杏鲍菇苦荞速溶粉的研制

以杏鲍菇粉和苦荞粉为原料,经浸提、过滤、浓缩后,添加一定量的麦芽糊精、β-环状糊精、单硬脂酸甘油酯、蔗糖脂肪酸酯、羧甲基纤维素钠等辅料,进行喷雾干燥制备速溶粉。采用单因素试验和响应面优化设计筛选最佳配方。结果表明,杏鲍菇苦荞速溶粉最佳配方如下:杏鲍菇粉与苦荞粉配比为2∶1,按浸提液可溶性固形物含量计;辅料添加量分别为麦芽糊精21%,β-环状糊精2.1%,单硬脂酸甘油酯0.3%,蔗糖脂肪酸酯0.4%,羧甲基纤维素钠0.3%。在此条件下制得的产品感官品质优良、溶解性好。

广叶绣球菌中性多糖对巨噬细胞RAW 264.7细胞因子及TLR2受体的影响

真菌多糖主要通过TLRs受体介导吞噬细胞分泌细胞因子而进行免疫调节作用,为探究广叶绣球菌中性多糖(SNP)对巨噬细胞RAW 264.7细胞因子的分泌及TLR2受体是否介导此作用,首先采用传统水提法,经HZ-830大孔树脂、DEAE-52和Sepharose CL-6B柱分离纯化后得到SNP,利用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定SNP分子质量,利用离子色谱法(IC)和傅里叶红外色谱法(FT-IR)分析单糖组成和结构表征;然后通过MTT比色法分析SNP对巨噬细胞RAW 264.7增殖活力的影响,以SNP最佳浓度作用,通过酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞RAW 264.7分泌的细胞因子含量;最后通过SNP处理TLR2抗体作用的吞噬细胞,分析TLR2受体是否对SNP调节巨噬细胞RAW 264.7细胞因子的分泌具有介导作用。结果表明,SNP分子质量为3.2×10;u,由摩尔比为6∶12∶63∶10∶5的阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖组成,不含呋喃糖;一定浓度范围内的SNP能显著促进RAW 264.7的增殖,其最佳作用质量浓度为250μg/mL;此浓度下,RAW 264.7的NO、IL-6、TNF-α、IFN-β细胞因子的分泌量最高,与空白对照差异极显著,但均低于脂多糖(LPS)的作用;而加入TLR2抗体后,SNP组巨噬细胞RAW 264.7的上述各细胞因子的分泌量相较未加TLR2抗体组均降低,但除IL-6细胞因子外差异均不显著。由此可见,SNP可促进巨噬细胞RAW 264.7的增殖及细胞因子的分泌,但不是通过TLR2受体介导。

绣球菌多糖表征及其抗氧化和免疫活性

提取纯化绣球菌多糖(Sparassis latifolia polysaccharides,SCPs),研究其表征和功能活性,探索绣球菌多糖表征与其抗氧化及免疫活性之间的关系。以绣球菌子实体为原料,采用聚能超声波辅助水提醇沉法提取绣球菌多糖,经DEAE-52、SephadexG-100纯化,用高效凝胶渗透色谱法、离子色谱法、傅里叶红外色谱法、扫描电镜、原子力显微镜对绣球菌多糖进行初步表征,检测绣球菌多糖清除DPPH、·OH、O2^-·自由基能力以及总还原力,用MTT法检测绣球菌多糖对巨噬细胞RAW264.7增殖的影响。结果表明,SCPs分子量范围为215Da–393kDa,由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖、果糖构成,摩尔比13:4:1:2:3,其表观形貌为簇状堆积,交织,结构规律性不强,表面光滑,呈一定的网络状结构,分子呈现链状构象,具有高度的分支结构,链间形成小环且伴随一定的球形颗粒。SCPs具有一定的还原能力和清除DPPH、·OH、O2^-·自由基的能力,且能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖。绣球菌多糖的抗氧化及免疫活性可能与其分子量、单糖组成、糖链分支及分子构象有关。

广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用受体TLR4和TLR2的影响

确定广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用受体,探索广叶绣球菌β-D-葡聚糖的免疫调节机制。采用MTT法测定不同浓度广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7增殖活力的影响,筛选出促进巨噬细胞增殖能力最强的浓度。用筛选出的β-D-葡聚糖浓度作用巨噬细胞RAW264.7;TLR4抗体和TLR2抗体分别作用巨噬细胞RAW264.71h,再用含有β-D-葡聚糖的细胞培养液培养。收集细胞培养上清和细胞,检测细胞培养上清中NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量;提取细胞内总RNA,采用RT-PCR测定巨噬细胞TLR4 mRNA表达量;提取巨噬细胞总蛋白,采用蛋白免疫印迹western blot测定TLR4的蛋白表达。广叶绣球菌β-D-葡聚糖能够促进巨噬细胞RAW264.7增殖,增加NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量,提高TLR4 mRNA表达和蛋白表达,差异极显著(P<0.01)。TLR4抗体作用细胞后,NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量明显下降,差异极显著(P<0.01)。TLR2抗体作用细胞后,NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量下降,但差异不显著。广叶绣球菌β-D-葡聚糖可以通过细胞表面受体TLR4激活信号转导通路,增强下游细胞因子的释放,从而调节巨噬细胞RAW264.7的免疫功能。TLR2可能不是广叶绣球菌β-D-葡聚糖的免疫受体。