穿膜肽R8和pH敏感型可断裂PEG共修饰脂质体的构建

本文旨在构建穿膜肽R8(RRRRRRRR)和p H敏感型PEG(聚乙二醇,polyethylene glycols)共修饰的脂质体(R8 peptide and p H sensitive PEG co-modified liposomes,Cl-Lip)用于乳腺癌的靶向药物传递。通过卵磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2K-R8和PEG5K-Hz-PE(p H敏感型PEG)为材料制备共修饰脂质体,对其粒径和zeta电位进行表征。采用4T1细胞考察不同预孵育条件下细胞对Cl-Lip的摄取。同时对其入胞途径、溶酶体逃逸能力及肿瘤球穿透能力进行考察。结果表明,Cl-Lip粒径为(110.4±5.2)nm,PDI为0.207±0.039,zeta电位为(-3.46±0.05)m V。体外实验证明,Cl-Lip具有良好的血清稳定性。在不同的预孵育时间点,4T1细胞对Cl-Lip的摄取均呈p H依赖性,在p H 6.0条件下的摄取均高于p H 7.4条件下的摄取。Cl-Lip的入胞机制主要为网格蛋白介导的内吞途径和能量依赖型的内吞途径。在p H 6.0条件下,Cl-Lip具有较强的溶酶体逃逸能力和肿瘤球穿透能力。这些结果表明,共修饰脂质体具有较好的p H响应性,是一种潜在的靶向药物传递系统。

穿膜肽TAT修饰的自噬诱导肽Beclin 1抗肿瘤的初步研究

目的研究自噬诱导肽Beclin 1及其经穿膜肽TAT修饰后所得TAT-Beclin 1对乳腺癌的体外自噬诱导作用及体内外疗效。方法采用透射电子显微镜、eGFP-LC3细胞转染技术和蛋白免疫印迹法综合对比评价Beclin 1和TAT-Beclin 1对4T1细胞自噬流的影响,通过体外细胞毒性和体内抑瘤实验评价其抗肿瘤疗效。结果 TAT-Beclin 1能显著提高Beclin 1在4T1细胞上的自噬诱导能力;TAT-Beclin 1在体内具有一定的抗4T1肿瘤能力。结论 TAT-Beclin 1较Beclin 1能更有效地诱导自噬并发挥治疗乳腺癌的效果。

溶酶体酸性微环境敏感型粒径可变纳米粒的构建及评价

目的构建一种以功能性支化聚乙烯亚胺(b PEI)为基本骨架材料的粒径可变纳米粒,用于递送药物至黑色素瘤的深部区域。方法通过酰胺键修饰特定量的琥珀酸酐至b PEI骨架上,得到具有电荷翻转功能的材料NSP,再引入聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAM)制备粒径可变纳米粒(PSP),分别考察其粒径、Zeta电位和释药行为;考察B16F10细胞对PSP的摄取及胞内内涵-溶酶体对PSP的影响;通过构建体外三维肿瘤球模型来考察纳米粒的穿透能力。结果载阿霉素粒径可变纳米粒(D/PSP)在p H7.4缓冲液中的粒径、PDI和Zeta电位分别为31.2±4.8 nm、0.106±0.015、-2.26±0.06 m V。在内涵-溶酶体所对应的p H5.0条件下,D/PSP的粒径可膨胀至891.6±26.3 nm,PDI为0.256±0.123,Zeta电位为15.61±0.19 m V。B16F10细胞对D/PSP的摄取在一定范围内呈孵育浓度依赖性及时间依赖性,其主要的入胞机制为网格蛋白介导和能量依赖型的内吞途径。结论成功制备了具有较好的溶酶体酸性微环境响应性的PSP,D/PSP具有较强的肿瘤球穿透能力。