抑制自噬促进MK-2206诱导SGC-7901胃癌细胞发生DNA损伤

目的:探讨蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)抑制剂MK-2206对胃癌细胞SGC-7901DNA损伤的影响。方法:不同浓度的MK-2206作用于SGC-7901细胞后,免疫荧光检测细胞内DNA损伤标记分子磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)焦点的生成,Western blot检测DNA损伤相关蛋白的表达水平,同时观察MK-2206对自噬标志蛋白LC3-II表达量的影响,用以确定MK-2206是否促进细胞发生自噬。结果:MK-2206能够诱导SGC-7901细胞发生DNA损伤,促进细胞内γ-H2AX焦点生成,并且激活DNA损伤相关蛋白的表达;MK-2206作用细胞后,LC3-II的生成增加;抑制细胞的自噬显著增强了MK-2206诱导的H2AX磷酸化水平。结论:Akt抑制剂MK-2206能够诱导细胞发生DNA损伤和自噬,抑制自噬促进了MK-2206诱导的DNA损伤。

基于网络药理学和实验验证探讨荆防颗粒对自身免疫性肝炎小鼠的治疗作用及作用机制

目的基于网络药理学及动物实验探讨荆防颗粒对自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)小鼠的治疗作用及作用机制。方法通过TCMSP数据库筛选荆防颗粒的活性成分及其对应的靶点,通过检索Omim、Drugbank和GeneCards数据库收集AIH相关的靶点,进而得到荆防颗粒治疗AIH的关键靶点;将获得的关键靶点导入STRING数据库进行分析,并构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,通过Cytoscape软件可视化;通过Metascape数据库对关键靶点进行基因本体(gene ontology,GO)功能及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。通过建立刀豆蛋白A诱导的AIH小鼠模型探讨荆防颗粒治疗AIH的作用机制。结果共筛选得到荆防颗粒中159个潜在活性成分和269个相关的靶点,与343个AIH相关靶点取交集,获得25个交集靶点。PPI网络分析显示,白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-1β、信号传导和转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)和IL-8/CXC型趋化因子配体8(CXC chemokine ligand 8,CXCL8)等靶点可能为荆防颗粒治疗AIH的关键靶点;KEGG通路富集分析得到炎症途径和凋亡相关途径信号通路。体内实验结果显示,与模型组比较,荆防颗粒显著减轻了刀豆蛋白A诱导的肝炎,表现为小鼠存活率增加、肝细胞坏死减少、血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性降低(P<0.05、0.01);荆防颗粒还通过抑制IL-6/STAT3、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)/IL-1β和TNF-α/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路进而调节多种细胞因子(IL-6、IL-1β、TNF-α、CXCL-8)的产生(P<0.05、0.01),从而发挥抗炎、抗凋亡作用。结论荆防颗粒通过多成分、多靶点发挥治疗AIH的作用。

PI3Kα抑制剂BYL719抑制脐静脉血管内皮细胞增殖及血管生成的研究

目的探讨PI3Kα抑制剂BYL719对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖与血管生成的影响。方法采用MTT法测定BYL719对HUVEC活力的抑制作用;用流式细胞术检测BYL719对其细胞周期的影响;体外小管形成实验观察BYL719对血管生成的影响;Western blot检测Akt、p-Akt、cyclin D1和CDK4蛋白表达水平的变化。结果 BYL719抑制了HUVEC中Akt的磷酸化水平;BYL719作用细胞后,HUVEC的细胞活力显著降低;BYL719能够通过下调cyclin D1和CDK4的表达而阻滞细胞于G1期,进而抑制HUVEC的增殖;HUVEC经BYL719处理后,体外小管形成能力受到显著抑制。结论 BYL719降低了HUVEC中Akt的磷酸化水平,能够抑制HUVEC的细胞增殖和血管生成。

基于NF-κB/NLRP3/IL-1β信号通路探讨荆防合剂对荨麻疹小鼠干预作用的研究

观察荆防合剂对氢氧化铝/卵白蛋白诱导的荨麻疹小鼠的疗效并探讨其作用机制。将60只雄性昆明小鼠随机均分为正常组,模型组,荆防合剂低、中、高剂量组,盐酸西替利嗪片阳性药组。腹腔注射卵白蛋白与氢氧化铝混合液建立荨麻疹小鼠模型。第2次免疫时观察并记录小鼠瘙痒情况;苏木精-伊红(HE)染色法检测各组小鼠皮肤组织病理变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组小鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;免疫组织化学法检测各组小鼠皮肤组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、IL-1β的表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组小鼠皮肤组织中核因子κB(NF-κB p65)、NLRP3、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、胱冬肽酶-1(caspase-1)、IL-1β蛋白的表达水平。结果显示,除正常组外,荆防合剂低、中、高剂量组,阳性药组以及模型组小鼠均出现不同程度的瘙痒反应。与模型组比较,荆防合剂低、中、高剂量组以及阳性药组小鼠瘙抓潜伏期延长(P<0.05),瘙抓次数明显减少(P<0.05);皮肤组织病理形态显著改善;血清中IL-1β和TNF-α的水平显著降低(P<0.05);皮肤组织中NLRP3和IL-1β阳性表达细胞数量显著减少(P<0.01);p-NF-κB p65、NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、IL-1β蛋白的表达显著下调(P<0.05)。综上研究结果表明,荆防合剂能够抑制荨麻疹小鼠炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB/NLRP3/IL-1β信号通路激活有关。

荆防合剂通过抑制JAK2-STAT3信号通路调节荨麻疹小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的平衡

研究荆防合剂对荨麻疹小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的影响。50只昆明小鼠随机均分为正常组(C)、模型组(V)、荆防合剂0.5 g·kg^(-1)组(JF-L)、荆防合剂1 g·kg^(-1)组(JF-M)、荆防合剂2 g·kg^(-1)组(JF-H)。通过腹腔注射卵白蛋白和氢氧化铝混合液[(0.1 mg+0.1 mL)/只]制备荨麻疹模型,实验结束后取血清检测血清总IgE水平;取皮肤组织,HE染色检测病理变化,Western blot检测p-JAK2(Janus kinase 2)/JAK2和p-STAT3(signal transducer and activator of transcription 3)/STAT3水平;取脾脏检测脾脏指数,流式细胞术检测脾脏淋巴细胞亚群。结果显示,与C组相比,V组皮肤组织出现明显的病理改变,抓挠次数、脾脏指数和血清总IgE水平增加,皮肤组织JAK2和STAT3磷酸化水平升高,CD4^(+)T、Th1、Treg比例降低,CD8^(+)T、Th2、Th17比例升高,CD4^(+)/CD8^(+)、Th1/Th2、Terg/Th17比值降低。与V组相比,各给药组小鼠皮肤组织的病理形态均有不同程度改善,表皮增厚不明显,真皮网状层胶原纤维结构相对完整,水肿减轻,血管扩张及周围炎细胞浸润减少,抓挠次数、脾脏指数、p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3水平降低;JF-M组和JF-H组血清总IgE水平降低,CD4^(+)T、Th1、Treg比例升高,CD8^(+)T、Th2、Th17比例降低,CD4^(+)/CD8^(+)、Th1/Th2、Terg/Th17比值升高。综上表明,荆防合剂可以通过抑制JAK2-STAT3信号通路调节脾脏T淋巴细胞亚群的平衡来改善荨麻疹小鼠的症状。