促红细胞生成素原核表达载体构建分离纯化

目的构建和表达人源性促红细胞生成素(EPO),为促红细胞生成素发挥功能与结构差异研究做准备。方法通过NCBI查找人源性促红细胞生成素全基因序列并合成,构建原核表达载体pTWIN1-rhEPO,转化至大肠杆菌BL21(DE3),获得高效表达重组转化子菌株。结果成功构建人源性促红细胞生成素原核表达载体,经酶切和DNA序列测序分析,结果表明该基因序列与合成序列完全相同。终浓度0.5mmol/L ITPG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,4小时时蛋白表达量最高。结论构建和表达重组载体pTWIN1-rhEPO,分离纯化出目的蛋白,为进一步研究促红细胞生成素组织修复功能及突变体相关功能研究奠定基础。