平滑肌祖细胞在新型细胞外基质支架上的生长特性

背景:血管壁细胞包括内皮细胞和平滑肌细胞,平滑肌细胞合成分泌的胶原蛋白、弹力蛋白和蛋白聚糖等细胞外基质是提供血管塑形及张力的最主要成分,平滑肌细胞在细胞外基质支架上生长可能更接近体内生长环境特性。目的:观察鼠骨髓来源平滑肌祖细胞在毯状细胞外基质支架上的生长特性。设计、时间及地点:细胞水平对比观察实验,于2007-07/2008-07在江苏大学临床检验实验室完成。材料:将纤维蛋白原、层粘连蛋白和纤粘连蛋白按一定比例混合后,在新鲜大鼠血浆促凝coagulation作用下,构建毯状细胞外基质支架。方法:实验组诱导培养骨髓来源的第2代平滑肌祖细胞种植在毯状细胞外基质支架表面。对照组将骨髓来源的第2代平滑肌祖细胞接种到无菌圆盖玻片上。主要观察指标:于培养1,4,7,10,14,21d用电镜观察支架表面结构及平滑肌祖细胞生长情况;WesternBlotting法、Real-TimePCR法分别检测α-SMA蛋白及mRNA表达变化。结果:实验组平滑肌祖细胞贴壁率、增殖数明显高于对照组(P<0.01);电镜显示细胞在支架表面形成较平整的平面,如典型"平滑肌"形状;实验组平滑肌祖细胞为多层、三维立体、更接近天然血管的结构;实验组α-SMA蛋白及基因表达明显高于对照组(P<0.05)。结论:细胞外基质支架能显著促进平滑肌祖细胞黏附、增殖和分化,可作为一种新颖的合成人造血管的生物组织工程支架。

大鼠骨髓来源的平滑肌祖细胞培养及鉴定

目的培养和鉴定从鼠骨髓中分离的平滑肌祖细胞,观察其在体外增殖、分化过程中相关细胞表型的变化。方法用密度梯度离心法获得鼠骨髓单个核细胞,用条件培养基进行诱导分化,免疫荧光双标技术(α-SMA、CD14)鉴定平滑肌祖细胞(SPC)。Western blot检测α-SMA蛋白,Real-time PCR法检测α-SMA mRNA表达。结果鼠骨髓单个核细胞诱导培养4d时开始贴壁,7d变为梭形,14d呈典型的"峰""谷"样形态;4d时开始出现α-SMA-CD14双荧光阳性细胞;培养1d时无α-SMA蛋白表达,4d后增强,10～14d达高峰,21d仍持续高水平;培养1d的细胞α-SMA mRNA表达低(P<0.01),4d后增强,14d达高峰(P<0.01),21d后仍持续高水平。结论本试验成功地从鼠骨髓单个核细胞中分离培养出SPC,并在体外扩增分化成平滑肌样细胞。

α7-nAChR在肺癌中的表达和临床意义

目的 :检测α7-烟碱型乙酰胆碱受体(α7-niccotinic acetylcholine receptor,α7-n ACh R)在肺癌组织中的表达,探讨其与临床病理学特征的关系及意义。方法:采用免疫组织化学染色法检测130例肺癌组织及40例癌旁肺组织中α7-nAChR表达,并分析α7-nAChR表达与吸烟、病理分型、分化程度、临床分期、淋巴结转移等关系。结果:肺癌组织α7-nAChR阳性表达率70.77%,癌旁组织阳性率37.50%,肺癌组织中α7-n ACh R阳性表达水平明显高于癌旁组织(P<0.001)。肺癌组织中α7-nAChR的表达水平与肺癌患者吸烟、临床分期、分化程度相关(P<0.05),与患者的性别、年龄、肿瘤大小、病理分型、淋巴结转移之间的关系无统计学意义(P>0.05)。结论:α7-nAChR高表达在肺癌的发生中起一定作用,可为肺癌的α7-nAChR靶向治疗提供一定依据。