金钱鱼基因组微卫星分布特征分析及多态性标记开发

【目的】研究金钱鱼(Scatophagus argus)全基因组微卫星分布特征,筛选高多态性微卫星(SSR)标记。【方法】利用MISA软件对金钱鱼基因组中微卫星进行筛选并分析分布特征,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳筛选高多态性位点。【结果与结论】金钱鱼基因组总共挖掘390967个SSR位点,相对丰度为653个/Mb。二碱基重复类型最多(52.64%),微卫星标记整体偏向A+T碱基组合。筛选出23对多态性标记位点,其中7对的等位基因数为4~11,期望杂合度为0.431~0.859,观测杂合度0.417~0.861,多态性含量为0.389~0.830。经Bonferroni校正后,5个位点符合哈德温伯格平衡,且位点间不存在连锁不平衡现象。

泰国斗鱼igf2基因cDNA的克隆及表达分析

胰岛素样生长因子2(insuline-like growth factors2,IGF2)在脊椎动物的生长和发育中具有十分重要的作用.本研究利用分子克隆技术,从泰国斗鱼(Bettas plendens)雄鱼的肝脏组织中克隆鉴定出泰国斗鱼IGF2cDNA开放阅读框序列全长989 bp,其中开放阅读框为629 bp,共编码209个氨基酸残基.通过多重序列比对分析,泰国斗鱼IGF2的氨基酸序列与其他鱼类的IGF2具有较高的同源性,显示出序列的保守性.此外,利用RT-PCR检测IGF2在泰国斗鱼雌雄个体不同组织中的表达,结果表明IGF2在泰国斗鱼各组织中的表达具有显著的组织表达差异性,同样也存在着性别表达差异性.本研究结果为深入研究泰国斗鱼的igf2基因在生长发育中的调控机理提供研究基础.

一株源于红树林根际土壤的枯草芽孢杆菌产淀粉酶条件及酶学性质研究

从三亚红树林保护区中筛选出一株产淀粉酶枯草芽孢杆菌,通过改变培养温度、初始p H值和盐浓度等因素研究该菌株的最适产酶条件,同时也分析了该菌株所产粗酶的热稳定性及p H稳定性。结果表明:该菌株属于中温产酶菌,产淀粉酶的最适温度为40℃,最适p H值为8,盐耐受能力可达到4%。酶学性质分析发现,该菌株产生的淀粉酶在40℃保温150 min后仍有70%以上的相对酶活力,在p H为9的环境中孵育1 h,相对酶活力可达到90%以上。这些结果表明,该产淀粉酶菌株对热带地区海水环境具有较好的适应性,其作为消化酶类饲料添加剂具有广阔的应用前景。

一株源于红树林根际土壤产纤维素酶芽孢杆菌的鉴定及其酶学性质分析

从红树林根际土壤中筛选出一株产纤维素酶的革兰氏阳性菌,通过形态、生化特征及16S r RNA基因序列分析鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。对其产纤维素酶能力进行分析,发现该菌株所产纤维素酶的最适反应温度为55°C,最适p H为6。酶学性质分析发现,在反应温度为55°C时,该菌株产生的纤维素酶稳定性最好,保温120min后仍具有80%以上的相对酶活力;在p H为5—7时,酶活性相对稳定,相对酶活力均维持在80%左右。Cu^(2+)对该酶有一定的抑制作用,Zn^(2+)、Fe^(3+)、Mg^(2+)、Ca^(2+)、Fe^(2+)、Mn^(2+)和Co^(2+)均对酶有一定的促进作用。本研究显示这株芽孢杆菌具有良好的应用前景,为该菌株在水产饲料添加剂中的进一步研究与应用提供参考依据。

多鳞[鱼喜]fih-1基因克隆及其低氧胁迫的mRNA表达

为研究多鳞[鱼喜](Sillago sihama)低氧诱导因子抑制因子-1(factor inhibiting hypoxia inducible factor 1,fih-1)在低氧胁迫后的表达机制,实验通过PCR扩增技术克隆出多鳞[鱼喜]fih-1基因cDNA全长1280 bp,开放阅读框(ORF)1065 bp,编码353个氨基酸,具有JmjC保守结构域。多序列比对与聚类分析显示,多鳞[鱼喜]与大黄鱼和尖吻鲈的亲缘关系最近,与哺乳动物、两栖类和禽类的亲缘关系较远。fih-1基因mRNA在多鳞[鱼喜]多个组织中有不同表达,在精巢、卵巢和肌肉中的表达水平最高,在鳃、心脏和肝脏组织表达水平较高,在脑组织的表达水平较低。实时荧光定量PCR分析fih-1基因在低氧胁迫处理前后鳃和心脏组织中mRNA的表达情况,结果显示fih-1基因在两个组织均随低氧胁迫处理时间延长表达量显著升高(P<0.05)。研究表明fih-1基因在多鳞[鱼喜]低氧信号传导通路中扮演重要角色,为开展并解释多鳞[鱼喜]低氧胁迫遗传机制提供候选基因。

12月龄多鳞鱚形态性状对体质量的影响

【目的】研究12月龄多鳞鱚(Sillago sihama Forsskål)形态性状与体质量之间的关系,筛选适用于选育的主要形态性状。【方法】测定12个形态性状与体质量的表型参数,通过通径分析、相关分析和多元回归分析估计主要性状对体质量的直接影响和间接影响。【结果】12月龄多鳞鱚13个性状之间的相关系数均达到极显著水平(P<0.01)。通径分析表明,体高(X1)、体厚(X2)、眼径(X7)、体长(X10)和背鳍前长(X11)对体质量(Y)有明显的直接影响;除体长外,其他生长性状对体质量的直接影响均小于它们对体质量的间接影响,同时,体长对体质量的直接影响最大。相关分析表明,上述5个主要性状是体质量变化的主要影响因素。体长对体质量的单独决定系数最大(0.331),5个主要性状对体质量的总决定系数为0.928。建立的以主要性状为自变量、体质量为因变量的回归方程为Y=-13.339+2.913X1+3.352X2-4.467X7+1.473X10+0.763X11。【结论】体长、体厚、眼径、体高和背鳍前长等5个主要性状是影响多鳞鱚体质量的核心性状,其中体长影响最大。

密斑刺鲀igf2基因的克隆及表达分析

胰岛素样生长因子2(insuline-like growth factors 2,IGF2)在控制脊椎动物的生长、发育、繁殖、代谢和渗透调节等方面发挥着关键作用。本研究利用分子克隆技术分离并鉴定了密斑刺鲀(Diodon hystrix)igf2基因cDNA序列738 bp,其中开放阅读框全长645 bp,可编码214个氨基酸残基。多重序列比对分析发现,密斑刺鲀IGF2氨基酸序列与其他鱼类的IGF2具有较高的同源性,显示出序列进化的保守性。组织分布结果表明,igf2基因在肝脏和脑组织中表达量较高,而在肾脏以及精巢中没有检测到表达信号,表明igf2基因具有显著的组织表达特异性。本研究结果为深入研究密斑刺鲀的igf2基因在生长发育中的调控机理提供研究基础。

泰国斗鱼foxl2基因的分子克隆及组织表达模式

Foxl2 (winged helix/forkhead transcription factor gene 2)是叉头框转录因子家族成员之一,在鱼类性别决定与分化中起重要的作用。为了探讨foxl2基因在泰国斗鱼(Bettas plendens)雌雄组织中的表达差异,本研究利用分子克隆技术分离并鉴定了泰国斗鱼foxl2基因cDNA序列1 246 bp,其中开放阅读框为921 bp,共编码306个氨基酸。多重序列比对分析,泰国斗鱼Foxl2氨基酸序列与其他鱼类的Foxl2具有较高的同源性,显示出序列进化的保守性。组织表达结果显示,雌性泰国斗鱼foxl2基因在性腺中表达量最高;在雄鱼中,foxl2基因在性腺中表达量最低,结果表明foxl2基因组织表达具有显著的特异性及性别差异。本研究结果为后续开展泰国斗鱼的性别调控机理提供了参考。

金钱鱼Sox3基因cDNA克隆及组织表达

金钱鱼是中国重要经济型鱼类,但其人工繁殖难以取得成功。本研究利用cDNA末端快速扩增法(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)克隆了金钱鱼(Scatophagus argus)Sox3基因cDNA全长序列,分析该基因序列在不同物种间的差异,并用RT-PCR半定量方法分析其在雌、雄组织中的表达差异。结果表明:金钱鱼Sox3 c DNA全长1270 bp,包括5’非翻译区(5’-UTR)217 bp、3’非翻译区(3’-UTR)150 bp和开放阅读框(open reading frame,ORF)903 bp,编码300个氨基酸,该氨基酸序列34104位为HMG保守盒。金钱鱼Sox3氨基酸序列与大黄鱼(Larimichthys crocea)的同源性最高,为99.3%,其次是金头鲷(Sparus aurata),为98.7%。Sox3前体蛋白的系统进化树显示,金钱鱼与大黄鱼亲缘关系最近。金钱鱼Sox3基因的组织表达有明显的组织特异性及性别差异,在性腺中表达量最高,雄性个体脑和垂体次之,肌肉、肾脏、心脏和肠有低量的表达,肝脏、脾脏、胃和鳃中未检测到表达;雌性个体在卵巢中观察到表达水平最高,脑、垂体和鳃次之,脾脏、肌肉、肾脏、心脏和肠中有低量的表达,肝脏和胃中未检测到表达。本研究为研究Sox3基因在金钱鱼人工繁殖与养殖产业方面提供理论参考。