统计学分析。结果肿瘤晚期感染性发热患者年龄和体温分别为(45.21±9.67)岁和(38.98±4.40)℃,肿瘤热患者年龄和体温分别为(42.44±7.57)岁和(39.15±8.81)℃,差异均无统计学意义(t=1.415,0.408,P均>0.05)。肿瘤晚期感染性发热患者PCT、hs-CRP、WBC、NETU计数和NETU百分率(%)分别为(2.20±1.51)ng/ml、(92.44±15.46)mg/L、(14.64±3.06)×10~9/L、(8.62±1.42)×10~9/L和(72.96±5.67)%;肿瘤热患者分别为(0.19±0.09)ng/ml、(63.04±10.23)mg/L、(9.24±2.74)×10~9/L、(5.44±1.35)×10~9/L和(70.15±3.27)%,差异均有统计学意义(t=7.227、10.711、6.955、7.086和2.871,P均<0.05)。肿瘤晚期肺部感染发热患者PCT为(1.22±0.34)ng/ml,泌尿系感染为(0.79±0.15)ng/ml,腹腔感染为(0.52±0.10)ng/ml,血液感染为(3.34±0.31)ng/ml;肿瘤晚期感染发热患者共分离病原菌41株,其中包括肠球菌属、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、其他病原菌分别为10、9、8、6、3、2、1和2株。肠球菌属对克林霉素、庆大霉素、氨苄西林、环丙沙星的耐药率分别为70.00%、50.00%、40.00%和20.00%,对替加环素仍敏感。结论肿瘤晚期感染发热患者感染病原菌以肠球菌属为主,临床治疗中可首选替加环素。PCT等临床指标在鉴别肿瘤晚期患者感染性发热与肿瘤热中有指导意义。