脂质体介导哺乳动物细胞转染的改良方法

目的提高脂质体介导的细胞转染效率。方法在传统的脂质体生化转染过程中,介入了简单的物理转染技术,并应用有限稀释克隆技术和共聚焦荧光显微镜检测技术,对转染细胞进行了早期克隆筛选,用流式细胞术对转染细胞表达GFP的阳性率进行检测。结果流式细胞术检测显示,通过改良法获得转染pcDNA3-GFP-PSA质粒的B16、RM1和EL4细胞,表达报告蛋白GFP的阳性百分率(26%、24%和40%)高于传统法转染的细胞(16%、16%和18%)。改良法转染的B16、RM1和EL4经过克隆筛选、液氮冻存、水浴复苏和体外连续培养2周后,外源基因报告蛋白GFP表达的阳性百分率分别为77%、69%和83%。在转染流程上,通过改良法获得单克隆转染细胞株的时间明显缩短。结论改良的脂质体转染方法结合细胞克隆技术,能在最短时间内获得高表达外源基因的转染细胞株。

抗BCG Hsp65单克隆抗体的鉴定及应用研究

目的:对制备的5株抗BCG Hsp65单克隆抗体(Hsp65 mAb)做进一步鉴定和应用。方法:采用ELISA方法对mAb的效价、亚类和结合抗原表位特性进行鉴定,应用mAb对Hsp65融合蛋白进行了Western blot和免疫荧光检测。结果:5株mAb的类型均为IgG,其中ⅠC1和ⅡC3株mAb为IgG1亚类,ⅠA5、ⅠC3和ⅠD6株mAb为IgG2a亚类。抗原表位竞争结合分析显示,在配对的不同亚类mAb中,存在着结合Hsp65表面不同抗原表位的mAb。通过Western blot检测证实,Hsp65 mAb对Hsp65-MUC1检测结果,与MUC1 mAb的一致。细胞免疫荧光检测显示,制备的mAb能够识别通过蛋白装载进入树突状细胞内的Hsp65-PSA。结论:获得的Hsp65 mAb可做为检测工具,用于研究BCG Hsp65及其融合蛋白的功能和表达。

LTE关键技术及其发展趋势解析

随着人们对宽带网络速率要求的提升,3G无线通信技术的发展已经不能适应网络用户的需求,由此,全新的LTE技术应运而生。文章通过对目前LTE关键技术和优势的分析,展望了LTE技术今后的发展方向。

农村幼儿教师学习信息技术的现状调查

在城乡一体化发展进程不断推进下,农村幼儿教育事业蓬勃发展,新时期加强农村幼儿教师信息素养的培养十分关键。本文就农村幼儿教师信息技术学习现状展开调查分析,就其中的不足提出改进对策,推动幼儿教育朝着更高层次发展。