不同破壁方法提取真菌DNA的比较

目的探索和评价提取致病性真菌DNA的简便方法。方法分别用6种方法(液氮冻融、-70℃冻融、溶胞酶消解、超声破碎、高盐溶液、尿素溶液)裂解真菌细胞壁,再用市售DNeasy B lood&Tissue K it试剂盒提取DNA,最后通过对提取物进行比色定量和PCR检测评价各种提取方法的优弊。结果酶消解破壁法提取真菌DNA效率最高,重复性良好。模拟全血标本中白色念珠菌检测限为102个孢子,烟曲霉及新型隐球菌检测限为103个孢子。结论酶消解破壁法提取真菌DNA在6种方法中效率最高,可用于临床常见真菌感染的PCR快速诊断。

半乳甘露聚糖试验对侵袭性曲霉病诊断价值的回顾性分析

目的回顾性分析Platelia Aspergillus EIA法检测血清半乳甘露聚糖（GM）对侵袭性曲霉病（IA）的诊断价值。方法根据诊断标准回顾性地将诊断分为确诊、临床诊断、拟诊及排除IA，并根据患者的基础疾病及是否接受影响免疫功能的药物分为：恶性血液病及造血干细胞移植术后（HSCT）组（A组），使用了影响免疫功能药物但非恶性血液病及HSCT患者组（B组），非恶性血液病及HSCT且未使用影响免疫功能药物的患者组（C组），分析GM实验在各组患者中的以及总的敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）和阴性预测值（NPV）。结果781例患者，最终确诊8例，临床诊断33例，拟诊189例，排除IA551例。230例不能排除真菌感染的患者中160例GM阳性，阳性率69．6％，其中确诊6例，临床诊断24例，拟诊130例。GM实验总的敏感性、特异性、NPV分别为73．2％、81．7％、97．6％。在不同类型的患者中敏感性和特异性存在差异，A组的敏感性、特异性分别为85．7％、88．4％，B组为81．2％、81．4％，C组为45．5％、78．7％；不同类型的患者GM试验结果吸光率指数（AI）的中位数分别为A组2．78，B组1．82，C组0．585；A组、B组与C组的敏感性、特异性和AI值分布上有显著差异（P〈0．05）。至少68．0％真菌培养阳性患者GM阳性时间早于培养阳性2～11d。结论Platelia Aspergillus EIA法检测GM对IA高危患者尤其是恶性血液病及HSCT患者、使用了影响免疫功能药物的其他患者有早期诊断价值，连续监测患者的GM水平，有助于了解疾病的进展程度、对治疗的反应性及预后；但在非血液病且未使用影响免疫功能药物的患者中其诊断价值有限。

P47模拟多肽抗原在诊断侵袭性白色念珠菌感染中的应用

目的利用噬菌体肽库来源的P47模拟抗原建立的ELISA法,探讨该模拟抗原在侵袭性白色念珠菌病血清学诊断中的应用价值。方法收集经培养确诊的各类念珠菌侵袭性感染和浅表感染的病人血清130份,用模拟抗原包被ELISA微孔板,测定抗P47抗体,考察该方法能否区分白色念珠菌侵袭性感染和浅表感染,以及与其他念珠菌感染的交叉反应。结果经细菌培养鉴定确证为白色念珠菌侵袭性感染的病人血清35份,抗P47抗体阳性率为100%,浅表感染者阳性率为4.8%(2/42),热带念珠菌侵袭性感染者抗P47抗体阳性率为16.7%(3/18)。光滑念珠菌、近平滑念珠菌以及未能鉴定到种的念珠菌侵袭性和浅表感染者血清,均未检测到抗P47抗体。结论用白色念珠菌菌丝蛋白P47模拟抗原建立ELISA检测抗P47抗体,虽然与热带念珠菌侵袭性感染有部分交叉反应,但仍可用于白色念珠菌侵袭性感染的血清学诊断。

人精子蛋白17增强型绿色荧光蛋白共表达卵巢癌细胞模型的建立

目的:建立人精子蛋白17(hSp17)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)共表达的卵巢癌细胞模型。方法:用PCR方法获取hSp17基因片段,HindⅢ/KpnⅠ双酶切、T4 DNA连接酶连接的方法将hSp17基因片段克隆至含报告基因EGFP的真核表达载体pEGFP-N1中,脂质体介导转染卵巢癌细胞HO8910,荧光倒置显微镜观察及Westernblot检测转染细胞中hSp17/EGFP融合蛋白的表达,G418筛选稳定表达的细胞株。结果:酶切和测序结果均证实pEGFP-N1/hSp17重组质粒的构建完全正确。荧光观察与Western blot均证实了hSp17/EGFP蛋白的共表达,且成功筛选出稳定表达的细胞株。结论:成功构建hSp17/EGFP共表达的卵巢癌细胞模型,为研究hSp17异常表达对肿瘤细胞生物学行为的影响,以及hSp17为靶标的肿瘤诊断和生物治疗奠定基础。

精子蛋白17异常表达增强卵巢癌细胞HO-8910迁移性

目的:探讨精子蛋白17(sperm protein 17,Sp17)异常表达对人卵巢癌细胞HO-8910迁移性的影响。方法:应用脂质体转染法将携带Sp17和增强型绿色荧光蛋白基因的重组质粒pEGFP-Sp17转染卵巢癌细胞HO-8910,RT-PCR及Western印迹法检测Sp17的表达情况;用Transwell小室法检测细胞迁移能力的改变。结果:重组质粒pEGFP-Sp17转染HO-8910细胞后,Sp17与EGFP以融合蛋白形式表达;重组质粒转染组与空载体转染组发生迁移的细胞数分别为(156.6±14.9)个/高倍视野和(39.3±8.53)个/高倍视野,差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:Sp17基因异常表达明显增强卵巢癌细胞HO-8910迁移能力。

烟曲霉深部感染家兔模型的建立

目的建立烟曲霉播散性感染家兔模型，为进一步研究烟曲霉深部感染的致病机制及诊疗措施提供可用的动物模型.方法免疫抑制新西兰大白兔致其免疫功能低下，经耳缘静脉注射烟曲霉分生孢子致感染.通过观察各组家兔的生命体征及尸检、脏器培养、组织病理结果等鉴定感染结局.结果实验组各家兔具有感染症状（体重渐减，体温≥39．5℃），解剖发现明显的组织病理学改变，脏器培养鉴定为烟曲霉，组化染色查到菌丝.结论成功的建立了烟曲霉深部感染家兔模型，为烟曲霉感染过程中致病机制的研究及研制新型诊疗措施提供了依据.

巢式PCR检测血清中烟曲霉基因的实验研究

目的评价巢式PCR在烟曲霉侵袭性感染早期病原学诊断中的应用价值。方法构建烟曲霉播散性感染动物模型,收集不同感染时段动物血液标本20份,分别进行巢式PCR检测和真菌培养,并对感染动物多次进行影像学检查;测定25例临床诊断为侵袭性曲霉病患者的45份血清样本,并与血清半乳甘露聚糖(GM)测定结果进行比较。结果巢式PCR检测疾病模型动物血清曲霉特异基因,标本阳性率为80%(16/20),最早在感染后的第二天即可检出;而在整个感染过程中,血培养结果均为阴性,影像学检查则在感染后期才提示真菌感染的存在。临床标本的检测结果显示,巢式PCR敏感性和特异度分别为64%和100%。结论巢式PCR具有较好的敏感性及特异度,可用于曲霉深部感染的早期诊断,与血清GM测定联合应用诊断意义更大。

脓毒症患者全血中钙结合蛋白S100A12的基因表达水平研究

目的检测脓毒症患者全血中钙结合蛋白S100A12的基因表达情况,并将其与炎症反应性疾病的其他炎性指标进行比较,探讨其是否可以作为脓毒症患者诊断的另一种新的指示蛋白。方法实时定量PCR方法检测脓毒症患者44例,以及10例健康人全血中S100A12基因mRNA表达水平,运用2-ΔΔCT算法计算相对表达量,并将S100A12的基因表达水平与白细胞、中性粒细胞绝对值、C反应蛋白、降钙素原水平进行相关性分析。结果在44例脓毒症患者中有15例患者全血中S100A12的基因表达水平升高,高表达率为34.09%;29例病人S100A12的基因表达呈低表达水平,低表达率为65.91%;S100A12的基因表达水平与白细胞、中性粒细胞绝对值、C反应蛋白、降钙素原水平经相关性分析结果显示P值均大于0.05,差异无统计学意义。结论尚不能认为在脓毒症患者全血中S100A12普遍呈高表达状态,暂不能将其作为脓毒症的另一种新的指示蛋白。

酶水解苦味肽对大黄鱼白细胞与溶菌酶活性的影响

目的探究酶水解苦味肽对大黄鱼白细胞与溶菌酶活性的影响。方法分别利用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶,碱性蛋白酶和风味蛋白酶酶解鮸鱼鱼肉制备苦味最高的苦味肽。以幼大黄鱼为实验对象,分别设置4个不同的组(对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组),对其进行腹腔注射苦味肽,观察8周后采血检测,以白细胞/总血细胞的平均比率和溶菌酶活性为指标评价苦味肽对大黄鱼先天免疫系统的作用效果。结果胃蛋白酶水解产生的苦味肽苦味最高。对照组的白细胞/总血细胞的平均比率为14.6%,低剂量组(0.6 mg/鱼)为28.86%,中剂量组(1.2 mg/鱼)为35%,高剂量组(2.4 mg/鱼)为29.3%。在白细胞对乳胶颗粒的体外吞噬作用实验中,对照组与测试组的吞噬指数分别为1.15(0mg/L),1.88(0.4mg/L),3.84(0.8mg/L),5.94(1.2mg/L)。溶菌酶在60min内的相对裂解活性分别为0.17、0.101、0.307和0.198。与对照组相比苦味肽可以提高大黄鱼的免疫力,当注射剂量为1.2mg时,吞噬与溶菌酶活性都显著升高,可初步确定最佳注射剂量为1.2mg。结论苦味肽可以通过多途径有效地提高天然免疫的作用,可以降低大黄鱼疾病的发生,值得进一步研究。

律师:企业经营的护航者——企业如何利用法律保护自身利益

市场经济乃法制经济,但处于社会主义初级阶段的中国,由于法制尚不完善,难免导致一些不法分子钻法律空子,因此,在经济活动中,不讲信用者,恶意欺诈者,甚至损害国家利益者比比皆是,使那些靠诚实信用做生意的企业防不胜防,轻者损失几万。

如何在小学体育教学中运用体育游戏

体育游戏是通过更加趣味化的形式,利用丰富的体育活动调动学生的参与热情,而构建出更加轻松愉悦的空间,促使体育互动 更加多彩的一种教学形式,对于小学生来说,体育课堂上最期待的就是游戏互动,小学生大多缺乏运动的坚韧意志,很容易就打退堂鼓, 但是通过体育游戏的形式,反而能够让学生保持长时间的运动而不提出退出,部分学生已经累得气喘吁吁,在课后还是希望继续展开游戏, 教师应关注学生对游戏的渴望,遵从学生的喜好与意见,展开趣味多彩的游戏活动,让小学体育课程充满活力。

水稻三化螟的综合防治

对于化螟防治要从消灭虫源抓起,综合运用农业防治、化学防治、物理防治、保护害虫天敌等综合技术措施,根据不同稻区虫害发生情况,结合实际因地制宜开展防治。具体措施如下:

中心孔磁粉探伤装置的研制

为适应中心孔磁粉探伤需要,本公司立足现有条件自行研制了中心孔磁粉探伤装置。本文阐述了该装置的组成、设计结构和性能指标。装置设计有其独到、新颖之处,检验性能优越而可信,受到国内外探伤专家好评。

COX-2/Nrf2/ARE信号通路与体内外的抗炎、抗氧化作用机理

近年新研究发现COX-2可使用比COX-1更广泛的底物。比如,除了标准的花生四烯酸外,COX-2也能将二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)等转换成前列腺素衍生物。这些前列腺素衍生物可进一步转化成促进消炎、抗氧化的亲电羰基衍生物(EFOX)分子,并且可以从Keap1解离转录因子Nrf2,继而可以激活多种与抗氧化相关的含ARE应答元件的基因,如血红素氧化酶-1、谷胱甘肽还原酶等。COX-2的这些新功能有可能帮助更好地理解Nrf2/ARE信号通路及其抗炎、抗氧化、诱导肿瘤细胞凋亡等机理。对外源性抗氧化剂触发体内的抗氧化基因及抗炎信号的可能性,以及与饮食相关的抗衰老机理进行探讨。

缺氧诱导因子-1α参与癌细胞迁移和侵袭的作用机理

在实体瘤中,无论是良性肿瘤,还是恶性肿瘤,低氧都是一种普遍现象,并且绝大多数肿瘤中存在低氧微环境。低氧与肿瘤的恶性进展、放射与化疗的耐受性和不良的预后有着密切的联系。缺氧诱导因子1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)广泛存在于大多数肿瘤组织中,并且HIF-1是一种存在于低氧条件下的转录因子。它是由氧调控表达的HIF-1α亚基与组成型表达的HIF-1β亚基组成的异二聚体。在常氧环境下,通过激活泛素蛋白酶体及氧依赖性降解区域的脯氨酸羟化而使HIF-1α迅速降解,半衰期约为5 min,而在低氧状态下,HIF-1α与β亚基二聚化并稳定存在。二聚化的HIF-1能够促进癌细胞的增殖、迁移以及侵袭。因此,HIF-1α有可能成为抑制癌细胞生长迁移与侵袭的靶点,这将为化疗及高压氧治疗提供新的思路。综述近年国内外抗氧化环境下HIF-1基因所主导的与癌细胞迁移和侵袭及其抑制相关的分子机理的研究,以便通过在抗炎、抗氧化条件下的增氧作用机理改进化疗效果。

复合式悬液芯片系统在病原学检测中的临床应用

复合式悬液芯片系统(multiplex suspension array system,MSAS)由悬浮芯片和微流体芯片组成,具有高通量精确定量的特点,而且具有较高的准确性和重复性,在多种蛋白质分子的同时精确定量和大规模样品检测方面有着很大的应用优势,其应用领域覆盖感染性疾病的快速诊断、细胞因子、信号通路、肿瘤标志物、流行病学病原体的筛查、蛋白质的相互作用、单核苷酸多态性(SNP)的研究等。就MSAS在病原学检测中的应用作一简要综述。