基于肝脏能量代谢途径变化探讨健脾化浊消脂方对代谢相关脂肪性肝病大鼠的干预机制

目的通过肝脏能量代谢途径研究健脾化浊消脂方(JPHZXZF)防治代谢相关脂肪性肝病大鼠的作用机制。方法将36只雄性SD大鼠随机分为空白组,模型组,阳性药物组,健脾化浊消脂方高、中、低剂量组。空白组饲喂维持饲料,其余五组饲喂高脂饲料同时饮用10%果葡糖浆溶液,连续喂养12周后,各给药组小鼠给予相应药物连续干预4周。末次给药后,采用生化分析仪测定大鼠血清中三酰甘油(TG)、总胆固醇(T-CHO)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹葡萄糖(FBG)含量;试剂盒法检测大鼠肝脏中TG、T-CHO、游离脂肪酸(NEFA)、柠檬酸合成酶(CS)、肉毒碱棕榈酸转移酶-1(CPT-1)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、乳酸脱氢酶(LDH)含量或活性;用油红O、HE染色观察大鼠肝脏病理变化;采用蛋白免疫印迹法检测大鼠肝脏组织中p-AMPKα、HIF-1α蛋白表达水平。结果JPHZXZF可以显著降低TG、T-CHO、LDL-C、FBG、NEFA、CS、CPT-1、HIF-1α、LDH含量或活性(P<0.05),缓解肝细胞脂质沉积,升高p-AMPKα的蛋白表达水平(P<0.05),降低HIF-1α的蛋白表达水平(P<0.05)。结论JPHZXZF可以有效改善代谢相关脂肪性肝病糖脂代谢紊乱,其作用可能与改变能量代谢途径有关。

基于网络药理学联合分子对接探析健脾化浊消脂方防治代谢相关脂肪性肝病的作用机制

目的运用网络药理学及分子对接技术探究健脾化浊消脂方防治代谢相关脂肪性肝病作用机制。方法通过对TCMSP、TCMID、BATMAN-TCM、TCM-MESH数据库的检索获取活性成分并预测靶点。检索GeneCards、OMIM、TTD及Disgenet数据库获取代谢相关脂肪性肝病靶点。将药物与疾病靶点取交集,运用可视化软件Cytoscape3.7.1构建核心成分-交集靶点网络,筛选活性成分和关键基因进行分子对接。通过Cytoscape将两者交集靶点导入David数据库进行基因本体(GO)富集分析和基因组百科全书(KEGG)通路分析。结果经过筛选去重后获得健脾化浊消脂方成分靶点1761个,代谢相关脂肪性肝病靶点1058个,交集靶点122个。筛选出排名靠前的五种活性成分分别是:豆甾醇、β-谷甾醇、乙酸亚油醇酯、茯苓甾醇、穿贝海绵甾醇,关键基因分别是MAPK3、HSP90AA1、STAT3、EGFR、AKT1。分子对接结果显示五种活性成分与度值最高的MAPK3结合能力相对较好。GO富集分析显示这些靶点参与类固醇激素介导的信号通路、凋亡过程的负调控以及血管生成等生物学过程。KEGG通路分析显示这些靶点参与了HIF-1通路、胰岛素抵抗、2型糖尿病、mTOR通路及VEGF通路。结论健脾化浊消脂方防治代谢相关脂肪性肝病具有多靶点、多通路的潜在作用机制,可能是通过对MAPK3/HIF1α调控产生作用。