广东规模化鸡场死鸡胚中鸡毒支原体的分离鉴定、致病性及药物敏感性

旨在从广东某规模化鸡场死鸡胚进行鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)的分离,并进行遗传进化分析、致病性及药物敏感性研究。本研究从广东某规模化鸡场的带菌死胚卵黄组织中分离禽支原体,通过菌落观察、血清学试验、16S rRNA支原体通用引物序列鉴定等方法,对分离的菌株进行种属鉴定,同时将分离的毒株对鸡胚和SPF鸡进行攻毒试验及抗菌药物敏感性试验。结果显示:显微镜下菌落呈典型的“荷包蛋”状。平板凝集试验显示其与MG阳性血清有凝集反应,与MS阳性血清不反应;16S rRNA序列测序发现各分离株与MG相似性达99.9%,因此确定分离株为MG。将各分离株感染7日龄SPF鸡胚,结果显示感染鸡胚大多于临近出壳时死亡;感染3周龄的SPF鸡,3周后解剖发现鸡气囊发生显著病理变化,说明其具有较强致病力;药物敏感性试验结果显示,5株分离株对盐酸沃尼妙林、多西环素、泰万菌素及泰妙菌素有较高敏感性,对替米考星、泰乐菌素、恩诺沙星、红霉素、吉他霉素、林可霉素呈现出不同程度耐药性。综上,从广东某规模化鸡场死鸡胚中成功分离到5株MG分离株,各分离株均可引起红细胞凝集,导致鸡胚死亡,对SPF鸡可引起典型的气囊炎症状,且对多种药物存在不同程度耐药性。本研究为临床MG的分离鉴定及用药选择提供了可参考的技术方法及指导,为MG攻毒模型建立提供了研究基础。

“立德树人”视域下李大钊青年教育思想的现实启示

立德树人是我国教育事业的根本任务,也是新时代青年教育工作的理论导向和实践指南。李大钊是近代中国青年教育的引路人,结合时代背景对青年的心理状况和现实需求进行深入分析,在长期的实践探索中形成了以树报国之志、学先进理论、行奋进之路为核心的青年教育思想,对于厚植青年爱国情怀、培养青年责任意识、练就青年过硬本领,具有重要的理论意义和现实意义。

产NDM-1型碳青霉烯酶奇异变形杆菌的分离鉴定及耐药性分析

由金属β-内酰胺酶介导的耐碳青霉烯类抗生素的细菌在全球范围内蔓延,blaNDM-1是其中典型且关键的一种。奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)广泛分布于自然环境以及哺乳动物肠道内,可携带多种耐药基因,有潜在的人畜共患风险。为了调查奇异变形杆菌在养禽场内的耐药情况,本研究从浙江、江苏等地采集病料,通过选择性培养基分离、生化实验、PCR方法鉴定奇异变形杆菌,分析分离株的耐药性,根据耐药性结果检测产碳青霉烯酶耐药基因的携带情况,最后对产NDM-1型碳青霉烯酶分离株进行全基因组测序分析。经过选择性培养基分离、生化实验及PCR检测共鉴定到10株奇异变形杆菌,药物敏感性结果显示,分离株PM01对氟苯尼考、复方新诺明、硝基呋喃、头孢菌素类抗生素耐药,且对碳青霉烯类抗生素耐药;PCR检测显示,PM01株携带blaNDM-1耐药基因。全基因组测序发现blaNDM-1基因位于染色体中,通过线性比对分析显示其与人源大肠杆菌以及肺炎克雷伯菌共享相似的遗传背景。研究结果表明,携带blaNDM-1的奇异变形杆菌可能会导致肠杆菌科细菌间碳青霉烯类耐药性的传播,具有潜在的公共卫生学意义。

检测大肠杆菌内c-di-GMP水平的双荧光素报告质粒的构建及应用

细菌通过调控第二信使环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)而促进其适应环境、存活及致病。【目的】本研究旨在建立有效的c-di-GMP水平检测方法,为大肠杆菌内c-di-GMP水平检测提供便利条件。【方法】根据c-di-GMP核糖开关受体的调控方式、荧光报告基因等设计引物,通过重叠聚合酶链反应(overlap polymerase chain reaction,overlap PCR)和同源重组酶构成基于核糖开关的双荧光素报告质粒pAmCherry-Vc2EGFP(pACVcE),然后构建c-di-GMP代谢基因过表达菌株和缺失菌株,利用pACVcE检测大肠杆菌内c-di-GMP水平。【结果】Overlap PCR扩增产物与目的靶序列一致,测序结果证明pACVcE序列正确。表达c-di-GMP合成酶DgcZ的大肠杆菌胞内c-di-GMP水平显著升高,而表达c-di-GMP降解酶PdeK的大肠杆菌胞内c-di-GMP水平显著降低。禽致病性大肠杆菌的胞内c-di-GMP水平检测发现c-di-GMP降解酶基因pdeK缺失后胞内的c-di-GMP水平显著升高。【结论】本研究构建了基于核糖开关的双荧光素报告质粒,可方便、快速检测大肠杆菌胞内c-di-GMP水平。

禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoS_AH50的分离鉴定、生物学特性及全基因组分析

为给噬菌体防控禽大肠杆菌病提供参考和依据,以禽致病性大肠杆菌为宿主菌,利用双层琼脂平板法从鸡场粪便样品中分离纯化禽致病性大肠杆菌噬菌体,对其形态、裂解谱、最佳感染复数(MOI)、一步生长曲线、p H和温度稳定性、体外抑菌能力及抑制生物被膜形成能力进行测定,并通过全基因组测序分析其基因组特征。结果显示,分离到1株裂解性禽致病性大肠杆菌噬菌体v B_EcoS_AH50,透射电镜观察显示其属于有尾噬菌体目长尾噬菌体科。v B_EcoS_AH50可特异性裂解O1和O2血清型大肠杆菌;MOI为1;潜伏期和爆发期均为20 min,爆发量约为76 PFU/cell;在4~50℃和pH值在3~11的范围内可保持较强的裂解能力,且在室温下能稳定存活4周。在MOI分别为0.01、0.1和1的条件下,该噬菌体能够有效抑制大肠杆菌生长及形成生物被膜。全基因组测序发现,v B_EcoS_AH50基因组全长为37 268 bp,不含有与毒力因子、毒素、耐药和溶源性相关基因。BLASTn比对显示,该噬菌体全基因组序列与噬菌体PC2最为相近,具有94.56%的一致性和94%的覆盖率。基于噬菌体末端酶大亚基构建的系统发育树显示,v B_EcoS_AH50与噬菌体v B_EcoS_011D5的亲缘关系最近。结果表明,噬菌体v B_EcoS_AH50可特异性裂解大肠杆菌,裂解能力强、耐受性高、安全性好,提示其在防治禽大肠杆菌病方面均有潜在应用价值。