基于TLR4-NF-κB的柴胡黄芩水煎液抑制CCl4诱导大鼠肝星状细胞激活作用机制研究

目的探讨柴胡黄芩水煎液(CQ)对CCl_4诱导肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)激活的作用及机制。方法取对数生长的HSC,在无血清培养基中培养24 h后,以1.5×10~9·L^(-1)浓度接种到培养板中过夜。实验分组如下:空白对照组(无药物处理),CCl_4诱导组(6 mmol·L^(-1)CCl_4作用6 h),给药组(6 mmol·L^(-1)CCl_4作用6 h后,再用400、500、600 mg·L^(-1)的CQ作用24 h),TLR4阻断剂TAK-242、NF-κB阻断剂BAY 11-7082组(6 mmol·L^(-1)CCl_4作用6 h后,再用TAK-242 10 mol·L^(-1)、BAY 11-7082 2 mol·L^(-1)作用24h)。处理之后,应用ELISA法检测培养基中透明质酸酶(hyaluronidase,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型前胶原(procollagenⅢ,PCⅢ)、Ⅳ型胶原(collagen typeⅣ,Ⅳ-C)浓度,RT-PCR方法检测细胞中Toll样受体4(Toll-like receptors4,TLR4)、核转录因子κB(NF-κB)基因的表达,应用Western blot法检测细胞中TLR4、NF-κB蛋白的表达。结果研究发现,与CCl_4干预组比较,CQ量效相关性降低CCl_4诱导的HSC增殖。600 mg·L^(-1)的CQ可以明显降低HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C细胞释放水平及TLR4、NF-κB基因、蛋白的表达。NF-κB抑制剂TAK-242、BAY 11-7082也可降低CCl_4造成的HSC增殖,HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C细胞释放水平及NF-κB基因、蛋白表达,不能下调TLR4基因、蛋白表达。结论 CQ可以抑制CCl_4诱导的炎症因子基因、蛋白表达,减轻肝纤维化相关指标的含量,其作用机制可能与TLR4-NF-κB转录活性及蛋白活性相关,提示其在抗肝纤维中的作用及机制。

柴胡皂苷d-黄芩苷配伍对CCl4诱导大鼠HSC的TLR4-NF-κB通路作用研究

目的:探讨柴胡皂苷d-黄芩苷(SaikosaponinD-Baicalin,SB)对CCl4诱导肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)的作用机制。方法:HSC分空白对照(无药物处理),CCl4诱导(6mmol/L CCl_4作用6h),给药(6mmol/L CCl4作用6h后,2.5、5、10ug/ml的SB作用24h),TAK-242、BYA 11-7082组(6mmol/L CCl_4作用6h后,TAK-242 10mol/L、BYA 11-7082 2mol/L作用24h)。ELISA法检测透明质酸酶(Hyaluronidase,HA)、层粘连蛋白(Laminin,LN)、III型前胶原(ProcollagenⅢ,PCIII)、IV型胶原(Collagen Type IV,IV-C)浓度,RT-PCR、Western blot方法检测细胞中Toll样受体4(Toll-like receptors4,TLR4)、核转录因子(NF-κB)基因、蛋白的表达。结果:与CCl4干预组比较,SB、TAK-242、BYA 11-7082可降低CCl4造成的HSC细胞增殖,HA、LN、PCIII、HA细胞释放水平及NF-κB基因、蛋白的表达。SB、TAK-242可下调TLR4基因、蛋白表达。结论:SB可以抑制CCl4诱导的炎症因子基因、蛋白表达,改善肝纤维化相关指标,其作用机制可能与TLR4-NF-κB转录活性及蛋白活性相关。

柴胡、柴胡和黄芩配伍对肝细胞损伤体外作用

目的探讨柴胡、柴胡和黄芩配伍水提液对人肝L-02细胞增殖及对L-02细胞四氯化碳损伤的保护作用及其机制。方法本实验通过体外培养L-02细胞,将柴胡、柴胡和黄芩配伍水提液分别作用于人正常肝细胞及用CCL4损伤后的L02细胞。采用MTT法(体外细胞毒试验)测定柴胡、柴胡和黄芩配伍水提液对L02细胞增殖的影响;采用免疫组化法测定肝细胞中NFKBp65及TLR4蛋白的表达。结果 MTT法发现柴胡水提液对L02细胞有促进增殖作用,同时发现柴胡和黄芩配伍水提液对L02细胞有明显的增殖作用,而且配伍后作用更稳定。免疫组化发现CCL4损伤后L-02细胞中NKFBp65和TLR4蛋白表达增高,柴胡、柴胡和黄芩配伍水提液对肝细胞中的NKFBp65和TLR4蛋白具有抑制作用。结论柴胡水提液对L02细胞有促进增殖作用,柴胡和黄芩配伍水提液对L02细胞增值作用更稳定。且柴胡及柴胡和黄芩配伍可以对CCL4引起的肝损伤起保护作用,其机制可能与下调体内TLR4-NFKB信号通路有关。

生地黄配方颗粒工艺优化及其量值传递研究

目的优选生地黄配方颗粒制备工艺,并研究其量值传递情况。方法以干膏率、总多糖、苯乙醇苷类成分(焦地黄苯乙醇苷A1、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1和异毛蕊花糖苷)含量作综合值评价指标,以浸泡时间、加水量、提取时间、提取次数为考察因素,采用L9(34)正交试验法优选最佳提取工艺。考察成型工艺。通过特征成分的含量测定,考察饮片、中间体和配方颗粒间量值传递效果。结果最佳提取工艺为A3B2C2D3,即浸泡1.5 h,分别加10,8,6倍量水,3次分别煎煮2.0,1.5,1.0 h。制备的配方颗粒中苯乙醇苷类4个成分的含量分别为0.012%~0.018%,0.004%~0.006%,0.006%~0.009%,0.007%~0.010%,总转移率分别为25.69%~27.72%,7.32%~7.86%,31.60%~39.20%,94.11%~95.10%。结论生地黄饮片水煎提取工艺稳定,重复性好。生地黄饮片、中间体和配方颗粒中苯乙醇苷类4个特征成分含量呈量值传递关系,一致性较好。该研究为配方颗粒替代传统煎剂的研究提供了参考。

熟地黄标准汤质量标准及高效液相色谱指纹图谱研究

目的探讨熟地黄标准汤的质量标准,并建立其高效液相色谱(HPLC)指纹图谱。方法采用紫外-可见分光光度法测定总多糖含量;采用HPLC法测定地黄苷D含量,色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(5∶95,V/V),流速为1.0 m L/min,检测波长为203 nm,柱温为23℃,进样量为10μL。以地黄苷D为参照,测定15批熟地黄标准汤的HPLC图谱,采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)"进行相似度评价,确定共有峰。结果15批熟地黄标准汤的干膏率平均值为67.01%,总多糖含量平均值为3.58%,其HPLC图谱有2个共有峰,相似度均大于0.95。结论所建立的质量标准及HPLC指纹图谱可为熟地黄标准汤的质量评价提供参考。