汉滩病毒核蛋白T细胞表位的鉴定及其特异性T细胞应答规律的初步探讨

目的:鉴定引起肾综合征出血热(HFRS)的汉滩病毒核蛋白(HTNV-NP)的T细胞表位,并探讨其特异性T细胞应答的规律。方法:合成覆盖HTNV-NP全长序列的全套部份重叠15肽,用ELISPOT方法筛选能刺激HFRS患者外周血单个核细胞(PBMC)产生IFN-γ的15肽,并测定其特异性T细胞的频率。结果:47例HFRS患者中,有18例可对HTNV-NP产生特异性T细胞应答,并发现在病程的早期就已开始产生T细胞应答。从11例患者PBMC中,鉴定出了17种HTNV-NP特异的T细胞表位,其中14种T细胞表位为首次报道,T细胞表位主要位于NP一级结构的中部。结论:HFRS病程早期即可产生特异性T细胞应答,T细胞表位主要位于NP序列的中部,T细胞应答可能在汉滩病毒感染过程中起重要的免疫保护作用。

EB病毒转化B淋巴母细胞在汉滩病毒CTL表位研究中的应用

目的:建立EB病毒转化B淋巴母细胞系(B-LCL),作为抗原提呈细胞(APC)提呈抗原肽,刺激短期培养的特异性T细胞活化并分泌IFN-γ,从而应用于T细胞表位鉴定中。方法:用B95-8细胞培养上清中的EB病毒转化肾综合征出血热(HFRS)患者PBMC,建立HFRS患者的B-LCL,以自身B-LCL为APC,加载抗原肽后,刺激短期培养的G9L特异的HFRS患者CD8+T细胞系,应用ELISPOT测定CD8+T细胞受到抗原肽刺激后产生IFN-γ的能力。结果:加载过抗原肽G9L或V15R的B-LCL可刺激G9L特异的CD8+T细胞活化并产生IFN-γ,而与G9L无同源序列的I15P则不能刺激G9L特异的CD8+T细胞活化。结论:B-LCL可作为非专职APC有效地将抗原肽提呈给特异性T细胞。

流行性出血热病毒的细胞培养

用灭活的流行性出血热病毒 (EHFV) L99株感染传代培养的 Vero- E6细胞 ,第 4 d5 0 %的Vero- E6细胞胞浆内可查到对 EHFV鼠血清的特异性荧光 ,第 7～ 10 d阳性细胞数达到 10 0 %.用感染第 3d的细胞培养上清大批量盲种 ,第 7～ 10 d荧光强度均达到 + + + + .电镜下病毒呈圆形或卵圆形 ,外膜为电子致密层 ,界面清楚 ,包绕着比较疏松的内浆 ,内浆中有若干个颗粒丝状结构 .

汉滩病毒核蛋白HLA-A*02限制性CTL表位的预测及实验鉴定

目的:采用人工神经网络模型及在线软件BIMAS和SYFPEITHI共同预测汉滩病毒核蛋白HLA-A)02限制的CTL表位,并对CTL表位进行实验鉴定。方法:①选取2004-11解放军第四军医大学唐都医院住院的肾综合征出血热患者1例,汉滩病毒特异性IgM抗体为阳性。无菌抽取肾综合征出血热患者外周血,分离外周血单个核细胞,液氮冻存备用。②采用JavaNNS软件模拟神经系统对信息的处理过程,建立人工神经网络模型。训练人工神经网络的9肽包括584种HLA-A)02结合肽和130种HLA-A)02非结合肽,随机数字表法分为3部分:80%为训练肽(用来训练模型,使其学习其中隐含的规律),10%为确认肽(防止训练过度,使训练在适当的时候终止),10%为试验肽(对训练好的模型进行初步的评价)。无、低、中、高亲和力9肽训练人工神经网络的输出值分别为0.1,0.4,0.6,0.8。因此,人工神经网络模型的默认阈值为0.4。此外,还应用在线软件BIMAS和SYFPEITHI,共同预测汉滩病毒核蛋白的CTL表位。③采用ELISPOT鉴定汉滩病毒核蛋白特异的HLA-A)02限制的CTL表位。结果:①人工神经网络、BIMAS和SYFPEITHI预测的准确度:3种方法预测的灵敏度分别达到0.89,0.78,0.97,特异性分别为0.90,0.87,0.20。三者共同预测到23个汉滩病毒核蛋白特异的CTL表位。②HLA-A)02限制的CTL表位的实验鉴定:在可刺激肾综合征出血热患者外周血单个核细胞产生阳性反应的3条15肽中,预测到了4个HLA-A)02限制的CTL表位。经ELISPOT实验证实,其中的2种9肽可刺激HLA-A)02阳性的肾综合征出血热患者外周血单个核细胞分泌γ干扰素。结论:肾综合征出血热患者中存在着汉滩病毒特异的CTL应答。汉滩病毒核蛋白CTL表位的有效预测,大幅度减少了合成候选9肽的数量,降低了成本。为肾综合征出血热细胞免疫应答的研究以及多肽疫苗的设计,奠定了重要基础。

流行性出血热病毒单克隆抗体的制备及其IgM捕获ELISA的建立

用灭活的流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ） 免疫小鼠获得４ 株能分泌ＥＨＦＶ 特异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ） 的杂交瘤细胞．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 结果表明４ 株ＭｃＡｂ 能专一地识别ＥＨＦ 病毒的分子量为５６ｋＤ的囊膜糖蛋白Ｇ２ ．交叉实验结果表明４ 株ＭｃＡｂ 与野鼠型病毒株７６１１８ 和家鼠型病毒株Ｌ９９ ，Ｒ２２ 等均有反应，而与流感病毒、轮状病毒等均无交叉反应，表明４ 株ＭｃＡｂ 具有较高的特异性．用６Ｂ１１ ＭｃＡｂ 组建ＩｇＭ 抗体捕获ＥＬＩＳＡ 试剂盒，试测临床标本．２５ 例临床确诊ＥＨＦ病人血清中特异性ＩｇＭ 抗体全部阳性．７０ 例正常献血员血清全部阴性．ＥＬＩＳＡ 试验方法简单，敏感性好，可建立试剂盒应用于临床．

IL-21在ITP中的表达及大剂量地塞米松对其调控的研究

目的:探究免疫性血小板减少症(immunologic thrombocytopenia,ITP)与IL-21表达异常的相关性,同时探究大剂量地塞米松(high-dose dexamethasone,HD-DXM)冲击治疗ITP的疗效是否与IL-21有关。方法:抽取26例初诊ITP患者及24例健康人的外周血10 ml,密度梯度离心法获得血清及单个核细胞,分别采用流式细胞术和实时荧光定量PCR法检测单个核细胞IL-21的表达,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测ITP治疗前后及正常对照者血浆中IL-21,IFN-γ和IL-4的水平。结果:流式细胞术测定发现,ITP患者单个核细胞表面分子IL-21表达明显高于健康对照(13.07%vs 8.2%);ITP患者IL-21 mRNA(9.524±0.97)与健康对照组(3.701±0.60)存在显著统计学差异,经HD-DEX治疗后IL-21 mRNA的比率值(5.87±1.21)较治疗前显著降低(P<0.01);ITP患者血清中IL-21和IFN-γ水平与健康对照组和HD-DEX治疗组相比均具有显著的统计学差异(P<0.01);而IL-4在治疗后含量却上调,与治疗前相比有统计学意义。结论:IL-21的表达异常参与了ITP发病过程,地塞米松对ITP的疗效与下调IL-21表达有关。

腺苷A2A受体与神经系统疾病

作为一种重要的神经递质,腺苷能通过与细胞膜上的腺苷受体(adenosine receptors,AR)结合而发挥细胞调节作用。AR属于G蛋白偶联受体家族,哺乳动物的AR至少包含A1、A2A、A2B和A3等4个亚型,其中A2A受体与多种临床疾病的发生、发展都有着密切的关系。本文主要综述了A2A受体与多种神经精神疾病之间关系的研究进展,以期为这些疾病的防治研究提供新的线索。

硼替佐米联合自体外周血造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤

本研究探讨硼替佐米联合自体外周血造血干细胞移植(APBSCT)治疗多发性骨髓瘤(MM)的疗效。对5例MM患者行自体外周血造血干细胞移植,在APBSCT前和预处理中以及移植后的维持治疗中均应用硼替佐咪治疗。选择预处理方案为:硼替佐米(bortezomib)+马法兰(melphalan)。输注的外周血单个核细胞(PBMNC)数为4.06×108(4.09×108-4.37×108)/kg,CD34+细胞数为3.98×106(2.49×106-8.2×106)/kg。结果表明:5例患者造血完全重建,中性粒细胞(ANC)大于0.5×109/L中位时间为14(13-25)天,Plt大于50×109/L中位时间为28(21-58)天。无移植相关死亡病例,5例患者均无病生存。结论:硼替佐米联合自体外周血造血干细胞移植是治疗MM的有效方法,移植后给予硼替佐米维持治疗可能是患者延长生存时间、提高生活质量的较好方法。

多巴胺对C8胶质细胞生长及LMO3和CIB1表达的影响

目的了解多巴胺对C8胶质细胞生长的影响、可能受体途径以及对CIB1、LMO3表达的影响。方法采用MTT方法检测多巴胺、多巴胺受体激动剂、多巴胺受体拮抗剂对C8胶质细胞生长增殖的作用,同时采用免疫荧光组化法检测不同浓度多巴胺对C8胶质细胞中LMO3、CIB1表达及定位的影响。结果多巴胺对C8胶质细胞的作用与浓度相关,低浓度(10μmol/L)对C8胶质细胞生长无明显影响,中浓度(100μmol/L)可明显促进C8胶质细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),而高浓度(500μmol/L)则抑制C8胶质细胞生长(P<0.05);多巴胺处理组比多巴胺D1激动剂组促C8胶质细胞生长作用明显,同时加入多巴胺及D2受体拮抗剂组比多巴胺处理组C8胶质细胞显著增加(P<0.01)。低浓度(10μmol/L)多巴胺显著增加C8胶质细胞LMO3的表达水平(P<0.05);高浓度(500μmol/L)多巴胺则降低CIB1蛋白的表达(P<0.05)。结论多巴胺主要通过多巴胺D2受体对C8胶质细胞生长增殖起作用,并呈浓度相关性,多巴胺D2受体拮抗剂对C8胶质细胞促增殖作用有协同性,不同浓度多巴胺对C8胶质细胞中CIB1及LMO3的表达影响不同,具体作用机制还有待进一步研究。

钙整合素结合蛋白1慢病毒干扰载体的构建及表达

目的构建人钙整合素结合蛋白1(calcium-and integrin-binding protein 1,CIB1)基因RNA干扰慢病毒载体,获得稳定下调CIB1表达的慢病毒。方法根据CIB1的序列,设计siRNA序列,克隆入慢病毒核心质粒pGV112中,并与辅助质粒一起转染293T细胞进行病毒包装,用慢病毒感染293T细胞并测定病毒滴度。以CIB1干扰慢病毒感染人胶质瘤细胞SHG44后,应用Western blotting方法检测CIB1的表达。结果成功构建CIB1干扰慢病毒载体,包装后获得慢病毒颗粒,病毒滴度检测可达6×108pfu/ml,感染细胞CIB1蛋白表达水平显著下调(P<0.01)。结论成功构建人CIB1基因RNA干扰慢病毒,为后续CIB1生物学功能研究奠定基础。

溶血对血细胞计数的影响

目的：为保证血细胞检测结果的稳定性和准确性，提高检验技术，确保检验结果的质量，对溶血对血细胞参数的影响进行研究。方法：随机选择我院门诊健康体检者90例，男48例，女42例。将受试者的血液样品分为三份，第一份（A组）的血液用品作为对照组，第二份（B组）使用注射器用力抽吸使其轻度溶血．第三份（C组）用同样方法使其出现重度溶血。采用SYSMEXKX-21N血细胞计数仅进行分析。结果：三组的WBC、RBC、PLT检测值差异均有统计学意义（P〈0．05）。溶血程度越重，RBC计数值越低，WBC、PLT计数越高。C组血液标本的WBC、PLT、RBC与其它两个组相比，差异均有统计学意义（P〈0．05）。B组的PLT计数与A组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：血液样品的采集、运输、检验过程都可能会造成溶血．应提高对标本检测质量控制重要程度的认识，提高血细胞计数的精密度和准确性。

电视机的挑选与使用

随着人民生活水平的不断提高,电视机日益普及,如何挑选和使用电视机大家很关心,下面简要谈谈这个问题。一、如何挑选电视机到商店挑选电视机,通常没有测试仪表,只能直观鉴别,下面介绍一下电视机性能和鉴别方法:1.外观检查。首先观察壳体各部分有没有划伤和明显破损,各种装饰部件是否完整无损、清洁、牢固。荧光屏表面是否干净平滑,有无气泡、划痕。荧光粉应是均匀的,颜色也要均匀一致,不应出现局部颜色发黄、发黑等现象。然后观察各种开关、旋钮、按键。

肾综合征出血热急性期汉滩病毒核蛋白特异的T细胞免疫应答与病情的相关性

汉滩病毒（Hantaan virus，HTNV）是在我国引起肾综合征出血热（hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS）的主要病原体。HFRS是一种以发热、出血和急性。肾功能损害为特征的急性传染病，死亡率在2％～10％左右。我国每年HFRS发病人数占世界报道病例数的90%以上。目前，我们对HTNV特异的T细胞免疫应答规律尚不十分清楚。为了解HTNV急性感染期T细胞免疫应答的动态变化，

高原驻训官兵不同时间点血常规及血清IL-6、IL-8水平的改变及意义

目的:评价高原低氧环境下高原驻训官兵血常规及血清IL-6、IL-8水平变化,为高原驻训卫勤保障提供依据。方法:选择从海拔1000m的内陆营地进入海拔4 200m高原的300名驻训官兵,分别于进驻高原前1d、进驻高原后1、2、3个月使用全自动细胞分析仪进行血常规分析,并对7项主要血细胞参数进行比较;应用酶联免疫法检测其中40名官兵相应时段血清IL-6、IL-8水平。结果:红细胞计数(RBC)及血红蛋白(Hb)浓度在进入高原第1个月时明显高于进入高原前(P<0.01),且驻训高原的时间越长,升高越显著;白细胞计数(WBC)在进入高原第1个月时显著升高(P<0.01),但在第2个月又有所下降,但仍显著高于进入高原前(P<0.01),并维持相对稳定;血小板计数(PLT)在进入高原后有轻微波动,但无显著性差异;血清IL-6、IL-8水平均随驻训时间延长而逐渐降低,且驻训高原的时间越长,降低越显著(P<0.01)。结论:高原低氧环境可影响血液中红细胞、白细胞和血小板,从而使得血常规中的各项参数发生变化。随驻训时间的增加,高原环境所致炎症反应会逐渐减弱,进入高原前的适应性训练及红景天胶囊的服用有助于降低高原低氧低压所致的损伤。

扁桃体术后出血25例临床护理

扁桃体术后出血是扁桃体手术的常见并发症,国内报道约3％,我院自1984、1至1993年12月共收治扁桃体切除术1192例,术后出血25例,占2％。我们观察到大多数(68％)术后出血发生于手术后3小时内,因此,术后严密观察至少3小时是减少术后并发症和死亡率的重要措施。 一、临床资料: 本组病例男14例,女11例。

异体移植工程细胞对大鼠烧伤创面愈合中皮肤附属器作用

目的以大鼠深Ⅱ度烧伤为模型,观察工程细胞即腺病毒介导肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)基因修饰的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对烧伤创面愈合中皮肤附属器再生的作用。方法体外分离、培养雄性Wistar大鼠骨髓MSCs,转染携带HGF基因的重组腺病毒(100 pfu/cell)后备用。16只雌性Wistar大鼠复制深Ⅱ度烧伤模型,随机分为观察组与对照组各8只。在造模同时,观察组将携带HGF基因的重组腺病毒修饰的骨髓MSCs悬液,对照组将同体积磷酸盐缓冲液注射于创面真皮下。分别于细胞移植后第3,5,7,14,21天计算创口愈合率,第7,14,21天光镜下观察组织愈合及皮肤附属器情况,常规PCR法检测细胞移植后第21天创面组织中性别决定基因Sry片段。结果携带HGF基因的重组腺病毒可有效转染MSCs,修饰的MSCs移植后第7,14天,观察组创口收缩率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。HE染色结果显示,第7天观察组表皮化优于对照组,第21天观察组再生表皮明显厚于对照组,并可见再生毛囊和皮脂腺。观察组雌性大鼠创面组织中扩增到Sry基因片段。结论 MSCs联合携带HGF基因的重组腺病毒异体移植可促进烧伤创面愈合修复过程中皮肤附属器的形成,且移植的细胞也参与了烧伤创面修复过程中附属器的形成。

16例Turner综合征的细胞遗传学分析

目的分析Turner综合征不同核型的遗传学特征、临床表现及其关系。方法外周血淋巴细胞G带分析。结果 16例Turner综合征患者中单体45,X0 6例(37.50%),46,X0/46,XX嵌合体1例(6.25%),46,Xi(Xq)1例(6.25%),47,XXX 4例(25.00%),46,XY/45,X0 3例(18.75%),46,XX,del(Xq24)1例(6.25%)。结论 X染色体数目异常及结构畸变是导致Turner综合征的主要原因,多种异常核型均不同程度导致女性生长缓慢、性腺发育不良、闭经及智力低下等其他器官功能异常。

LMO3逆转录病毒表达载体的构建及其对SK-N-AS细胞增殖的影响

目的构建包含LM03（LIM-only3，LM03）全长基因的逆转录病毒表达载体，感染人神经母细胞瘤SK-N-AS，检测LM03对SK-N-AS细胞增殖的影响。方法将质粒pEGFP-Cl-一LM03经EcoRI和BamHI双酶切后亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN，构建重组逆转录病毒表达载体pLXSN-LMO3，导人包装细胞pA317，获得逆转录病毒颗粒，感染SK-N-AS细胞，用RT-PCR及Western印迹鉴定，检测LM03感染后细胞的增殖及细胞周期分布情况。结果获得了能正确表达LM03基因的重组逆转录病毒表达载体pLX-SN-LMO3；LM03基因被逆转录病毒成功导入SK-N-AS细胞后，与对照组细胞相比，LM03感染组G1／G1期细胞减少，S期细胞增加，感染48h后，LM03感染组细胞的增殖能力显著高于空载体对照组及SK-N．AS组（P〈0．05）。结论成功构建了LM03基因的逆转录病毒表达载体，LMO3可以通过促进SK-N-AS细胞由G0／G1期进入S期，从而促进细胞的增殖。

婴儿颅内肿瘤误诊3例

1病例报告 例1 患儿男,4个月25天。因呕吐10天就诊。患儿10天前开始非喷射性呕吐,每天4～6次,无发热、咳嗽、腹泻及哭闹不止,以＂上呼吸道感染、急性胃肠炎＂治疗1周无好转。查体：精神可,前囟平软,颈软,咽红,心肺腹无异常,病理征阴性。实验室检查无异常,肝胆脾及脐部B超未见异常。