基于网络药理学探讨顾步汤治疗糖尿病足溃疡作用机制

目的采用网络药理学方法分析顾步汤治疗糖尿病足溃疡(DFU)的可能作用靶点及相关机制,并进行细胞实验验证。方法利用TCMSP数据库查找顾步汤主要有效成分及作用靶点,通过GeneCards、OMIM数据库收集与DFU相关基因,建立疾病-靶点-化学成分网络。通过GO和KEGG通路富集分析探讨顾步汤对DFU可能的作用途径。构建NIH/3T3细胞和RAW264.7细胞共培养体系,将细胞随机分为空白组、模型组、抑制剂组及顾步汤低、中、高剂量组,除空白组外,其余各组均以脂多糖诱导RAW264.7细胞构建巨噬细胞模型,采用白细胞介素-4(20 ng/mL)诱导建立巨噬细胞M2极化模型。采用流式细胞术检测NIH/3T3细胞凋亡率及M2型巨噬细胞数量,CCK-8法检测NIH/3T3细胞增殖率,划痕实验检测NIH/3T3细胞迁移率,Western blot检测Arg-1、FIZZ1及Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白表达,RT-PCR检测Arg-1、FIZZ1、Wnt4a、β-Catenin mRNA表达,免疫荧光染色检测Wnt4a和β-Catenin蛋白表达。结果通过数据库检索获得顾步汤有效成分121个,主要成分对DFU的作用靶点共50个。KEGG通路富集分析得到顾步汤与DFU显著共关联的信号通路包括Wnt、PI3K-AKT、HIF-1信号通路等。细胞实验显示,顾步汤可显著降低NIH/3T3细胞凋亡率及M2型巨噬细胞数量,增加NIH/3T3细胞增殖率及迁移率,下调Arg-1、FIZZ1、Wnt4a、β-Catenin蛋白及mRNA表达,降低Wnt4a、β-Catenin免疫荧光强度。结论顾步汤能够刺激巨噬细胞M2极化,调控Wnt/β-Catenin信号通路,从而发挥治疗DFU作用。

中药治疗糖尿病视网膜病变的系统评价再评价

目的对中药治疗糖尿病视网膜病变(DR)的系统评价进行再评价。方法检索中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库、PubMed、Embase、the Cochrane Library数据库,选择以中药为主要干预措施治疗DR的系统评价文献,检索时间为建库至2021年9月。由2名研究人员独立对文献进行检索及提取数据,并以AMSTAR2评分量表及GRADE方法对所纳文献的方法学质量及证据质量进行评价。结果最终纳入10篇系统评价,9篇系统评价合并分析临床疗效,7篇系统评价对不良反应进行分析。纳入系统评价的AMSTAR2方法学质量评价整体偏低,评价为高质量的0篇,低质量4篇,极低质量6篇;得分较差的条目为2、7、10、14、16。采用GRADE进行结局指标证据质量评价,证据质量普遍较低。结论中药对比西医治疗DR有效且不良反应不明显,但随机对照试验和系统评价的研究方法的质量尚有缺陷,未来需要更规范的研究及适合中医的评价指标,为评价中药治疗DR的临床疗效提供循证学依据。

通窍明目汤通过p53/AMPK/mTOR信号通路介导的细胞自噬改善青光眼视网膜神经节细胞损伤的机制研究

目的观察通窍明目汤对青光眼视网膜神经节细胞(RGC)氧化应激损伤的作用机制及其对p53/AMPK/mTOR通路所介导的RGC自噬的影响。方法采用CCK-8法检测RGC增殖率,流式细胞术检测RGC凋亡率,免疫荧光检测RGC内活性氧(ROS)表达,ELISA法检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量及活性,Western blot检测RGC中Beclin-1、p62表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及p53/AMPK/mTOR信号通路相关蛋白表达情况。结果与空白组比较,模型组RGC增殖率下降,RGC凋亡率升高;ROS阳性细胞数量增加,SOD活性、MDA和GSH-PX含量升高,模型组细胞Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、细胞核p53、p-AMPK及mTORC1表达升高,p62、细胞质p53、AMPK及p-mTORC1蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,各浓度通窍明目汤组RGC增殖率升高,RGC凋亡率下降;RGC中ROS阳性细胞数量减少;SOD活性,MDA和GSH-PX含量降低,与模型组相比,各剂量通窍明目汤组及PFT-ɑ组细胞p62、细胞质p53、AMPK及p-mTORC1蛋白表达升高,Beclin1表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、细胞核p53、p-AMPK及mTORC1表达降低(P<0.05)。结论通窍明目汤可通过介导p53/AMPK/mTOR信号通路上调RGC自噬水平,从而抑制青光眼视神经萎缩的进展。

引起牛反刍减少或停止的食源性中毒病的诊断及防治

反刍是反刍动物特有的、区别于其他非反刍动物的独特的消化方式,也是一种先天性、非条件反射行为,对反刍动物的生长发育具有重要意义。但在养殖过程中由于动物本身因素、季节因素和饲料因素常导致牛反刍行为减少或停止。通过对由食源性中毒病引起的牛反刍减少或停止进行概述,总结诊断与预防方法,以期提供参考。

四妙勇安汤通过JAK/STAT信号通路治疗下肢动脉硬化闭塞症的机制研究

目的:基于网络药理学方法预测四妙勇安汤治疗下肢动脉硬化闭塞症(ASO)的有效成分、潜在靶点及通路,结合细胞实验探讨其治疗ASO的作用机制。方法:通过TCMSP数据库筛选四妙勇安汤有效活性成分及靶点,运用GeneCards及OMIM数据库获取ASO相关蛋白;通过String平台对药物-疾病靶蛋白进行PPI网络构建,选择David数据库对四妙勇安汤-ASO靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析。筛选出与ASO相关性高的“药物-靶点-通路”,采用ox-LDL诱导血管平滑肌细胞损伤(VSMCs)模型,予四妙勇安汤含药学清干预,验证四妙勇安汤对ox-LDL所诱导的VSMCs治疗作用及其对高相关性靶点通路的调控作用。结果:共筛选得到四妙勇安汤药物有效活性成分126个,四妙勇安汤-ASO作用靶点共40个,99条GO生物过程和48条相关信号通路;实验结果显示,随着时间推移,四妙勇安各剂量组均能够显著抑制VSMCs增殖(P<0.05);与模型组比较,四妙勇安汤各剂量组BrdU阳性细胞百分比能明显抑制VSMCs增殖(P<0.05);此外,四妙勇安汤能够显著抑制IL-6、IL-1β水平(P<0.05);降低PCNA、JAK2及STAT3 mRNA表达水平(P<0.05);结论:四妙勇安汤治疗ASO具有“多成分、多靶点、多通路”的特点,可通过抑制JAK/STAT3信号通路的活化,起到抗炎和抑制血管平滑肌细胞增殖的作用。

Nrf2/HO-1信号通路与缺血再灌注损伤的研究进展

各组织器官在一定时间的缺血基础上恢复血流后,组织功能代谢障碍及结构破坏较缺血时反而加重的现象被称为缺血再灌注损伤(IRI)。IRI是一种不同于缺血时期损伤情况的复杂病理反应,也一直都是临床工作者研究的热点。核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)途径是参与机体抗氧化应激反应的重要信号通路,很多研究已显示激活Nrf2/HO-1通路后能够减轻缺血再灌注引起的损伤。本文对Nrf2/HO-1信号通路在IRI中所起的作用进行综述。

基于网络药理学分析当归活血汤治疗下肢动脉硬化闭塞症的作用机制

目的:分析当归活血汤治疗下肢动脉硬化闭塞症的有效活性成分及靶点的药理作用。方法:通过中药系统药理数据库与分析平台(TCMSP)筛选当归活血汤有效活性成分及靶点,运用GeneCard及OMIM数据库获取下肢动脉硬化闭塞症(ASO)相关蛋白;通过String平台对药物-疾病靶蛋白进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络构建,利用DAVID数据库,将所得到的当归活血汤-下肢ASO靶点进行基因本体(GO)富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果:当归活血汤药物有效活性成分234个,当归活血汤-下肢ASO作用靶点共26个;PPI网络分析结果发现IL-6、VEGFA、MMP-9、IL-10等可能是当归活血汤治疗ASO的关键靶点。共获得46条GO生物过程和167条相关信号通路,其中HIF-1、AGE-RAGE、IL-17、TNF等信号通路与下肢ASO的治疗密切相关。结论:基于网络药理学探究当归活血汤主要成分的靶点网络及其治疗下肢ASO的作用机制,为进一步对本病的基础实验研究提供新思路及科学依据。

初中物理与体育融合教学的尝试

物理学科知识比较抽象,如果教师在讲解知识时,纯粹照本宣科,会对学生在知识点的深度理解上、在学习物理知识的兴趣上,都有一定的负面影响。而初中物理教师若能突破本学科教学界线,将学生喜爱的体育学科知识融入物理学科中,就会增强学生学习的欲望,提高学科教学的成效。一、结合体育训练项目,启发学生的物理思维物理学科最重要的教学要求是培养学生的物理思维。物理思维有一定的物质支撑与架构,很多时候学生思考物理的过程也可以用物质的方式展示出来。

中药干预联合外科手术治疗下肢静脉溃疡临床效果的Meta分析

目的:系统评价中药干预联合外科手术治疗下肢静脉溃疡的疗效及安全性。方法:通过检索CNKI、万方、维普、CBM、Pubmed、Embase、The Cochrane Library数据库,查找相关文献,筛选符合纳入标准的随机对照试验,采用Stata 15.1软件对提取效应指标的相关数据进行统计分析。结果:本研究共纳入15篇文献,纳入1097例下肢静脉溃疡患者,其中治疗组552例,对照组545例,对照组均行外科手术治疗或给予常规清洁换药;治疗组均给予中药(外治、内治、内外结合)联合外科手术,疗程为3 d~3个月。Meta分析结果显示,中药干预能明显提高临床疗效[ARR=-0.13(-0.18,-0.09),I2=0.0%,P=0.627,NNT=-8(-11,-6)],缩短溃疡愈合时间[SMD=-1.52(-2.08,-0.97),P<0.001],减小溃疡面积[SMD=-1.69(-3.27,-0.11),P=0.036];治疗组与对照组的溃疡复发率差异无统计学意义[ARR=-0.14(-0.24,-0.03),I2=0.00%,P=0.868,NNT=-7(-33,-4)]。结论:中药干预联合外科手术提高了手术治疗下肢静脉溃疡的临床疗效,能够缩短溃疡愈合时间,减小溃疡面积,降低溃疡复发率。

重组SPLUNC1蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊的免疫调节作用研究

为研究重组SPLUNC1蛋白对感染绵羊肺炎支原体(MO)后的盘羊杂交羊免疫调节作用,本研究将6只巴什拜羊分为A组,18只盘羊杂交羊随机分为B、C、D组,对实验羊人工感染MO后第5 d,C组气管注射巴什拜羊重组SPLUNC1蛋白、D组气管注射盘羊杂交羊重组SPLUNC1蛋白,每天150μg/只;A、B组每天气管注射等量的生理盐水作为对照组。采用ELISA方法检测各组羊血清中MO抗体水平以及IL-8、IL-12、IL-13表达水平。结果显示,感染前所有实验羊MO抗体均为阴性,感染后第14 d所有实验羊MO抗体均为阳性;IL-8水平在感染后第14 d^21 d,A、C、D组极显著和显著地低于B组(p<0.01;p<0.05;p<0.01)。IL-12水平在感染后第14 d,A、C和D组极显著和显著地低于B组(p<0.01;p<0.05;p<0.01),第21 d时,A、C和D组极显著低于B组(p<0.01)。IL-13水平在感染后第5 d,A组显著低于B、C和D组(p<0.05),在第7 d^21 d,A、C、D组显著和极显著低于B组(p<0.05;p<0.01;p<0.01)。实验数据表明重组SPLUNC1蛋白对盘羊杂交羊具有明显的免疫调节作用。本研究为绵羊支原体肺炎的治疗提供了实验依据。

双抗对照单抗血小板聚集治疗下肢动脉硬化闭塞症效果的Meta分析

目的:比较双抗对照单抗血小板聚集治疗下肢动脉硬化闭塞症的临床疗效。方法:计算机检索PubMed、Embase、The Cochrane Library、CNKI、CBM、万方、维普等中英文数据库,搜集以双抗血小板聚集对照单抗血小板聚集治疗下肢动脉硬化闭塞症的临床随机对照试验。按照Cochrane偏倚风险评价对纳入文献进行质量分析,采用Revman5.3软件进行数据分析。结果:本次研究共纳入5篇文献,共419例患者,Meta分析结果显示双抗总有效率明显优于单抗[OR=3.62(1.85,7.11),I2=0%,P<0.01],双抗治疗后踝肱指数上升优于单抗[SMD=0.44(0.22,0.67),I2=0%,P<0.01],差异均有统计学意义。结论:双抗血小板聚集治疗下肢动脉硬化闭塞症临床总有效率及ABI指数优于单抗。尚需更多高质量的大样本随机对照试验验证。

重组SPLUNC1抑菌及调节NE活性的研究

为研究重组绵羊短腭、肺及鼻咽上皮克隆1蛋白(rSPLUNC1)的抑菌活性及对中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)活性的调节作用,本实验采用微量稀释法测定rSPLUNC1对巴氏杆菌、大肠杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌生长的抑制作用;采用显色底物检测法测定rSPLUNC1对NE活性的调节作用。抑菌检测结果表明10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL rSPLUNC1能够极显著地抑制巴氏杆菌、大肠杆菌的生长(p<0.01),并且呈剂量效应;显色底物检测结果表明10μg/mL和20μg/mL^40μg/mL rSPLUNC1可以显著和极显著地提高绵羊肺炎支原体(Mo)感染的外周中性粒细胞NE的活性(p<0.05,p<0.01)。表明rSPLUNC1能够抑制革兰氏阴性菌的生长并提高NE活性,可能有助于机体抵御呼吸道的感染。

基于网络药理学分析达明饮治疗糖尿病视网膜病变的作用机制研究

目的利用网络药理学方法,研究达明饮治疗糖尿病视网膜病变(DR)的药理机制。方法运用中药系统药理(TCMSP)数据库筛选达明饮生物活性成分及潜在的作用靶点;同时检索GeneCards、OMIM数据库挖掘DR的相关疾病靶基因,对2种靶点进行PPI网络构建,交互得到达明饮治疗DR的关键靶点;采用Cytoscape3.7.1软件绘制达明饮活性成分-DR靶点网络;配合String数据库及Cytoscape3.7.1软件,构建蛋白相互作用(PPI)网络;通过DAVID注释数据库对药物及疾病的靶点进行GO生物学过程、京都基因及基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果达明饮共包含68个有效活性成分及119个靶点,DR共包含1023个治疗靶点,将药物靶点与疾病靶点相互映射共获取41个共同靶点。PPI蛋白互作网络发现IL6、MAPK8、VEGFA、CASP3等可能是达明饮治疗DR的核心治疗靶点。通过GO功能分析确定66个相关条目,KEGG富集分析确定113条相关信号通路,主要包括AGE-RAGE信号通路、Apoptosis信号通路、PI3K-Akt信号通路等。结论达明饮治疗DR是一个“多成分-多靶点-多通路”复杂过程,为进一步研究达明饮治疗DR的物质基础及作用机制提供了理论依据。

盘羊杂交羊SP-A基因克隆与真核表达

目的为了对盘羊杂交羊肺表面活性物质相关蛋白A(Pulmonary surfactant-associated protein A,SP-A)基因进行克隆和真核表达。方法采集盘羊杂交羊肺组织,提取总RNA,采用RT-PCR的方法克隆SP-A基因的ORF序列,测序正确后将其亚克隆到pPIC9K载体中构建pPIC9K-SP-A真核表达质粒,再将该质粒电转入毕赤酵母GS115中并用甲醇诱导进行真核表达,最后用SDS-PAGE和western blot检测鉴定目的蛋白。结果扩增出的基因片段经测序比对后与SP-A基因的ORF序列一致,构建的真核表达质粒pPIC9K-SP-A经双酶切和测序鉴定成功,真核表达产物用SDS-PAGE分析,可见大小为27.33 k D的目的条带,western blot鉴定也可见1条27.33 kD的目的蛋白条带。结论本研究成功克隆了盘羊杂交羊SP-A基因的ORF序列并对其进行了真核表达,为后续研究SP-A蛋白的结构和功能奠定了基础。

RACE法克隆巴什拜羊SP-A基因及序列分析

【目的】为扩增巴什拜羊的肺表面活性物质相关蛋白A(Pulmonary surfactant-associated protein A,SP-A)基因cDNA全长序列并对该序列进行分析。【方法】根据已报道的GenBank中绵羊SP-A基因的开放阅读框序列来设计RACE引物,后用RACE法对巴什拜羊SP-A基因的3'端和5'端序列进行扩增,经华大公司测序和DNAMAN软件拼接最终得到巴什拜羊的SP-A基因cDNA序列全长。【结果】克隆得到SP-A基因的cDNA其全长为1962 bp,其开放阅读框序列长度为789 bp,编码的氨基酸数量为262,经DNASTAR软件分析其蛋白的分子量为27.53 kDa,等电点4.949。分析系统进化树后发现巴什拜羊与绵羊氨基酸的序列同源性最高。【结论】本研究结果可为后续更加深入研究新疆巴什拜羊SP-A基因的功能奠定基础。

巴什拜羊SPLUNC1基因的克隆与真核表达

为了克隆巴什拜羊SPLUNC1基因并表达该蛋白,本试验从巴什拜羊肺脏组织中提取总RNA,利用RTPCR方法扩增出SPLUNC1基因开放阅读框序列,将该基因片段插入到真核表达质粒pPIC9K中构建pPIC9K-SPLUNC1重组质粒,然后将pPIC9K-SPLUNC1重组质粒线性化并电击转化入毕赤酵母GS115中,经甲醇诱导蛋白表达后用SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定目的蛋白。结果表明,经RT-PCR扩增成功获得大小为748bp的SPLUNC1基因;构建的pPIC9K-SPLUNC1重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定与预期结果一致;SDS-PAGE及Western blotting检测鉴定结果表明获得大小为25.53ku的SPLUNC1蛋白。本试验结果为进一步研究巴什拜羊SPLUNC1蛋白的生物学活性奠定基础。

降纤抗凝法干预治疗继发性下肢淋巴水肿23例

目的:观察巴曲酶、低分子肝素钠和七叶皂苷钠治疗继发性下肢淋巴水肿的疗效。方法:选取继发性下肢淋巴水肿患者23例,给予巴曲酶、低分子肝素钠和七叶皂苷钠治疗7天,观察下肢髌骨10 cm处周径差值、纤维蛋白原(FIB)、临床分期的变化,评价疗效。结果:23例总有效率78%,显效7例,有效11例,无效5例;与治疗前相比,FIB下降至(2.59±0.67)g/L,周径差值缩小至(1.60±0.54)cm,差异均具有统计学意义(P<0.05);而凝血试验的其余指标未见异常,未见出血反应。结论:巴曲酶、低分子肝素钠和七叶皂苷钠联合治疗继发性下肢淋巴水肿效果显著。

巴什拜羊与其杂交羊对绵羊肺炎支原体感染的比较

为了比较巴什拜羊与其杂交羊对绵羊肺炎支原体(MO)感染的差异,将6只巴什拜羊和6只杂交羊人工感染MO,分别观察其临床症状和病理解剖变化,用ELISA方法分别检测血清中IL-1β、IL-6、IL-9及IFN-γ的浓度,制作肺部组织切片观察组织病理学变化,并进行组织病理学评分。结果显示,感染后杂交羊比巴什拜羊表现出更严重的、典型的支原体肺炎的临床症状和病理剖检变化。组织病理学评分结果显示,杂交羊的评分显著高于巴什拜羊。相关细胞因子检测结果显示,杂交羊血清中IL-1β、IL-6、IL-9及IFN-γ的浓度均显著高于巴什拜羊。结果表明,巴氏拜羊对MO感染具有一定的抗性,而杂交羊对MO较易感。

中西医结合治疗非增殖期糖尿病视网膜病变的疗效性与安全性meta分析

目的系统评价中西医结合治疗非增殖期糖尿病视网膜病变(NPDR)的有效性及安全性。方法检索中国期刊全文数据库(CNKI)、维普中文期刊数据库(VIP)、万方数据库(Wan Fang Data)、中国生物医学文献数据库(CBM)、PubMed、The Cochrane Library等中英文数据库,纳入以中西医结合作为干预措施治疗NPDR的临床随机对照试验文献,文献检索年限自2010年1月~2019年7月。采用Cochrane协作网提供的Stata15.1软件对临床总有效率、空腹血糖水平(FBG)、视力变化、血液流变学变化作为主要的结局指标进行系统评价。结果共纳入13篇文献,1250例患者。合并meta分析结果显示,中西医结合治疗NPDR能够提高临床疗效[OR=1.29,95%CI(1.09,1.51),P=0.003,I^2=0%,Z=2.96];降低患者空腹血糖水平[SMD=-1.23,95%CI(-2.25,-0.21),P=0.000,I^2=91.1%,Z=2.36];改善患者视力[SMD=0.54,95%CI(0.32,0.75),P=0.000,I^2=28.7%,Z=4.7];降低血液流变学指标[全血黏度低切SMD=-0.48,95%CI(-0.68,-0.26),P=0.000,I^2=0%,Z=4.84]、[全血黏度中切SMD=-0.46,95%CI(-0.79,-0.13),P=0.006,I^2=46.4%,Z=2.77]、[全血黏度高切SMD=-1.36,95%CI(-2.31,-0.41),P=0.000,I^2=93.7%,Z=2.88]。结论中西医结合治疗NPDR的疗效明显,可延缓NPDR患者的各项症状,提高患者的生活质量。

杞菊地黄丸联合常规西药治疗干眼随机对照试验的系统评价及Meta分析

目的系统评价杞菊地黄丸联合常规西药治疗干眼的有效性和安全性。方法检索2010年7月—2019年7月中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库、维普中文期刊数据库(VIP)、中国生物医学文献数据库(CBM)、PubMed、The Cochrane Library等中英文数据库,纳入以杞菊地黄丸联合西药作为干预措施治疗干眼的临床随机对照试验研究(RCTs),对纳入的研究进行质量评价。采用Stata15.1软件对总有效率、泪膜分泌量、泪膜破裂时间、干眼症状评分为结局指标的研究进行Meta分析。结果最终纳入9篇RCTs,共742例患者。Meta分析结果表明,与单纯西药治疗相比,杞菊地黄丸联合西药治疗干眼的能提高总有效率(OR=1.27,95%CI[1.08,1.50],Z=2.89,P=0.004)、泪膜破裂时间(SMD=1.73,95%CI[1.19,2.27],Z=6.33,P=0.000)、泪液分泌量(SMD=0.95,95%CI[0.78,1.12],Z=2.66,P=0.008),降低干眼症状评分(SMD=-0.71,95%CI[-1.11,-0.30],Z=5.40,P=0.000),差异均具有统计学意义。结论杞菊地黄丸联合西药治疗干眼的临床疗效优于单纯西药治疗,可改善干眼患者各项临床症状及体征,安全性较高。