兔关节盘穿孔后髁突骨质改建及Sox9、MMP-13、VEGF表达变化的实验研究

目的:分析颞下颌关节骨关节炎中软骨下骨骨质改建情况,检测Sox9、MMP-13、VEGF的表达并探讨它们对软骨下骨骨质改建的作用机制。方法:在兔关节盘的后外侧制备直径为2.5 mm全层穿孔,micro-CT扫描并计算髁突顶部软骨下骨的BV/TV,BS/BV,Tb.Th,Tb.Sp和Tb.N,HE染色及免疫组织化学方法检测髁突中Sox9、MMP-13、VEGF的表达和定位并进行半定量分析。结果:实验组表现为典型的骨关节炎组织病理学特征。实验组软骨下骨BV/TV、Tb.Th和Tb.N明显下降(P<0.05),BS/BV和Tb.Sp明显上升(P<0.05)。实验组软骨下骨中Sox9、MMP-13、VEGF的表达量明显高于假手术组(P<0.05)。结论:软骨下骨改建是TMJOA的一个重要特征,Sox9、MMP-13、VEGF对软骨下骨骨质改建具有重要意义。

慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因标记大鼠脂肪干细胞及体内示踪研究

目的探讨慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)标记大鼠脂肪干细胞(ADSCs)最适感染复数,检测EGFP-ADSCs干细胞特性及体内活性。方法提取培养大鼠脂肪干细胞,流式细胞仪表型鉴定及成骨、成脂、成软骨多向诱导分化。采用携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体(Lentivirus-EGFP)以不同的感染复数MOI=0、1、5、10、25、50转染ADSCs,流式细胞仪测转染率,筛选合适MOI。CCK8测转染后ADSCs的增殖能力。EGFP-ADSCs成骨、成脂、成软骨诱导后分别行碱性磷酸酶、油红O及阿尔新蓝染色检测。将标记后的细胞注射到大鼠皮下,术后1,2,4w取材行冰冻切片荧光观察及免疫组织化学染色,观察EGFP-ADSCs在体内的表达情况。结果 CD90阳性表达,CD34阴性表达,脂肪干细胞向成骨、成脂、成软骨分化。MOI=0、1、5、10、25、50的转染率分别是0.12%、3.62%、42.4%、66.6%、90.4%、98.0%。CCK8法测转染组(MOI=25)与未转染组(MOI=0)细胞增殖能力无明显差别。EGFP-ADSCs经诱导后仍向成骨、成脂、成软骨分化。1w,2w,4w见细胞于移植部位。结论慢病毒介导的EGFP基因标记大鼠脂肪干细胞最适感染复数为25,且不影响干细胞活性及多向分化潜能,可以成为标记脂肪干细胞的理想方法。