日本血吸虫单克隆anti-anti-id的建株及初步鉴定

目的 制备日本血吸虫抗独特型抗体 (anti- id,Ab2 ) NP30的单克隆抗独特型抗体 (anti-anti- id,Ab3)。方法 应用辣根过氧化物酶标记的 NP30 (HRP- NP30 )免疫 BAL B/ c小鼠的脾细胞与SP2 / 0融合 ,制备单克隆 anti- anti- id。结果 获得 1株稳定分泌抗 NP30的单克隆抗体的细胞株 ,定名为 NP48。NP48的 Ig同型为 Ig G2 b。NP48与 SWAP和 SEA EL ISA反应均阳性。免疫组织化学显示 NP48可定位于虫卵内毛蚴头腺及毛蚴膜。结论 NP48是 NP30的特异性 anti- anti- id,可用于

免疫平衡调理剂抗疲劳的实验研究

目的 :了解免疫平衡调理剂对小鼠的抗疲劳效果。方法 :选用昆明种小鼠 ,设免疫平衡调理剂低、中、高 (1.7、5 .0、10 0ml/kg) 3个剂量组和 1个空白对照组 ,分别观察小鼠游泳试验及生化指标 (血清尿素氮、乳酸、肝糖原 )。 结果 :各受试物组小鼠负重游泳时间均比对照组延长 ,尤以中、高剂量组明显 (P <0 .0 1)。各受试物组血中尿素氮均低于对照组 ,但以高剂量组与之差异明显 (P <0 .0 5 ) ,各剂量受试物组血乳酸含量均低于对照组 ,尤以中、高剂量组差异具极显著性 (P <0 .0 1)。各受试物组小鼠的肝糖原均高于对照组 ,中、高剂量组与之对照的差异为显著及极显著 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ,生化指标与疲劳试验的结果相符。结论 :免疫平衡调理剂具有明显的抗疲劳作用。

日本血吸虫单克隆独特型抗体的筛选及初步鉴定

目的 从本实验室已建立的 Ig G类抗日本血吸虫抗原不同表位的单抗中筛选抗独特型抗体 NP30的独特型抗体 (id,Ab1 )。方法 应用间接 EL ISA经典法 ,NP30作为抗原包板。加 Ig G各亚类杂交瘤细胞培养上清孵育 ,用辣根过氧化物酶 (HRP)标记抗鼠 Ig G捕捉。结果 单抗 NP5 6与NP30呈阳性反应 ,NP5 6的 Ig同型为 Ig G2 b。免疫组织化学显示 NP5 6与虫卵内毛蚴头腺及毛蚴膜呈阳性反应。结论 NP5 6是 NP30的特异性 id,可用于

中药用于血吸虫病抗独特型抗体疫苗佐剂的研究

目的 从中药中筛选血吸虫病抗独特型抗体疫苗的佐剂 ,并初步探讨其作用机制。方法 日本血吸虫抗独特型抗体 NP30主动免疫 BAL B/ c小鼠 ,分别联用虫草多糖、猪苓多糖、黄芪、甘草酸和人体免疫调理剂 (HIM) ,观察其对小鼠的保护作用 ,并检测小鼠血清特异性 Ig G、Ig G1和 Ig G2 a抗体水平。结果 黄芪和 HIM能明显提高 NP30对小鼠的保护性免疫作用 ,减虫率显著提高 ,从单用 NP30的 37.8%分别提高到 5 0 .6 %和 5 3.6 % ;但两者对血清特异性 Ig G、Ig G1和 Ig G2 a抗体均无明显升高作用。结论 黄芪和 HIM可明显提高血吸虫病抗独特型抗体疫苗 NP30的保护性免疫力 ,可作为 NP30的佐剂 ,其佐剂作用与所检测的抗体水平似不相关 ,推测可能与细胞免疫应答有关。

黄芪对急性弓形虫RH株感染小鼠的保护作用研究

目的 探讨黄芪颗粒剂对刚地弓形虫 RH株速殖子感染小鼠的治疗作用。方法 ICR小鼠腹腔注射 10 5、10 3、10 2 个速殖子 ,感染后第 1天起每鼠给予黄芪 0 .0 75 g/ d、阿齐霉素 [15 0 mg/(d· kg) ]灌胃治疗 ,对照组给蒸馏水。连续 10 d,观察小鼠的存活率与存活时间。于感染后第 4、8天处死 10 2 个速殖子感染的小鼠 ,PCR荧光定量方法检测肝、肺弓形虫 DNA基因拷贝数。结果 10 5、10 3速殖子感染时 ,黄芪组小鼠平均存活时间为 5 .5 7d和 6 .2 3d,与对照组相比差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,阿齐霉素组小鼠平均存活时间为 6 .96 d和 8.12 d,明显高于对照组 (P<0 .0 5 )。10 2个速殖子感染时 ,黄芪组小鼠平均存活时间为 8.74 d,明显高于对照组 ,阿齐霉素组小鼠平均存活时间为7.79d,与对照组相比差异无显著性 (P>0 .0 5 )。黄芪组小鼠感染 10 2个速殖子后第 4、8天肝、肺虫荷与对照组相比差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 黄芪可以改善低剂量 (10 2 )

钙纳米颗粒作为血吸虫病抗独特型抗体疫苗佐剂的研究

目的 探索钙 (Ca)纳米颗粒作为日本血吸虫病抗独特型抗体 NP30疫苗佐剂的可行性。方法 将钙纳米颗粒与 NP30制备成 Ca- NP30结合物 (Ca- NP30 ) ,主动免疫 BAL B/ c小鼠 ,观察其对小鼠的保护性作用并探讨其免疫保护机制。结果 Ca纳米颗粒可增强 NP30对宿主的保护性作用 ,减虫率明显提高 ,从单用 NP30的 30 .4%提高到 5 7.8% ;血清特异性抗体 Ig G水平较对照组显著升高 ;足垫试验可引发迟发型变态反应。结论 Ca纳米颗粒可作为血吸虫病抗独特型抗体 NP30疫苗的佐剂 ,其作用机制与同时引起宿主体液免疫和细胞免疫应答增强有关。

重组IL-2、IL-6、TNF-α作为血吸虫病疫苗佐剂的研究

目的 观察重组 IL-2、IL-6和 TNF-α(r IL-2 ,r IL-6,r TNF-α)作为血吸虫病抗独特型抗体疫苗佐剂的可行性 ,并探讨其作用机制。方法 日本血吸虫抗独特型抗体 NP3 0主动免疫BAL B/c小鼠 ,分别联用 r IL-2、r IL-6和 r TNF-α,观察其对小鼠的保护性免疫作用 ,以及对宿主体液免疫和细胞免疫的影响。结果 r IL-2和 r IL -6能明显提高 NP3 0疫苗对小鼠宿主的保护性作用 ,减虫率和减卵率均明显提高 ,减虫率从单用 NP3 0的 40 .6%分别提高到 5 3 .5 %和 5 5 .7% ,减卵率从 46.5 %分别提高到 68.7%和 69.8% :二者均使血清特异性 Ig G、Ig G1和 Ig G2 a抗体明显升高 ;另外 ,足垫试验结果显示 NP3 0加用 r IL -2可引发迟发型变态反应。 r TNF -α无增强 NP3 0的保护性免疫作用。结论 r IL -2和 r IL -6可作为血吸虫病抗独特型抗体疫苗的佐剂 ,其作用机制与同时增强 Th1和

抗独特型抗体NP30对血吸虫病虫卵肉芽肿及肝纤维化的调节作用

目的 研究单克隆抗独特型抗体NP30主动免疫对血吸虫病虫卵肉芽肿及肝纤维化的影响。方法 实验组ICR小鼠腹腔注射NP30 10 0 μg/次 ,连续免疫 3次 ,对照组腹腔注射SP2 / 0腹水。尾蚴攻击感染后第 4、8、12、16、2 0和 2 4周分别处死小鼠剖取肝脏 ,用VG(VanGieson)组织化学染色 ,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白 (FN)免疫组织化学染色 ,应用计算机图像分析系统对肝脏虫卵肉芽肿体积和虫卵肉芽肿内的胶原沉积进行定量测定。结果 尾蚴攻击感染第 12周后 ,实验组虫卵肉芽肿的体积明显小于对照组 ,虫卵肉芽肿细胞组分与对照组明显不同 ,出现两种不典型肉芽肿。VG染色显示实验组虫卵肉芽肿内胶原的平均光密度值明显小于对照组。免疫组织化学显示实验组虫卵肉芽肿内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及FN含量均比对照组低。结论 NP30接种可能诱导体液和细胞两种保护性免疫 ,对血吸虫病虫卵肉芽肿具有负调节作用 。

中药复方金衡灵减轻乳腺癌术后化疗毒副反应的临床观察

目的:研究中药复方金衡灵对乳腺癌术后化疗毒副反应的补充治疗作用。方法:将乳腺癌术后均采用TE(多西他赛+表阿霉素)方案化疗的患者分成治疗组和对照组,治疗组、对照组分别服用6个疗程的金衡灵、安慰剂。观察并比较2组患者化疗的毒副反应。结果:化疗后2组脱发、腹泻、口腔炎、感染、过敏、粒缺性发热等发生率均很低,无统计学意义。从化疗第3个疗程开始,治疗组恶心呕吐的发生率明显低于对照组(P<0.05);从第2个疗程开始,治疗组虚弱的发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论:中药复方金衡灵在缓解乳腺癌术后化疗毒副反应方面有明显效果,可以提高患者抗病能力和生活质量。

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单链抗体基因的构建和表达

目的 构建日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单链抗体 (scFv)基因。 方法 通过PCR方法体外扩增并经测序验证的重链、轻链可变区 (VH、VL)基因先后重组入原核表达质粒 pTHA90相应的位点上 ,中间通过一连接肽 (Gly4 Ser) 3基因连接构建成单链抗体基因 (scFv) ,连接产物转化相应受体菌Top1 0 ,提取质粒 ,酶切鉴定重组克隆。表达产物经ELISA方法测定活性。 结果 重组克隆经酶切鉴定可见预期大小的片段 ,表明重组成功。表达产物经ELISA检测 ,OD4 92 值为 1 .0 6 ,高于阴性对照 3倍以上 ,证实具有与相应抗原结合的能力。 结论 成功地构建了scFv基因 。

钙纳米粒子的制备及表征鉴定

目的:制备钙纳米粒子并进行表征鉴定。方法:采用液相沉淀法,在不同温度、缓冲液、液体混合方式下制备钙纳米粒子,并用透射电镜(TEM)、粒度分布仪、X射线能谱仪(XPS)等测试手段对该纳米粒子的结构、大小和形状等进行表征。结果:低温下向柠檬酸钠中匀速缓慢加入等量氯化钙和磷酸氢二钠并搅拌,可得到颗粒状钙纳米粒子,平均粒径260 nm,XPS结果显示其化学成分为磷酸钙。结论:通过液相沉淀法,成功制备了大小、形态较理想的钙纳米粒子。

棉花黄萎病菌致萎毒素的分离纯化方法

利用快速蛋白质液相色谱技术 (Fast Protein Liquid Chromatography,FPLC) ,对棉花 3个黄萎病菌 (Verticilliumdahliae)菌系外泌毒素的某些理化性质进行了分析。结果显示 :黄萎病菌毒素有两个致萎峰 ,大分子峰 毒蛋白致萎力较弱 ,致萎症状属黄斑型 ;而小分子峰 毒蛋白其致萎力极强 ,致萎症状属青枯型。透析试验表明 ,可透 80 0 0～ 1 0 0 0 0 Da的透析袋会使小分子峰 丢失。热稳定试验表明 :峰 、峰 毒蛋白皆可耐 1 0 0℃高温水浴热煮而不发生沉淀 ,并保持致萎活性。根据以上研究结果 ,本文提出了黄萎病毒素分离纯化新方法。

纳米硝酸益康唑阴道用药的急性毒性及粘膜刺激性研究

目的 观察纳米硝酸益康唑阴道用药的急性毒性反应及粘膜刺激性。方法 SD大鼠随机分为3组，阴道注射给予溶解于5％羧甲基的纳米硝酸益康唑(药物组)，5％CMC溶解的明胶微球(赋形剂组)及5％CMC。药物剂量为有效剂量的10倍。观察大鼠的体重变化，急性毒性反应。并通过肉眼和病理检查确定对粘膜的刺激性。结果 给药后第1天和第14天3组大鼠的平均体重没有显著性差异。3组大鼠的皮肤、眼、粘膜、呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等均无明显变化。阴道粘膜完整无损。药物组和赋形剂组粘膜下轻度充血。结论 纳米硝酸益康唑10倍用药未引起急性毒性反应。粘膜刺激性轻微。作为局部用药安全无毒。

大鼠再生肝中肝细胞生长因子的纯化和生物活性的研究

用大鼠的再生肝经过匀浆、加热、高速离心和酒精沉淀获得粗制的肝细胞生长因子（RHGF－1），可检测出肝细胞生长因子的活性。RHGF－1再经DEAE离子交换层析，Sephacryls-300凝胶柱层析及FPLCMonoQ色谱，纯化为单体（RHGF－4），经SDS－PAGE证实为单一成份，分子量为18KD。此纯化的RHGF－4相对活性比RHGF－1提高884倍。

日本血吸虫线粒体相关蛋白基因原核表达产物的纯化

目的 建立日本血吸虫线粒体相关蛋白原核表达产物的纯化方法 ,获得理想的表达产物。方法 菌体经冻融、超声破菌及提取包涵体后 ,用分子筛层析纯化蛋白质并使之复性 ,再用Western -blot方法对纯化蛋白的抗原性进行分析。经动物免疫后采用dot-ELISA方法检测兔血清中抗体滴度 ,分析纯化蛋白的抗原活性。结果 经分子筛纯化后的融合蛋白rSj3 3 8/ 2 6GST经SDS -PAGE电泳鉴定达电泳纯 ,Westernblot显示纯化蛋白能够被日本血吸虫重感染兔血清及rSj3 3 8/2 6GST免疫兔血清识别。dot-ELISA法检测结果表明经分子筛纯化并复性的rSj3 3 8/ 2 6GST融合蛋白免疫兔血清中特异性抗体的滴度最高 ,为 1∶5 12 0 0。结论 纯化后的融合蛋白rSj3 3 8/ 2 6GST具有较高的纯度及较强的免疫活性 ,可望作为日本血吸虫病疫苗候选分子进一步深入研究。

COX-2基因在紫杉醇/卡铂致卵巢癌细胞凋亡中的作用及机制研究

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)在紫杉醇/卡铂致卵巢癌细胞凋亡中的作用及机制。方法以卵巢癌CAOV-3细胞系,卵巢癌组织及其相应的癌旁正常组织为材料,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法分别检测COX-2基因mRNA和蛋白质表达;流式细胞术检测CAOV-3细胞的凋亡情况,同时采用透射电镜观察细胞的超微结构变化。结果 COX-2基因在卵巢癌组织中的表达明显高于其对应的癌旁正常组织(P<0.01);与紫杉醇/卡铂组比较,转染紫杉醇/卡铂+p CMV-COX-2组卵巢癌细胞凋亡率明显减少(P<0.01),且细胞超微结构未发生显著改变。结论 COX-2基因在紫杉醇/卡铂治疗卵巢癌中发挥重要作用,其有望成为卵巢癌治疗的分子新靶标。

三个黄萎病菌系致萎峰蛋白电泳图谱分析

对三个黄萎病菌系通过 FPLC技术分离得到的致萎峰蛋白做 PAGE电泳分析 ,电泳分离图谱结果显示 :对于致萎力较弱的致萎峰 毒素 :菌系VD8与 SS- 4的相似性较大 ;菌系 VD8与 T9的电泳图谱相同值较小。然而 ,对致萎力起主导作用的强致萎峰 毒素电泳分离图谱做相似性分析 ,结果显示 ,菌系 VD8与 T9的电泳图谱相似性较大 ,VD8与 SS- 4的相似性较小 ;定量分析表明 VD8与 T9相同值为 80 % ,而 VD8与 SS- 4的相同值仅为 1 6.67%。

电子阴道镜在诊断宫颈病变中的应用

目的 探讨阴道镜检查宫颈疾病诊断中的作用。方法 应用SLC 2 0 0 0电子阴道镜检查宫颈 3 98例。结果 共有 42 2例次宫颈疾病 ,同一宫颈可同时有两种疾患 ,以慢性宫颈炎居多 ,占 88 3 9%。阴道镜异常图像出现的频率与CIN、宫颈癌成正比。CIN和宫颈癌的阴道镜异常图像中以白色上皮、点状血管为多。