不同剂量环磷酰胺对福建黄兔外周血生化指标的影响

探讨不同剂量环磷酰胺对福建黄兔外周血生化指标的影响,为建立福建黄兔免疫抑制动物模型提供实验参考。选用福建黄兔18只(4月龄),随机分为对照组和模型组,模型组连续7天分别腹腔注射浓度为20、40、60、80、100 mg/kg的环磷酰胺,第8天采集外周血。不同剂量的环磷酰胺对外周血的电解质(钾、钠、氯、钙、镁、磷、碳酸氢根、阴离子间隙、渗透压)、肌酶(乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶)、血糖(葡萄糖)、血脂(总胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、载脂蛋白A1、载脂蛋白B)、肝功能(总胆红素、直接总胆红素、间接总胆红素、总蛋白、白蛋白、球蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、谷氨酰转肽酶、谷草转氨酶/谷丙转氨酶、碱性磷酸酶)、肾功能(尿素氮、肌酐、尿酸)等指标与对照组比较有显著的变化,并呈现剂量依赖关系;而不同剂量的环磷酰胺对黄兔外周血的载脂蛋白B/载脂蛋白A1比例(B/A1)、白蛋白/球蛋白比例(A/G)水平没有明显差异。随着环磷酰胺剂量的升高,福建黄兔的肝、肾功能受到严重的影响,表明福建黄兔的生理机能和免疫功能呈逐步下降趋势。

恒河猴在生殖生物学中的应用进展

目的非人灵长类动物在生殖生物学研究领域是一种非常重要的实验动物。人类利用非人灵长类动物与人的生物学等方面相似的特征,开展了生殖生物学、生理学、药理学、毒理学以及生育调节等方面的研究工作,为生殖生物学基础研究以及人类健康和疾病问题的基础研究和临床前研究提供了理想的动物模型。随着生命科学的发展,对非人灵长类实验动物质量提出了更高的要求,人们认识到实验时,应用健康的优质非人灵长类动物的重要性。本文简要概括了非人灵长类动物恒河猴的生物学特性,阐述了非人灵长类动物恒河猴在生殖生物学中的应用研究。

动物实验室引入认证评价体系初探

在动物实验室中引入质量和能力的认证评价体系,规范其人员、设施、环境、管理和运作程序等是保证动物质量和动物实验质量的有效途径。介绍了国内外涉及实验动物主要认证的情况,通过对《实验动物机构质量和能力的通用要求》的探讨,分析了动物实验室开展质量和能力评价的重要性,为动物实验室开展质量管理活动和选择有效的认证评价体系提供参考。

恒河猴睾丸支持细胞对间质细胞分泌睾酮的研究

目的研究恒河猴睾丸支持细胞对间质细胞分泌睾酮的调节作用。方法采用无血清培养的方法,分析了促性腺激素释放激素(GnRH)、卵泡刺激素(FSH)、表皮生长因子(EGF)、内皮素-1(ET-1)和白细胞介素-1(IL-1)对原代共培养恒河猴睾丸支持细胞与间质细胞睾酮分泌水平的影响。结果 GnRH、FSH、EGF和ET-1对原代共培养恒河猴睾丸支持细胞与间质细胞睾酮分泌水平具有促进作用,并且这种影响与共培养的支持细胞数量呈线性关系,即共培养的支持细胞数量增加,睾酮分泌水平亦明显上升;而IL-1对原代共培养恒河猴睾丸支持细胞与间质细胞睾酮分泌水平没有产生影响。结论支持细胞对间质细胞分泌睾酮具有重要的调节作用。

恒河猴促黄体激素生物测定法及应用研究

目的建立恒河猴促黄体激素(LH)生物测定法。方法利用LH体外生物测定法,测定恒河猴血清中LH含量。结果测定方法的灵敏度为0.05ng/管,批内和批间误差分别为(3.18±1.52)%和(7.56±3.41)%,证明该方法准确性高;恒河猴血清中LH含量反应曲线和hLH标准曲线平行良好,说明该方法可以用来检测恒河猴血清中的具有生物活性的LH变化,反映了动物正常的生理状态;回收实验表明,在该测定方法中加入10ng、20ng、40nghLH时的回收率分别为(99.12±4.56)%、(99.31±6.49)%、(101.02±7.58)%,说明测定结果的可靠性。结论本实验所建立的LH体外生物测定法灵敏度高,稳定性强。

恒河猴血清孕酮含量测定方法

目的建立恒河猴血清中孕酮含量测定方法。方法本文采用放射免疫测定技术。结果孕酮的回收率为94％，批内CV为5．1％～8．3％，批间CV为4．5％～7．7％，灵敏度为5～10Pg。说明该方法具有较高的灵敏度、特异性、准确性。分别测定了幼年组、成年组和老年组的雌性恒河猴的血清中的孕酮含量分别为：（0．20±0．04）ng／mL、（6．26±0．17）ng，mL和（0．35±0．06）ng/mL；成年雌性恒河猴月经周期孕酮的变化范围为：滤泡期为（1．10±0．12）ng／mL，排卵期（2．36±0．18）ng/mL，黄体期（6．17±0．15）ng/mL，妊娠期随着妊娠月份的增加，孕酮浓度也增加，最高可达50ng／mL。结论经实验验证，该方法灵敏、可靠、适用，可作为恒河猴血清中孕酮含量测定的一种方法。

恒河猴促滤泡激素生物测定法的建立和应用

目的建立恒河猴促滤泡激素(FSH)生物测定法。方法利用FSH体外生物测定法,测定了恒河猴血清中FSH含量。结果测定方法的灵敏度为0.02 ng/管,批内和批间误差分别为(2.53±1.25)%和(4.02±2.17)%,证明该方法准确性高;恒河猴血清中FSH含量反应曲线和hFSH标准曲线平行良好,说明该方法可以用来检测恒河猴血清中的具有生物活性的FSH变化,反映了动物正常的生理状态;回收实验表明,在该测定方法中加入5 ng、10 ng、20 ng hFSH时的回收率分别为(101.28±5.66)%、(99.78±4.51)%、(100.61±5.42)%,说明测定结果的可靠性。结论本实验所建立的FSH体外生物测定法灵敏度高,稳定性强。

米非司酮对恒河猴促性腺激素分泌水平的抑制作用

目的分析米非司酮(RU486)对恒河猴促性腺激素分泌水平的影响,探讨RU486影响恒河猴促性腺激素分泌的可能机制,为临床安全用药提供理论依据。方法采用生物测定法测定恒河猴促性腺激素,比较在不同情况下恒河猴促性腺激素的分泌水平。结果实验表明:不同时间(0、0.5、1、2、4、8、12、244、8 h)用药后,RU486对恒河猴促黄体激素(LH)、促滤泡激素(FSH)分泌水平的影响,在用药0.5、1、24、h后,对LH、FSH分泌均有抑制作用,其中在用药4 h时,LH、FSH分泌水平均有显著的降低,而用药81、2、244、8 h后,LH、FSH浓度没有显著差异。在月经周期的不同时期一次用药后发现,卵泡期:RU486对LH、FSH分泌水平影响较小;排卵期:RU486对LH、FSH峰的发生延迟现象;黄体期:观察到RU486对FSH、LH基础分泌水平及脉冲的幅度出现下降。结论RU486对恒河猴的LH、FSH分泌水平,在不同情况下有显著差异。

针刺对雌性恒河猴生殖内分泌抑制性影响的研究

选用雌性恒河猴１９只，随机分组，实验组１０只，自身对照组６只，空白对照组３只。采用针刺方法，观察针刺对恒河猴ＦＳＨ、ＬＨ、Ｅ２、Ｔ、Ｐ分泌水平的影响。结果表明，针刺在垂体和卵巢水平上同时对雌性恒河猴的生殖内分泌产生抑制性效应，其作用机理，有待进一步观察。

灵芝多糖对动脉粥样硬化ApoE^(-/-)小鼠血脂及LOX-1、TNF-α、ICAM-1的影响

目的探讨灵芝多糖(GLPs)对动脉粥样硬化(AS)ApoE^(-/-)小鼠血脂及血凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附因子-1(ICAM-1)的影响。方法将40只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、GLPs低、中、高剂量组,每组10只,另取10只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。模型组、GLPs低、中、高剂量组均采用高脂喂养90 d的方式建立AS模型,然后GLPs低、中、高剂量组采用不同剂量GLPs干预30 d。观察不同剂量GLPs对AS模型血脂以及LOX-1、TNF-α、ICAM-1等炎症因子表达的影响。结果模型组主动脉斑块增多,主动脉管壁厚薄不均,内部脂质池较大,表现典型AS病理特征,证实ApoE^(-/-)小鼠AS模型建立成功。与正常组相比时,模型组胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平显著升高,而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)显著降低,均具有统计学意义(P均<0.05)。与模型组相比,GLPs低、中、高剂量组的TC、LDL-C及低剂量组TG水平降低,高剂量组HDL-C水平升高(P均<0.05)。与正常组相比,模型组LOX-1、TNF-α及ICAM-1 mRNA表达水平明显升高(P均<0.05)。与模型组相比,GLPs低、中、高剂量组LOX-1、ICAM-1及GLPs低、高剂量组TNF-αmRNA表达均明显降低(P均<0.05)。结论 GLPs显著改善AS小鼠血脂异常,还可明显抑制LOX-1、TNF-α及ICAM-1等炎症因子的表达,这提示GLPs防治AS作用机制与抑制炎症因子表达有关。

灵芝多糖对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨GLPs对AS疾病TLR4信号通路调控机制的影响。方法:50只ApoE^(-/-)小鼠按随机数字表法分为模型组、GLPs低、中、高剂量组及辛伐他汀组,10只C57BL/6J小鼠作为正常组。高脂喂养12周建立AS模型,后4周各治疗组以高脂饮食结合药物方式干预,分别采用RT-PCR和western blot方法检测各组小鼠主动脉TLR4、NF-κB、My D88、TRAF-6、TRAM及TRIF等mRNA和蛋白的相对表达。结果:与正常组比较,模型组TLR4、NF-κB、My D88及TRAF-6 mRNA及蛋白表达均显著升高,GLPs干预后各指标均呈下降趋势;与模型组比较,高剂量组TLR4 mRNA和蛋白比较差异有统计学意义,低、高剂量组NF-κB mRNA及中、高剂量组NF-κB蛋白差异有统计学意义,中、高剂量组My D88 mRNA和蛋白差异有统计学意义,同时低、中、高剂量组TRAF-6mRNA及蛋白均具极显著性差异。与正常组比较,模型组TRAM、TRIF mRNA及蛋白表达均明显升高,GLPs干预后有所降低,但差异无统计学意义。结论:推测GLPs对于AS的影响可能经由TLR4通路中抑制其下游My D88依赖性信号通路起作用。

福建黄兔血液生理生化指标的测定

为了建立福建黄兔的血液正常生理生化指标。选择健康、体重约2.0kg的福建黄兔20只,雌雄各半,在普通环境中饲养观察一周,试验前禁食12h,自由饮水,清晨空腹耳静脉采血,采用HEMAVET950动物血液分析仪测定20项血液生理值,采用SysmexChemix-180全自动血液生化分析仪进行24项血液生化值的测定。结果表明:福建黄兔血液生理指标中除血红蛋白浓度(HGB)雌雄有显著差异外,其他指标差异均不显著;所测的福建黄兔各项血液生化指标雌雄均无显著性差异。说明福建黄兔雌雄间的生理生化值基本一致,不受性别因素的影响。

催乳素对原代培养恒河猴睾丸间质细胞睾酮合成的影响

目的研究催乳素对睾丸间质细胞睾酮生成的调节作用。方法采用无血清培养方法分析催乳素对原代培养恒河猴睾丸间质细胞睾酮合成的影响。结果催乳素可增强恒河猴睾丸间质细胞对猴绒毛膜促性腺激素(mCG)刺激的反应,睾酮分泌量显著高于mCG和催乳素单独作用时的总和。在mCG存在下,催乳素可调节不同的睾酮前身物孕烯醇酮、孕酮和17α-羟孕烯醇酮转化为睾酮。低剂量的催乳素(10～100 ng.mL-1)可使一定剂量的睾酮前身物转化为睾酮的量明显增加,而高剂量的催乳素(300～1000 ng.mL-1)却明显地抑制睾酮前身物为睾酮,其中以17α-羟孕烯醇酮的作用最为显著。结论催乳素对睾丸间质细胞睾酮合成的作用,可能部分是通过其促进17α-羟孕烯醇酮转化为睾酮来实现的。

灵芝多糖对脂多糖诱导的巨噬细胞TLR4/NF-κB通路调控及下游炎症因子的影响

目的探讨灵芝多糖(GLPs)对脂多糖(LPS)刺激的RAW264.7巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)核因子-κB(NF-κB)信号通路及炎症因子的影响机制。方法体外实验分为5组,分别为对照组,LPS组及GLPs药物低、中、高剂量组。除对照组外,其余均用lμg/mL LPS刺激16 h,药物组分别同时给予GLPs 40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL干预2 h,收集细胞。采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法测定TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及植物血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的mRNA和蛋白表达情况。结果与对照组相比,LPS组小鼠RAW264.7细胞TLR4、MyD88、NF-κB及TRAF-6 mRNA表达明显升高(P<0.05)。采用GLPs干预后显著抑制TLR4、MyD88、NF-κB及TRAF-6的表达,与LPS组相比,GLPs中、高剂量组TLR4、MyD88、TRAF-6 mRNA及GLPs低、中、高剂量组NF-κB mRNA均具有显著性差异(P<0.05)。各组的TLR4、MyD88、NF-κB及TRAF-6蛋白表达趋势与mRNA基本一致。与对照组相比,LPS组小鼠RAW264.7细胞TNF-α、LOX-1 mRNA水平显著升高(P<0.01),采用GLPs干预后TNF-α、LOX-1 mRNA均显著低于LPS组(P<0.05)。各组的TNF-α、LOX-1蛋白表达趋势与mRNA基本一致。结论 GLPs可阻断TLR4高表达及下游MyD88依赖性途径,还可明显抑制TNF-α、LOX-1等炎症因子的表达。

TLR4信号通路在中药抗动脉粥样硬化中的研究进展

动脉粥样硬化是一种复杂的多因素疾病,近年来中药有效成分防治该病的作用研究已取得一定成果,而现有的防治机制研究也开始逐步深入到细胞和分子水平。TLR4信号通路可基于转录水平激活多种与炎症反应相关的细胞因子和黏附分子的表达,成为动脉粥样硬化病变机制之一。因此就近年来TLR4信号通路与动脉粥样硬化关系及中医药抗动脉粥样硬化在调节TLR4信号通路的研究进展作一综述。

福建黄兔免疫功能低下模型的建立

为了探索一种简便易行、具有良好应用性并适用于中医药领域免疫功能低下的动物模型,以为福建黄兔提供一种新型实验动物的实验依据。实验采用氢化可的松为细胞免疫抑制剂,6个实验组,其中1个对照组,5个剂量组(分别每天20、25、30、35、40mg/kg),采用流式细胞检测法测CD4、CD8细胞含量,并通过摘取脾脏的方式计算脾脏指数。实验结果显示:B、C剂量组(分别每天25、30mg/kg)的福建黄兔在注射药物前后CD4、CD8细胞含量呈现明显的下降趋势,证实上述2个剂量组是福建黄兔免疫功能低下模型造模的较好剂量;同时,A～E剂量组的黄兔脾脏相较于对照组均呈现不同程度的缩小,脾脏指数降低,B、C、D组与对照组差异显著,反映其免疫功能受损,其中尤以C剂量组(30mg/kg)下降最为明显。由此可见,C剂量组是本实验中免疫功能低下动物模型造模的最适宜剂量。

标准化动物实验室的建设与管理

根据高等医学院校标准化动物实验室的特点,结合本单位新建实验动物中心大楼建设和管理的工作实际和经验总结,从硬件和软件两方面探讨标准化动物实验室建设和管理方面的问题,对优化建设方案,完善管理方法,促进管理规范化等方面进行了探讨。

基于子代基因型鉴定技术研究FMR1敲除对C57BL/6小鼠繁殖性能的影响

为探讨FMR1基因敲除对C57BL/6小鼠繁殖性能的影响,将FMR1基因敲除杂合子小鼠饲养于SPF环境,依照遗传学规则进行繁育,并采用PCR法利用小鼠尾部组织鉴定子代小鼠的基因型。结果表明,PCR技术可以检测小鼠的基因型,且具有方便快捷、直观可靠的特点。子代经过检测可得野生型、杂合子和纯合子3种基因型;在此鉴定基础上,挑选10周龄C57BL/6 FMR1 KO和同源SPF级C57BL/6种鼠各10对,采取1:1全同胞兄妹近亲繁殖的方法,测定各对第2胎仔鼠的繁殖性能,并进行比较分析。结果显示,C57BL/6 FMR1 KO小鼠在窝产仔数、离乳率、初生鼠体重和体长、离乳体长及雌雄比例等数值偏低,但均差异不显著(P>0.05);而两者的离乳体重差异极显著(P<0.01)。

福建黄兔部分生理参数的测定

目的健康福建黄兔尿液指标、体温、脏器系数的测定。方法 20只健康福建黄兔,雌雄各半,体重约2.5kg,自由饮水,早晨饲喂前收集新鲜尿液,测定尿10项指标。清晨室温下用电子体温计测定兔子的直肠温度。兔子禁食12h,3%戊巴比妥钠麻醉,颈动脉放血处死,立即剖解取各脏器,清洗干净并用滤纸吸干,电子分析天平称重各脏器。结果收集的福建黄兔尿液大多数都呈黄色浑浊,尿10项指标个体差异不是很大。福建黄兔的平均体温为39.67℃,比普通家兔体温稍高。福建黄兔的脏器系数除肺脏和脾脏受性别因素的影响雌雄间存在一定的差异外,其他几种脏器系数比较均一,差异不显著。结论本实验客观地测定了普通环境饲养下的健康福建黄兔的正常体温、尿液指标、脏器系数,为今后福建黄兔在生命科学研究领域的应用提供一定的参考。

福建省部分高校师生实验动物伦理福利意识的调查和分析

目的调查福建省部分高校师生对于动物实验和实验动物福利的态度和了解程度,探讨提高师生对于实验动物福利意识的认识和态度。方法采用问卷调查的方式,对247名师生进行无记名问卷调查,内容主要是对于动物实验和实验动物伦理福利的了解。结果 90.16%的师生支持动物实验,但只有19.67%的师生听说过实验动物的相关法律。结论在动物实验中应提倡"3R"原则,要提高师生实验动物伦理福利的意识,进一步促进实验动物伦理福利的立法进程。