新生儿滤纸血斑TSH检测TR-IFMA、IRMA、ELISA的对比研究

对碘缺乏病病区和非病区新生儿脐带滤纸血斑同时利用三种方法检测ＴＳＨ值，结果表明ＩＲＭＡ值＞ＴＲ－ＩＦＭＡ值＞ＥＬＩＳＡ值，三者相关非常显著，相关系数分别是ＴＲ－ＩＦＭＡ与ＥＬＩＳＡ为０．８３８、ＥＬＩＳＡ与ＩＲＭＡ为０．８３５、ＩＲＭＡ与ＴＲ－ＩＦＭＡ为０．７７７。５ｍＵ／Ｌ以下所占百分率ＥＬＩＳＡ为７６．９％、ＴＲ－ＩＦＭＡ为６４．７％、ＩＲＭＡ为４４．８％。经多年补碘的病区与非病区ＴＳＨ值分布频率基本相似。认为三种方法均可用于碘缺乏病监测，但ＩＲＭＡ值偏高，可根据回归方程ＴＲ－ＩＦＭＡ、ＥＩＡ值进行换算。

大鼠胃粘膜胃泌素受体的放射配基结合法

目的 建立高效、敏感的大鼠胃粘膜胃泌素受体结合模型。方法 用大鼠胃粘膜粗膜标本为组织受体，［１２５Ｉ］１５ＬｅｕＧ１７为标记配基进行受体结合反应，检测胃泌素受体结合参数。结果 胃泌素受体结合符合简单单位点受体结合模型，Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析求出的胃泌素受体结合参数Ｂｍａｘ＝７－４０４×１０－１２ｍｏｌ·Ｌ－１（３－７０２ｐｍｏｌ·ｇ－１Ｐｒｏ），Ｋｄ＝１－６８６×１０－１０ｍｏｌ·Ｌ－１。单点法求出的特异结合量Ｒｓ＝２－７３４ｐｍｏｌ·ｇ－１Ｐｒｏ。粗膜标本蛋白浓度在４～１２ｇ·Ｌ－１范围内，与标记胃泌素特异性结合容量成正比。同一样本大鼠胃粘膜粗膜标本［１２５Ｉ］ＧＡＳ特异结合量测定方法变异系数为７－８０％，竞争抑制实验证明［１２５Ｉ］ＧＡＳ与大鼠胃粘膜粗膜标本结合特异性良好。结论 大鼠胃粘膜胃泌素受体的放射配基结合法符合受体结合实验方法学要求。

免放、酶联、荧光三种方法对同批新生儿脐血滤纸TSH测定对比分析

笔者用免疫放射(IRMA)、酶联免疫(ELISA)、荧光免疫(IFMA)三种方法测定了116例新生儿脐带血片TSH值,结果显示IRMA法明显高于ELISA和IFMA法,后两种方法结果基本一致。三种方法之间都呈现较好的相关关系。它们用于新生儿先天性甲低筛查或评估考核碘缺乏流行程度,需要选用不同的临界值做为诊断标准。

促甲状腺激素单克隆抗体的制备

获得了抗促甲状腺激素（ＴＳＨ）单克隆抗体杂交瘤细胞２０株，其中Ｔ＿（７４）Ａ＿（１０）小鼠腹水滴度为１：５００００，亲和常数为７．１５×１０￣９Ｌ／ｍｏｌ，Ｔ＿（７１）Ｂ＿（１１）小鼠腹水滴度为１：１５００００，亲和常数为８．７５×１０￣９Ｌ／ｍｏｌ．两个抗体与人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）、促卵泡激素（ＦＳＨ）和促黄体生成激素（ＬＨ）的交叉反应分别小于１．１×１０￣（－６）％、０．０１％和０．０１６％。将Ｔ＿（７４）Ａ＿（１０）和Ｔ＿（７１）Ｂ＿（１１）应用于ＴＳＨ免疫放射分析中，得到了满意的结果。

AFP 单克隆抗体的研制及其在免疫分析中的初步应用

获得了四株分泌ＡＦＰ（甲胎蛋白）单克隆抗体的杂交瘤细胞株并已稳定传代。其中Ａ４Ａ１１、Ａ１４Ｃ１１在ＡＦＰＩＲＭＡ中得到了很好的配对，经ＲＩＡ鉴定其滴度分别为１∶８００００和１∶１５００００，亲和常数分别为１．７×１０９Ｌ／ｍｏｌ和１．４×１０１０Ｌ／ｍｏｌ。Ａ１４Ｃ１１作为包被抗体应用于ＡＦＰＥＬＩＳＡ中也得到较好的结果。

固相抗体包被管法TSH免疫放射分析

采用 TSH单克隆抗体包被聚苯乙烯试管 ,并对抗体包被条件进行了研究 ,建立了 TSH免疫放射分析法。结果表明 :在 2～ 8℃下过夜包被 ,抗体浓度为 2 .1mg/L时 ,制备的包被管用于 TSH免疫放射分析 ,结合达到最大 ;不同浓度下包被 ,包被温度和时间对制备的包被管的影响不同。TSH免疫放射分析最小检测限为 0 .0 5 m IU/L;回收率为 88.4 %～ 10 0 .0 % ;批内、批间变异系数分别为7.4 %～ 10 .9%和 8.7%～ 10 .7%。 4 6例健康人血样测定值为 0 .3～ 6 .2 m IU/L。

CA19-9双位点夹心免疫放射分析法的建立

采用两株CA19—9单克隆抗体，一株用于^125I标记、另一株包被于试管作为固相抗体，用血清稀释CA19—9抗原，制备标准品，建立了CA19—9双位点夹心免疫放射分析方法（IRMA）。分析采用两步法，本方法最小检测限为2．0U／mL，批内、批间变异系数分别为6．4％～9．5％和6．0％～12．6％；样品添加实验结果显示，回收率为88．1％～106．1％；血清样品倍比稀释后的测定值和稀释度的相关系数为0．990。CA19—9浓度至11800U／mL时测定未见“弯钩”效应。69例健康人血清样品测定值为0．3～29．6U／mL（x^-±s为7．4±5．8U／mL），和法国CIS公司的CA19—9免疫放射分析药盒同时测定84例人血清样品，二者测定值相关方程为了y=1．32x-17．6，相关系数r=0．896。

肿瘤标志物CA125免疫放射分析试剂盒的研制

采用两株CA125单克隆抗体,一株用于125I标记,另一株包被于试管作为固相抗体,稀释卵巢癌患者腹水制备标准品,建立了双位点夹心法人血清肿瘤标志物CA125免疫放射分析法。标准曲线的最大标准点免疫结合与零标准非特异结合之比大于100;最小检测限为1.0U/mL;批内、批间变异系数分别为4.4%～5.8%和8.4%～9.9%;样品中加入已知量CA125测定,回收率为96.8%～112.5%;对含高浓度CA125的血清样品稀释测定,结果表明方法的健全性良好。38例健康女性血清样品测定值范围为2.9～24.1U/mL;x±2s为9.6±9.6U/mL。

人血清CA15-3免疫放射分析法的建立

一株CA15-3单克隆抗体用于125I标记,另一株CA15-3单克隆抗体包被试管作为固相抗体,建立了双位点夹心肿瘤标志物CA15-3免疫放射分析法。CA15-3标准品以CIS公司免疫放射分析药盒标准品校正。最小检测限为0.4U/mL;批内、批间变异系数分别为6.0%～6.2%和4.1%～5.9%;样品中加入已知量CA15-3测定,回收率为86.8%～118.6%;高浓度CA15-3的血清样品系列倍比稀释后测定,实测值和计算值呈线性相关,相关系数大于0.99;38例健康女性血清样品测定值为5.7～23.7U/mL。

金属硫蛋白研究进展及其RIA的应用

金属硫蛋白（ＭＴ）是一种普遍存在的、富含金属和半胱氨酸的低分子量蛋白质，主要包括Ａｇ，Ａｎ，Ｂｉ，Ｃｄ，Ｃｕ，Ｈｇ．Ｚｎ等硫蛋白，ＭＴ在体内可被金属和其他因素诱导合成，具有重要的生物学功能，ＭＴ的ＲＩＡ以其高灵敏度和高特异性，在与金属有关的某些疾病的诊断、治疗及保护环境方面起着重要作用。随着对ＭＴ研究的日益深入，ＭＴＲＩＡ的应用有着广泛的前景。

乙型肝炎核心抗体放射免疫定量试剂盒的研制

以聚苯乙烯小球为固相载体,在小球表面包被一层基因工程制备的乙型肝炎核心抗原(HBcAg),以125I标记的乙型肝炎核心抗体(125I-Anti-HBc)作为标记物,采用固相放射免疫竞争法研制成乙型肝炎核心抗体放射免疫定量试剂盒(Anti-HBc-RIA)。本试剂盒的灵敏度为0.8NCU/mL,批内变异系数<9.9%,批间变异系数<13.8%,回收率为92.6%～109.2%。正常参考值为0～2.0NCU/mL。

甲胎蛋白干血滤纸免疫放射分析试剂盒的研制

用氯胺Ｔ法制备１２５Ｉ－ＡＦＰＭｃＡｂ，用ＡＦＰＭｃＡｂ包被试管，以全血作标准，建立了ＡＦＰ干血滤纸片免疫放射分析方法。该方法灵敏度为７．２μｇ／Ｌ，批内变异系数为５．１％—１０．０％，批间变异系数为４．７％—８．６％，正常参考值≤１０μｇ／Ｌ，与血清ＡＦＰ免放分析方法比较，相关系数ｒ＝０．

前列腺酸性磷酸酶(PAP)免疫放射分析试剂盒的研制

采用包被管分离技术,利用两株抗PAP单克隆抗体,双位点夹心免疫放射分析方法测量人血清中PAP含量。结果表明,该试剂盒分析灵敏度为0.1μg/L;批内变异系数为(8.8～9.6)％;批间变异系数为(7.7～12.3)％;回收率为(96.3～105.0)％;标准曲线范围为2.5～200.0μg/L。与DPC公司CAC PAP IR-MA试剂盒进行方法学比较,相关系数r=0.909。

白蛋白(Alb)放免分析药盒的研制

本文介绍了白蛋白(Alb)放免药盒的研制及其初步的临床应用结果。本药盒主要用于测定人尿中Alb含量,采用二抗加PEG法,测定范圈为1—50μg/ml。经方法学鉴定,尿液稀释曲线为一直线;回收率为95.7%—103.6%,最小可测量至0.1μg/ml;批内和批间的变异系数分别为5.8%和6.4%。本药盒经临床试用,测定了约1200例正常人和600例各类与肾脏病有关的病人的尿中Alb含量。初步的临床结果表明,放免测定尿中Alb有助于肾组织损伤的早期诊断。

双抗夹心免疫PCR法检测人促甲状腺激素(TSH)

目的建立人促甲状腺激素 (TSH)的免疫 PCR方法。找到一种高特异性高灵敏度的简便快速的方法检测低浓度抗原分子。方法用单克隆抗体包被 Eppendorf管 ,生物素化多抗和游离的亲和素作为连接分子 ,生物素化重组质粒作为指示分子 ,用特异引物扩增指示分子 ,同时与放射免疫技术、免疫放射技术和 EL ISA方法作比较。结果这种改进的免疫 PCR技术可检测到 1× 10 - 1 8mol/ L TSH含量比常规与法检测下限增高了 10 5 倍。结论这种方法的应用也为临床大量样品的检测提供了可能。

免疫层析分析进展

免疫层析分析进展吴冯波侯惠仁贺佑丰王衍真韩世泉免疫层析是出现于８０年代初期的一种独特的免疫分析方式［１，２］，它往往以条状纤维层析材料为固相，通过毛细作用使样品溶液在层析条上泳动，并同时使样品中的待测物与层析材料上针对待测物的受体（如抗体或抗原）发生...