包裹破伤风类毒素蛋白的聚乳酸及聚乳酸/聚乙醇酸共聚微球的制备和体外释放特性

目的 探索包裹破伤风类毒素蛋白 (TT)的聚乳酸 (PLA)及聚乳酸 /聚乙醇酸 (PLG)共聚微球的制备及其体外释放特性。方法 采用溶剂蒸发技术 ,先以一种小分子量生物染料 伊文思蓝为包裹物模型 ,通过显微镜观察和比色分析探索微球的制备特性和最佳条件。在此基础上制备包裹TT的PLA和PLG微球。结果 微球的制备过程中存在着内水相蛋白朝外水相的流失 ,当聚合物浓度加大到 2 5 %～ 30 %时可使蛋白流失大大减少。包裹蛋白在微球中的分布与微球粒径的重量分布成正相关关系 ;随着微球粒径的增大 ,微球所载蛋白的体外释放高峰期延迟。结论 通过本模型条件可制备外观高质量的微球 。

用免疫细胞化学、RT-PCR等方法定量检测狂犬病毒及其核酸的比较研究

目的比较多种定量检测狂犬病毒(RV)及其核酸的方法。方法采用免疫细胞化学(ICCA)、RT-PCR、间接和直接免疫荧光(FA)以及细胞ELISA(CELISA)等多种方法对感染细胞单层的RV进行定量检测,比较和评价用不同方法检测RV的灵敏度和稳定性。结果采用ICCA法可在3h内对培养24h的RV进行准确和定量检测,可检测到RV的单个病灶(FFU),其灵敏度和稳定性与FA相当而优于CELISA;用RT-PCR的方法检测RV mRNA具有很高的灵敏度,通过测定RT-PCR产物电泳条带的灰度值,并经GAPDH基因校正,在感染细胞RV的量与其RT-PCR产物间建立了量效关系曲线及曲线方程,其决定系数(R2)达0.96。结论建立了多种方法对RV进行定量检测,其中用ICCA检测可在不使用荧光显微镜情况下对RV进行定量检测,经济实用,适于基层推广使用;用RT-PCR的方法亦可高灵敏度地检测RV的核酸,并进行定量分析。

狂犬病毒在不同细胞培养中持续感染的特性研究

用狂犬病毒CVS株鼠脑感染BSR、BHK和MNA细胞，建立了不同的持续感染狂犬病毒的细胞株（PIRVC），实验表明，不同的PIRVC均经历了一个急性感染期和一个漫性感染期。在急性感染期，释放到上清的病毒滴度经过了一段高振幅的周期性上下波动后，大量细胞脱落，由少数贴壁细胞生长成片，从而进入一个慢性感染期。这一时期释放到上清病毒滴度的波动幅度急剧下降直至丧失。同时对PIRVC急性期病毒增殖特性进行了动态观察，以便利用此特性进行诊断试剂的制备等。

用蚀斑法滴定痘苗病毒的准确性及其精确数学模型的探讨

用蚀斑法滴定病毒是确定感染病毒颗粒存在数量的一种较准确方法。本实验表明，痘苗病毒吸附4h后仍有大量病毒粒子未能吸附到细胞单层，进而测定出病毒接种量、维持液加量和所测病毒滴度间具有一种互为消长的非线性相关性。因而设计了几种检测方法，其准确性均优于常规痘苗病毒蚀斑测定法。利用装配有Mathematic软件包的计算机在痘苗病毒接种量、维持液加量和所测病毒滴度间建立了曲线拟合模型和曲面拟合模型。通过曲线拟合模型推断病毒感染滴度为常规法滴定值的近5倍。

用狂犬病毒核蛋白基因小干扰RNA库抑制狂犬病毒复制和感染的研究

采用RNaseⅢ消化长片段双链RNA的方法,制备了狂犬病毒N基因、P基因和G基因小干扰RNA库(siRNACocktail)。将siRNA转染BSR和MNA细胞单层后,采用直接免疫荧光法观察发现,N基因siRNACocktail能够对RV的复制和感染产生明显和稳定的抑制作用,并且通过RT-PCR在转录水平探测到mRNA产量的降低;而P基因或G基因siRNACocktail对RV的复制和感染不产生或仅产生弱的抑制作用。这一结果为RNA干扰在RV研究中靶基因的选择及进一步的应用提供了依据。

靶向PV株核蛋白基因的小分子干扰RNA对不同狂犬病病毒毒株复制的交叉抑制作用

目的研究小分子干扰RNA(siRNA)对狂犬病病毒(RV)不同毒株复制的交叉抑制效果。方法采用体外转录和RNA酶III消化长片段双链RNA的方法制备8条以RV的PV株核蛋白(N)基因为靶基因的21ntsiRNA,用以转染已经感染了不同滴度PV、CTN或CVS株RV的BSR细胞,采用直接免疫荧光法观察转染的siRNA对已感染BSR细胞的不同毒株RV复制的抑制效果,并分析这种抑制效果与靶基因序列的相关性。结果不同21ntsiRNA均对PV株的复制产生了较强的抑制作用;对CTN株和CVS株的交叉抑制作用观察结果表明,21ntsiRNA与靶基因在碱基错配高达5个的情况下仍对病毒复制保持抑制效应。然而,siRNA与靶基因碱基错配的位置与抑制作用的丧失高度相关。3’端第2个碱基的错配将使抑制作用表失,随后的碱基错配对抑制作用的影响依次降低;中部碱基错配影响较小;而5’端碱基错配对抑制作用几乎没有影响。结论siRNA对靶基因的抑制作用的丧失与其同靶基因序列碱基错配的位置相关,3’端碱基错配可降低其抑制作用的特异性,产生偏靶效应的范围和概率可能增大,这为设计独特的siRNA序列提供了新的思路。

狂犬病毒糖蛋白重组痘苗病毒的热稳定性

将狂犬病毒糖蛋白重组痘菌病毒422株（简称重组病毒）放37℃3天后，滴度下降不到1个对数值，与亲本林之间无明显差异；而对照狂犬病毒放37℃3天，滴度下降3．5个对数值．在重组病毒中加有5％蛋白际作保护剂，保护率达51．6％～926％；放37℃3天，下降不到0．5个对数值，放22℃和4℃更稳定．

聚乳酸/聚乙醇酸可生物降解微球的制备及其对RNP的佐剂作用

目的 制备包裹狂犬病毒核衣壳 (RNP)的PLA/PLG可生物降解微球 ,并观察其对RNP的佐剂作用。方法 以蛋白载量、包裹率、微球形态及粒径分布作为评价微球质量的指标 ,通过变换制备条件 ,获取质量较好的微球 ;观察三种不同聚合物材料制成的RNP微球在体外 37℃条件下的水解和释放 ;比较不同微球免疫效果。结果 PLA/PLG微球作为RNP载体 ,单剂接种诱生实验动物的抗NP抗体与AL(OH) 3 佐剂两次接种的滴度接近 ,但明显好于不加佐剂的对照组。结论 PLA/PLG微球对RNP具有良好的佐剂作用。

检测轮状病毒滴度的荧光灶法的改进

目的对检测轮状病毒滴度的荧光灶试验(FFA)方法进行改进。方法以FFA法检测轮状病毒滴度,并观察残留血清、病毒吸附量、甲基纤维素、离心以及Ca2+等因素对检测结果的影响,并验证改进后FFA的重复性。结果残留血清、病毒接种量、吸附后不洗涤、PBST洗板对FFA检测结果均无影响。而接种病毒后离心及不加甲基纤维素覆盖与对照组比较,差异有显著意义。用改进后方法对同批病毒进行18次试验,CV值为1.7%。结论改进后的方法具有操作简便、结果稳定、重复性好等优点。

肠道病毒71型抗原ELISA定量检测方法的建立及应用

目的建立肠道病毒71型（EV71）抗原ELISA定量检测方法,用于EV71疫苗生产工艺中抗原定量检测。方法选取抗EV71单克隆抗体作为包被抗体,HRP标记抗EV71多克隆抗体作为酶标二抗,建立EV71抗原ELISA定量检测方法。该方法经系统验证后,应用于定量检测2BS及Vero细胞基质EV71疫苗生产工艺过程样品的抗原含量。结果验证结果显示,该方法的线性范围为3.125~50.000 U/m L,样品回收率为92.0%~110.0%,变异系数小于8.8%;孵育时间及温度在一定范围内偏差的样品回收率为100.8%~113.8%;检测其他肠道病毒中抗原其A值均小于cut-off值;试剂于37℃孵育3 d后的检测样品回收率为101.4%~112.4%;2BS及Vero细胞基质EV71疫苗生产工艺过程样品的适用性检测中,抗原回收率为92.1%~114.9%。结论建立并验证EV71抗原ELISA定量检测方法,其准确度、精密度、耐用性均优良,特异性强、稳定性好,适用于不同细胞基质的EV71疫苗及多价手足口病疫苗生产工艺过程的质量控制。

狂犬病毒G蛋白和N蛋白在痘苗病毒天坛株中共同表达

本文构建了一个能同时表达狂犬病毒糖蛋白（Ｇ）和核蛋白（Ｎ）两种蛋白的重组痘苗病毒。用Ｓｏｕｔｈｅｍｂｉｏｔ和免疫荧光等方法证明Ｇ和Ｎ基因已重组到痘苗病毒ＴＫ基因区，而且能良好地表达。并证明该重组病毒在小鼠中具有良好的免疫效果。

呼吸道合胞病毒单克隆抗体的制备及鉴定

目的:建立能稳定分泌抗呼吸道合胞病毒(RSV-long株,国际标准株)单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法:杂交瘤技术制备单抗,鉴定各项特性。结果:培育出稳定分泌抗RSV蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞5株。杂交瘤细胞株染色体数目在89～104条之间,其分泌的抗体分别属于鼠IgG1、IgG2a、IgG2b亚类,各种腹水单抗的荧光效价在1∶4000～1∶16000之间。一种单抗识别RSV基质蛋白(M),两种单抗识别RSV融合蛋白(F),另两种单抗识别RSV核衣壳蛋白(N)。单抗中和效价最高达1∶64。相加指数证实5种单抗识别不相关的抗原表位。用硫氰酸铵洗脱法比较了五种单抗相对亲和力的大小,依次为:1#>2#>4#>3#>5#。所有杂交瘤细胞株,经连续3个月培养及冻存半年后复苏,细胞生长良好,检测上清,其分泌抗体效价稳定。结论:已获得抗呼吸道合胞病毒的单克隆抗体,为RSV感染的早期诊断及进一步研究奠定了基础。

狂犬病毒核蛋白(NP)的纯化及其免疫原性的研究

对重组痘苗病毒和重组杆状病毒表达的狂犬病毒NP及原代地鼠肾细胞培养的狂犬病毒核衣壳蛋白 (RNP) ,先经SepharoseCL 4B分子筛柱初步提纯 ,再以抗狂犬病毒NPMcAB 2C12 Sepharose 4B亲和层析柱纯化分离 ,经ELISA ,SDS PAGE电泳和Western Blot分析证实 ,获得了高纯度和免疫反应性的NP和RNP。以相同剂量的纯化蛋白免疫小鼠 ,RNP和两种重组NP均可诱生特异的抗NP抗体 ,三种蛋白间无明显差异 ;狂犬病毒CVS株攻击保护实验结果显示 ,三种蛋白免疫的小鼠存活率约为 5 0 %;

单克隆抗体在呼吸道合胞病毒感染诊断和防治中的应用

呼吸道合胞病毒 (RSV)是世界范围内婴幼儿下呼吸道感染的重要病原 ,目前尚无成熟疫苗应用于临床。展开对RSV被动免疫的研究显得尤为重要。单克隆抗体成为深入研究和防治RSV感染的有力武器。本文综述了单克隆抗体在RSV感染的诊断。

狂犬病毒糖蛋白重组痘苗病毒“422”株的免疫效果观察

狂犬病毒糖蛋白重组痘苗病毒(V-RG)422株,对小鼠、豚鼠及家兔免疫,于14天血清抗体100％阳转 其平均滴度≥1:90。免疫的小鼠对狂犬病毒CVS株以及ERA、北京(Beijing)、CTN-HD、Wuhan(WH)等其他毒株致死剂量的的脑内或肌肉内的攻击都有很好的保护力。免疫的家兔及豚鼠都能抵抗CVS病毒致死量的脑内或肌肉内的攻击而免发狂犬病。获得的血清抗体能中和aG株及Plury(LEP)株等国内外狂犬病毒,其中和指数为3.33～4.5Log10。表明V-RG422株的免疫原性令人满意。

中国各界对日本关东大震灾的赈济

一1923年9月1日中午11时58分,日本关东地方南部发生了一场空前强烈的大地震。烈度达7.9～8.2级。震灾波及一府(东京)八县(神奈川、埼玉、群马、枥木、茨城、千叶、静冈、山梨)。地震与海啸同时袭来.沿海一带被海潮冲卷一光。东京。

明治维新一九一一年下限说质疑

引言明治维新是日本历史上一次划时代的变革,是日本发展资本主义的起点,是日本近代史的开端,对其后日本资本主义社会发展的历史进程具有决定性的影响。但是,对于明治维新的上下限应如何划定,同如何评价明治维新性质问题一样,几十年来众说纷纭,争论不休,在维新研究史上,既是老问题,又是新问题。关于明治维新的上限,问题似乎简单一些。明治以来一般的历史书,多认为明治维新开始于1853年的“黑船来航”。二十世纪二十年代起。

让党员干部下基层成为群众工作的常态

机关干部下基层开展帮扶工作是党的群众路线的具体体现，应该让党员干部下基层经常化、制度化、规范化，成为为群众解决实际问题的立足点，成为贴近民众连接民心的纽带和桥梁。

浅谈四君子汤加草药爵床治疗小儿疳积100例比较

四君子汤为中医常用方剂，具有补氟健脾功用，多用于脾胃氟虚，运化无力，食少便溏，消化不良，胃肠机能紊乱……等。用四君子汤加味如异功散、六君子汤、香砂六君子汤。其作用大同小异。现仅就异功散与四君子汤加草药爵床（为便于缩写以下简称4＋1）治疗小儿疳积100例疗效作一比较。