超声法提取虻虫水溶性蛋白质的工艺研究

研究中药虻虫中蛋白质的最佳超声提取工艺。以虻虫粉为原料,紫外可见分光光度法测定吸光度,以提取液中蛋白质含量为考察指标,通过正交试验法探究超声提取过程中提取时间、料液比、pH及温度对提取效果的影响,并优选蛋白超声提取工艺。提取时间、温度、pH均对中药虻虫蛋白的提取具有极显著的作用。虻虫蛋白的最佳超声提取工艺为料液比1:40(g:m L),提取时间60 min,pH=10,温度40℃,在此工艺下,虻虫水溶性蛋白提取含量为208.1 mg·g^(-1)。采用超声波法优选得到的提取工艺稳定可行,且虻虫中水溶性蛋白质含量高,为虻虫蛋白的药效学研究提供理论基础。

鼠妇粉酶解最佳用酶的初步筛选

用胰蛋白酶、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶四种酶对鼠妇粉进行酶解并选出最佳用酶。利用四种酶分别酶解鼠妇粉,通过观察乳腺癌MCF-7细胞的抑制率以及蛋白质的水解度,作为实验评价指标,综合评价四种酶对于鼠妇粉的酶解效果,最终甄选出最佳酶解用酶。实验测得胃蛋白酶酶解液水解度为19.36%,胰凝乳蛋白酶酶解液水解度19.97%,胰蛋白酶酶解液水解度为34.70%,弹性蛋白酶水解度分别为34.90%。体外抗肿瘤试验表明,在浓度为0~2 mg·mL^(-1)范围内,胰蛋白酶酶解液对乳腺癌MCF-7细胞抑制效果最佳,胃蛋白酶酶解液抑制效果更低,未酶解的抑制率最低,几乎无效。当浓度低于0.7 mg·mL^(-1)时,弹性蛋白酶水解提取液抑制率高于胰凝乳蛋白酶水解提取液的抑制率,当浓度在0.7~2 mg·mL^(-1)时,两种酶的抑制作用恰好相反。鼠妇粉酶解工艺最佳用酶为胰蛋白酶,胃蛋白酶效果最差,弹性蛋白酶和胰凝乳蛋白酶效果介于二者之间。

双指标优化全蝎白术混合发酵品水提工艺及抗肿瘤试验研究

目的通过双指标优化全蝎白术混合发酵品水提工艺并探究其体外抗肿瘤活性。方法通过超声提取法,以总多糖及总蛋白得率为指标,分别考察超声时间、p H及料液比对提取率的影响。试验在单因素试验基础上,综合考虑双指标,通过正交试验法优化混合发酵品水提工艺。在最佳提取工艺条件下,采用MTT法进行体外抗肿瘤试验。结果最优工艺条件为:超声时间60 min、p H=11及料液比1∶60。在此条件下,全蝎白术混合发酵品中总多糖得率为41.316%,总蛋白得率为16.618%,综合评分达到最高。体外抗肿瘤结果显示发酵后效果更显著。结论通过双指标优化全蝎白术混合发酵品水提工艺条件,可以同时兼顾蛋白及多糖两种抗肿瘤有效成分,获得具有优良抗肿瘤活性的水提液,可为后续抗肿瘤试验的深入研究提供基础。

莱菔子水煎液中芥子碱硫氰酸盐与萝卜硫苷含量测定

目的:建立莱菔子水煎液中芥子碱硫氰酸盐与萝卜硫苷含量的测定方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱选用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱,流动相为0.08 mol·L-1磷酸二氢钠水溶液和乙腈(88∶12),流速为1.0 mL·min-1,检测波长设置为225 nm,进样量为20μL。结果:芥子碱硫氰酸盐和萝卜硫苷的线性范围分别为0.0005~0.05 mg·mL-1和0.0005~0.005 mg·mL-1,平均回收率分别为95.55%(RSD=0.66%)和96.74%(RSD=1.03%)。结论:高效液相色谱法可以用于莱菔子水煎液中芥子碱硫氰酸盐与萝卜硫苷含量的测定,该法操作简便,具有较高的灵敏度和精密度。

正交试验优选蜘蛛水溶性蛋白的超声提取工艺

目的:研究蜘蛛中蛋白的最佳超声提取工艺条件。方法:以蜘蛛粉为原料,探究超声处理方法提取蜘蛛水溶蛋白的提取条件,以水提液中蛋白的含量为考察指标,分别对超声处理过程中的提取时间、料液比、PH进行单因素实验,并通过正交试验法优化蛋白超声提取工艺。结果:液料比、提取时间、提取液p H均对蜘蛛的蛋白质提取具有极显著的作用。蜘蛛蛋白的最佳超声提取工艺为料液比1:40 (g:ml),提取时间50分钟,提取液p H10,最佳工艺下,蜘蛛水溶性总蛋白提取率11. 02%。结论:超声波提取蜘蛛水溶性总蛋白具有操作方便,经济高效的特点,在中药成分提取具有很好的应用前景。

基于主成分和体外抗氧化活性的酒萸肉的蒸制研究

目的考察酒萸肉炮制中黄酒和蒸制对主成分和抗氧化活性的影响。方法制备蒸制时间为0.5,1,2,3,5和7 h的清蒸和酒蒸山萸肉样品,采用高效液相色谱法,测定没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷I含量;应用主成分分析法,明确清蒸和酒蒸的差异;利用DPPH法测定抗氧化活性。结果随蒸制时间的增加,新生成分5-羟甲基糠醛含量明显增加,清蒸高于酒蒸;没食子酸含量明显增加,酒蒸高于清蒸;莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷I含量,在清蒸样品中明显下降,在酒蒸样品中先上升,5 h后开始下降;抗氧化活性,与生萸肉相比,清蒸样品明显下降,酒蒸样品明显上升。结论黄酒在酒萸肉的炮制中具有重要作用,可以促进没食子酸的生成,减缓蒸制导致的主成分含量的下降,增强抗氧化活性,调控5-羟甲基糠醛的生成。