木糖代谢基因表达水平对酿酒酵母重组菌株产物形成的影响

以Ｅ．ｃｏｌｉＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ穿梭质粒ＹＥｐ２４为骨架，将树干毕赤酵母（ＰｉｃｈｉａｓｔｉｐｉｔｉｓＣＢＳ６０５４）的木糖还原酶（ＸｙｌｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅＸＲ）基因ＸＹＬ１及木糖醇脱氢酶（ＸｙｌｏｌｉｔｏｌｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅＸＤＨ）基因ＸＹＬ２分别以不同的相对表达方向置于酿酒酵母的乙醇脱氢酶Ｉ（ＡＤＨ１）启动子和磷酸甘油激酶（ＰＧＫ）启动子下，构建不同ＸＹＬ１及ＸＹＬ２的重组质粒。这些重组质粒分别转化酿酒酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＨ１５８）受体菌。得到的重组菌株表现出不同的基因表达水平，ＸＲ与ＸＤＨ的酶比活力比值即ＸＲ／ＸＤＨ的变化范围在００６～１７５之间。当ＸＹＬ１或ＸＹＬ２受ＰＧＫ１启动子控制同时位于ＡＤＨ１启动子下游时，检测到最高的酶比活力。为了加强对木糖的利用，在ＸＹＬ１、ＸＹＬ２基因的酵母重组菌株中又引入磷酸戊糖途径中的转醛酶（Ｔｒａｎｓａｌｄｏｌａｓｅ）基因ＴＡＬ１及转酮酶（Ｔｒａｎｓｋｅｔｏｌａｓｅ）基因ＴＫＬ１，使酵母菌在原有水平的基础上超表达合成转酮酶及转醛酶。同时具有ＸＹＬ１和ＸＹＬ２以及超表达基因ＴＡＬ１、ＴＫＬ１的酵母重组菌株可以在木糖为唯一碳源平板?

黄孢原毛平革菌合成木素过氧化物酶的营养调控

本文研究了营养条件对黄孢原毛平革茵(Phanerochale chrysosporium)ME-116合成木素过氧化物酶及其同工酶组分的影响.在最适培养条件下获得1500U/L的酶活.高效液相色谱分离的5个同工酶组分中以P_2组分含量最高.低碳高氮培养基最适于酶的合成.降低氮和KH_2PO_4含量致使各组分含量下降,而改变MgSO_4和CaCl_2浓度对P_2组分无影响.表面活性剂吐温80主要通过提高细胞膜透性而增加酶的合成.黎芦醇对5种同工酶组分的合成均有诱导作用.培养基中各营养因子对木素过氧化物酶的合成存在着复杂的交互作用.

曲霉与木霉纤维素酶系基因组的属间遗传表达相容性

选用三类典型重组子3a、3b、A7-1和双亲本菌株AspersillusnigerAMSH、TrichodermareeseiQM9414为材料，按照所设计的纤维素酶系基因的通用序列和同工酶分型方法，进行基因组DNA指纹和酶系同工酶多态性比较分析。旨在提供重组子中基因重组的分子证据，阐明远缘双亲本基因组间的遗传表达相容性，并讨论其杂种优势的分子基础。结果发现重组子中基因组DNA指纹的重组特征稳定遗传，并能够相容性增强表达重组后的羧甲基纤维素酶（CMCase）和β-葡萄糖苷酶（βGLase）同工酶组分。纤维素酶系杂种优势的分子基础多样性包括：（1）3b中来自于双亲本部分编码βGLase的基因的杂合迭加和增强表达；（2）3a和A7-1中对应继承双亲本部分编码CMCase和βGLase的基因间协调性增强表达，并导致相应酶组分蛋白合成量的显著增加。由此综合提出了一个由βGLase介导的纤维素酶系活性调节和诱导合成调控的“双重协同增效”模型。此外还建立了考察重组子中杂种优势分子基础及其遗传稳定性的可行方法。

黄单胞菌β-葡萄糖苷酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达

采用乌枪法,以质粒puc9为载体,大肠杆菌JM83为宿主菌,克隆了纤维素降解细菌野油菜黄单胞菌的β-葡萄糖苷酶基因。对克隆株的酶学性质分析表明,其β-葡萄糖苷酶的PNPG活力只有原出发菌株的72％,酶切电泳结果显示,在载体puc9上插入的外源片段大小为4.4kb。

具有厌氧分解原油能力的一株Microbacterium 91A

从大庆油田油井产出油水混合物中分离到一株Microbacterium 91A。该菌株为革兰氏阳性,不形成芽孢的好氧菌。它能在72℃牛奶中存活18min,并不能还原硝酸盐。在以刃天青作为氧化还原电位指示剂的严格厌氧条件下,菌株Microbacterium 91A生长在含有0.04% Tween 80的无机盐培养基中,分别以大庆原油和正壬烷作为唯一碳源,40℃接床培养25天,用气相色谱和质谱检测到了代谢产物4-甲基-2.6-二特丁基苯酚的存在。

木素生物降解的研究进展

综述了近十年来木素生物降解的研究进展，系统地概述了木素的结构、存在与合成，参与木素降解的微生物与酶以及木素的生物降解机制与应用前景．并就各种不同观点进行了讨论．

尝试利用R-Q对应因子分析识别分群融合子代

在特定融合组合的子代群体中,以不同姊妹菌株作为观察样本(n=N),以蛋白质电泳全部谱带泳动率作为指标(p=P),则所对应的谱带光密度扫描峰面积作为其观测值(X)(当某菌株缺乏某条带时,其峰面积记为零),利用R-Q对应因子分析程序,解析这个数据矩阵(X_(nxp))。能够在同一标度的因子平面上考察这一特定融合重组事件发生后,姊妹菌株间和各菌株肉蛋白质谱带位置与含量间以及它们相互之间的多重内在联系,从而推断子代群体与亲本的遗传继承关系。并由此来识别和分群姊妹菌株。这种探索具有拓展数值分类能力和指导融合育种实践的意义。

α-乙酰乳酸脱羧酶的基因克隆及在大肠杆菌和酿酒酵母中的表达

以ｐＵＣ１９质粒为载体，以Ｅ． ｃｏｌｉ ＪＭ１０９为受体，构建了含α一乙酰乳酸脱羧酶（α－ＡＬＤＣ）基因的地衣芽孢杆菌 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＳ１０１０６的基因文库，得到４８００个重组转化子中均含有４～１０ｋｂ的外源插入ＤＮＡ片段。从基因文库中筛选到６个阳性克隆，对其中１个克隆的α－乙酰乳酸脱羧酶基因片段进行亚克隆分析表明，该α－乙酰乳酸脱酶基因位于１．６ｋｂ的ＢａｍＨＩ－ＥｃｏＲＩ片段上。对其研究发现，α－乙酰乳酸脱酶基因在大肠杆菌中表达产生的乙酰乳酸脱羧酶在最适反应温度和ｐＨ值等与供体菌的酶活相当。利用大肠杆菌和酵母菌穿梭质粒ｐＹＥＳ２为载体，可以将α－乙酰乳酸脱羧酶基因引入酿酒酵母中，从而使重组酵母菌株具有降解啤酒发酵中生成的α－乙酰乳酸，减少双乙酰含量的能力。

绿色木霉产生的葡萄糖苷酶类

由绿色木霉(Trichoderma viride)A10菌株的粗酶制剂中分离纯化得到 6个β-葡萄糖苷酶组分,对它们的物理、化学性质和对20种糖苷类化合物的水解作用进行了测试。其中5个组分都是既能水解β-构型的糖苷化合物,又能水解α-构型的糖苷化合物,表明它们对α-、β-异头专一性的要求并不象文献中报导的那样十分严格,对糖基和糖苷配基专一性的要求也并不十分严格。由此,对葡萄糖苷酶类的命名分类方法提出了讨论,并对在纤维素酶系研究中纤维二糖酶活力的检测方法进行了讨论。

具有厌氧分解原油能力的一株BacillusD76

从大庆油田生产井中分离到一株BacillusDC76.该株菌为革兰氏阳性、能形成内生芽孢的菌株,具有还原销酸盐的能力,接触酶阳性。BacillusD76在以最终浓度为4%的大庆原油作为唯一碳原的无机盐场养基上,应用Hungate严格厌氧技术,40℃,150r/min培养25天,质谱分析检测到了丁酸和1,2,3,4-四甲基-5-异丙基苯的产生。该株菌在好氧条件下也能同化原油。

生孢噬纤维粘菌M229内切葡聚糖酶基因的克隆与表达

生孢噬纤维粘菌(Sporocytophaga)M229可产内切葡聚糖酶(CMCase),外切葡聚糖酶(Avicelase)和β-葡萄糖苷酶(pNPGase)。以质粒pUC8为载体,采用CMC-刚果红法从M229中分离到了一个CMCase基因,导入E.coli JM83中后,其表达CMCase的活力为1.2×10-2mU/mgpr,最适作用pH和温度分别为6—7和40—50℃。限制性图谱及亚克隆分析暗示,该CMCase结构基因内部含PstI位点。

纤维素酶基因克隆及应用前景

<正> 纤维素占植物总干重的30％～50％,是地球上分布最广、含量最丰富的碳水化合物。据报道,全球每年通过光合作用产生的植物物质高达1.55×10~9吨,其中89％尚未被人类利用。我国纤维素资源也很丰富,仅农作物秸杆、皮壳一项,每年即可达数亿吨。纤维素的利用与转化对于解决前世界能源危机,粮食短缺、环境污染等问题具有重要意义。

绿色木霉的内切葡聚糖酶在纤维素水解中作用机制的研究

对由绿色木霉(Trichoderma viride A 10)菌株的粗酶粉中分离纯化得到的17个内切葡聚糖酶的某些物理、化学性质和对5种纤维性材料的水解作用进行了研究,当它们分别作用于5种结晶度和聚合度不同的纤维性材料时,表现的比活力值是高度相关的,纤维材料的物理性质对酶的比活力有重要影响.在葡聚糖纤维二糖水解酶协同下,它们都能水解棉纤维但当它们共同作用于棉纤维素时,却只有9个组分的主效应是显著的.进一步的研究表明,酶的浓度效应在各组分间的协同作用中有重要影响.对纤维素酶解利用研究的策略提出了讨论.

绿色木霉产生的糖苷水解酶类

利用微生物的纤维素酶水解纤维素为可溶性糖类的研究是具有广泛应用前景的工作,但由于在植物残体中纤维素总是与半纤维素、木素以及甘露聚糖、果胶等聚合物形成复杂的高聚物,因而任一单独的酶类都不能对其进行有效的酶解。通常都需用物理、化学方法脱除半纤维素、木素之后,纤维素始可被有效酶解。但是,这类预处理方法又有成本高,能耗大,副产物不易被利用等缺点,因此,利用多种糖苷酶类对植物材料进行全组分水解,以实现生物量的全利用,被认为是解决上述难题的合理途径。

酿酒酵母两种不同嗜杀菌株的比较研究

以酿酒酵母两种不同类型的嗜杀菌株SK4（K1型）和ERRI（K2型）为材料，分析了不同嗜杀酵母的嗜杀特性，两株嗜杀酵母具有相互杀死作用，其嗜杀活性与菌体生长有关。SK4和ERRI的嗜杀质粒的比较表明：M1－dsRNA质粒和M2-dsRNA质粒分子量分别为1．7kb和1．5kb，两株菌的L－dsRNA质粒均为4．0kb。用高温和紫外线处理嗜杀酵母，嗜杀活性随之消失，消除菌中的M－dsRNA质粒也相应消失，嗜杀活性的消除率随菌株和消除剂的不同而变化。实验证明两株菌产生的毒素蛋白的最适嗜杀作用条件不同，最适pH和温度分别为4．8、16℃和4．0、22℃，但两种毒素蛋白均对在对数生长期的敏感细胞作用最显著。

厌氧条件下分解烃的一株Bacillus 91C

从大庆油田生产井中分离到一株革兰氏阳性、产生芽孢的Bacillus 91C。这株菌能够还原硝酸盐,形成结晶糊精,并且接触酶为阳性。 40℃应用Hungate严格厌氧技术,摇床培养(150r/min),菌株Bacillus

产木聚糖酶菌株的选育及其液体发酵条件

从土壤中筛出一株生长快产木聚糖酶活力较高的黑曲霉(Aspergillus niger)C-2菌株,经紫外线和甲基磺酸乙酯诱变,获得一突变株 An-76,其生长减缓,孢子形成能力减弱,产生的木聚糖酶和β-木糖苷酶活力分别可达353.6IU/ml 和4.5IU/ml。测定了 An-76的正常产酶曲线,研究了麸皮、氮源、碳源及半纤维素浓度对产酶的影响。最适培养条件为:起始 pH6.0、28℃、96h。酶的最适作用条件为50-55℃,pH4.8,在 pH1.2—11.4范围内稳定。酶的热稳定性较差,55℃保温1小时,剩余活力为40%。只有在含木糖苷类物质存在时,An-76才大量合成木聚糖酶。

黄单胞菌(Xanthomonas campestris)XA5-5β-葡萄糖苷酶基因的克隆与表达

以黄单胞菌(Xanthomonas campestris)XA5-5为供体菌,广泛寄主质粒pRK404为载体,在大肠杆菌中克隆了一个β-葡萄糖苷酶基因,重组质粒pLZS1外源片段为1.1kb,将pLZS1接合导入黄单胞菌XA5-5,得到了克隆子XA5-5(pLZS1).以水杨苷为底物,XA5-5(pLZS1)的酶活性大大高于E.Coli JM83(pLZS1).并且质粒在XA5-5中能相对稳定地存在.初步结果表明,所克隆的基因编码的产物对于水杨苷底物有较强的亲和力,并可以在一定程度上降低XA5-5中酶与pNPG底物的亲和力,使其酶活减小.

黑曲霉An-76木聚糖酶系的酶学研究

用分子筛和离子交换等色谱分离技术,由黑曲霉An-76的木聚糖酶系中分离纯化到一种β-木糖苷酶(βX)和三种内切-β-木聚糖酶组分(EX1,EX2,EX3)。这几种酶均达到凝胶电泳纯和聚焦电泳纯。用凝胶过滤方法测得βX的分子量为147000,用凝胶电泳法测得EX1、EX2和EX3的分子量分别为23000、22000和41000;βX、EX1、EX2和EX3的等电点分别为4.6、5.9、4.1和3.9。本文还研究了各种酶的最适反应温度和pH、酶的热稳定性和pH稳定性;研究了金属离子和巯基试剂对酶活力的影响、动力学参数、氨基酸组成、底物特异性和反应产物等。各酶组份不具有分解纤维素的交叉活力。巯基试剂能完全抑制βX活力,其活力丧失可被半胱氨酸恢复。

纤维素诺卡氏菌的一个新菌株

从吉林省的草甸土中分离到一株放线菌,编号 HD-86。该菌株具有较强的分解纤维素的能力,在以纤维素、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖为碳源时,可在无氮培养基上固氮生长。菌株还具青霉素抗性。按《伯杰细菌鉴定手册》(第八版)进行了鉴定,认为此菌为纤维素诺卡氏菌的一个新菌株。现将鉴定结果报道如下。