自支撑Ag掺杂ZnO花状纳米线阵列及其光学性质

利用简单、温和的二步水浴法制备一种大面积自支撑、可自由迁移的Ag掺杂ZnO花状纳米线阵列。通过场发射扫描电子显微镜(FESEM)、元素能谱(EDS)、X射线衍射谱(XRD)、室温和变温光致发光谱(PL)等一系列表征手段对所制备的自支撑Ag掺杂ZnO纳米线阵列进行了研究。研究结果显示:这种自支撑纳米材料具有良好的晶体质量和光学性质,在低温(85 K)下显示出A0X和FA为主导的受主相关发射峰,通过理论公式计算受主结合能为118 meV。在变温光致发光光谱中,FA发射峰位随温度的变化符合理论模型。

生长温度和源氛浓度对ZnO晶体生长影响的机理分析

利用原子层沉积(ALD)方法在Si(100)片上沉积200nm的ZnO薄层作为籽晶层,通过化学气相沉积(CVD)法常压下在籽晶层上生长ZnO晶体结构。通过X射线衍射(XRD)、场发射电子扫描显微镜(FESEM)和光致发光光谱(PL)手段对其结构形貌及光学性质进行表征,结合晶体生长机理讨论和分析影响ZnO微纳结构生长的因素。结果表明,反应源气氛浓度是影响ZnO形貌的重要因素。

Au修饰ZnO纳米带及其光催化性质研究

采用离子溅射方法在ZnO纳米带表面蒸镀Au层，经过500℃退火，在样品表面形成Au纳米颗粒，通过SEM、XRD对退火后样品进行结构表征，结果表明，随着蒸镀Au量的增加，在500℃退火后的Au颗粒尺寸逐渐减小，且分布均匀。Au颗粒与ZnO纳米带接触可以形成肖特基结，肖特基结能够有效地使电子与空穴分离并且快速导出电子，所以能够有效提高光催化活性。将以上产物作为光催化剂，在紫外光照射下降解甲基橙（Methyl Orange），研究其光催化性能，与纯zn0相比，金修饰ZnO纳米带的光催化性能有明显的提高，且不同Au颗粒尺寸降解能力不同。

石杉碱甲改善认知功能的临床研究进展

认知功能障碍常见于各种痴呆患者,其中阿尔采末病是最常见的。从我国传统中草药蛇足石杉分离提取到的石杉碱甲,是一种高效、可逆的选择性乙酰胆碱酯酶抑制剂,对阿尔采末病患者的认知功能有明显的提升作用。随着临床研究的不断扩大和深入,发现石杉碱甲同样可以很好地治疗血管性痴呆及精神分裂症、帕金森病、糖尿病等引起的认知功能障碍,具有非常广阔的临床应用前景。本文综述了近年来石杉碱甲单独用药以及合并用药缓解认知功能障碍的临床应用研究进展,以期为今后的合理用药提供线索。

缺氧对人真皮成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转化的影响及其机制

目的探讨缺氧对人真皮Fh向肌Fh表型转化的影响及其机制。方法取对数生长期第3代健康成人真皮Fb，用含体积分数10％FBS的DMEM培养基培养，进行以下5项实验。（1）实验1、2、3均将所取细胞按随机数字表法分为常氧组、缺氧组，每组10皿。常氧组细胞于含体积分数21％氧气环境中培养，缺氧组细胞于含体积分数1％氧气环境中培养。培养0、48h，2组分别取5皿细胞，实验1用实时荧光定量RT—PCR法检测细胞中肌Fh标志物α平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达，实验2用蛋白质印迹法检测细胞中α-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达，实验3用蛋白质印迹法检测细胞中NF-κB蛋白表达。（2）实验4将细胞按随机数字表法分为常氧组、缺氧组、缺氧＋吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）组，每组5皿。前2组细胞同实验1处理，缺氧＋PDTC组细胞同缺氧组细胞处理并在培养基中加入4mL终物质的量浓度为10μmol／LPDTC。培养48h，蛋白质印迹法检测各组细胞中NF—κB蛋白表达。（3）实验5将细胞按随机数字表法分为常氧组、缺氧组、缺氧＋PDTC组、常氧＋PDTC组，每组5皿。前3组细胞均同实验4处理，常氧＋PDTC组细胞同常氧组细胞处理并在培养基中加入4mL终物质的量浓度为10μmol／LPDTC。培养48h，蛋白质印迹法检测各组细胞中α—SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD—t检验。结果（1）与常氧组相应时相点比较，缺氧组Fb培养0h时α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达量以及NF-κB蛋白表达量均无明显变化（t值为-1．21～2．04，P值均大于0．05），培养48h时α—SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达量以及NF—κB蛋白表达量均显著升高（t值为-12．57～-3．44，P值均小于0．01）。（2）培养48h，缺氧组Fh中NF—κB的蛋白表达量为0．83±0．12，显著高于常氧组的0．17±0．06（t=-16．96，P〈0．001）；缺氧＋PDTC组Fh中NF—κB蛋白表达量为0．31±0．08，显著低于缺氧组（t=12．73，P〈0．001）。（3）培养48h，缺氧组Fb中α-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达量分别为0．73±0．09、1．25±0．10、1．16±0．07，显著高于常氧组的0．14±0．06、0．87±0．08、0．77±0．13（t值为9．24—11．24，P值均小于0．001）；常氧＋PDTC组Fh中α—SMA蛋白表达量为0．24±0．07，显著高于常氧组（t=4．22，P〈0．01），Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达量分别为0．25±0．06、0．32±0．11，显著低于常氧组（t值分别为-4．31、-3．88，P值均小于0．01）；缺氧＋PDTC组F11中α-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达量分别为0．09±0．08、0．38±0．12、0．47±0．08，显著低于缺氧组（t值为11．78～22．98，P值均小于0．001）。结论缺氧能够显著上调人真皮Fb中α—SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达，其可能促进了Fb向肌Fb的表型转化，且可能与NF—κB信号通路的激活有关。

人脂肪干细胞外泌体对糖尿病周围神经病变的作用及其机制

目的探讨糖尿病周围神经病变(DPN)中神经鞘胚素蛋白表达的变化及人脂肪干细胞(ADSC)外泌体对神经鞘胚素蛋白表达变化的调节作用。方法该研究为前瞻性观察性临床研究联合实验研究。将空军军医大学第一附属医院(以下简称本院)2022年5月—2023年10月收治的13例符合入选标准的DPN患者(男9例、女4例,年龄32~68岁)作为DPN组,将本院该段时间收治的5例符合入选标准的非糖尿病患者(男4例、女1例,年龄29~61岁)作为对照组。采集2组患者清创或截肢后弃用组织中的趾神经或腓肠神经组织,行苏木精-伊红染色后观察神经组织的病理学变化,行免疫荧光染色后观察神经组织中S100β、神经鞘胚素的蛋白表达并对神经鞘胚素蛋白表达进行定量,分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量反转录PCR法检测神经鞘胚素的蛋白和mRNA表达(DPN组样本数均为13,对照组样本数均为5)。取12只雄性3~5 d龄C57BL/6小鼠,提取施万细胞,并将细胞分为常规培养组(常规培养)、单纯高糖组(仅用高浓度葡萄糖溶液培养)、高糖+外泌体组(用高浓度葡萄糖溶液和提取的人ADSC外泌体培养)。培养24 h后,采用细胞计数试剂盒8检测细胞增殖活力(样本数为6);培养48 h后,采用蛋白质印迹法检测神经鞘胚素的蛋白表达(样本数为3)。结果相较于对照组,DPN组患者神经组织中神经支持细胞减少、炎症细胞增多,具有典型的神经损伤表现。免疫荧光染色检测显示,相较于对照组,DPN组患者神经组织中细胞核更多,S100β的蛋白表达更少;DPN组患者神经组织中神经鞘胚素蛋白表达为71±31,明显低于对照组的1729±62(t=76.92,P<0.05)。蛋白质印迹法检测显示,DPN组患者神经组织中的神经鞘胚素蛋白表达为0.74±0.08,明显低于对照组的0.97±0.06(t=5.49,P<0.05)。DPN组患者神经组织中神经鞘胚素的mRNA表达明显低于对照组(t=7.65,P<0.05)。培养24 h后,与常规培养组比较,单纯高糖组和高糖+外泌体组施万细胞增殖活力均明显降低(P<0.05);与单纯高糖组比较,高糖+外泌体组施万细胞增殖活力明显升高(P<0.05)。培养48 h后,与常规培养组比较,单纯高糖组、高糖+外泌体组施万细胞神经鞘胚素蛋白表达均明显降低(P<0.05);与单纯高糖组比较,高糖+外泌体组施万细胞神经鞘胚素蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论DPN患者神经组织中神经鞘胚素的蛋白表达较正常神经组织降低,这可能与高糖降低了施万细胞增殖活力相关;人ADSC外泌体可能通过提高神经鞘胚素蛋白表达,改善施万细胞增殖活力,进而延缓DPN的进展。

异体毛乳头细胞对小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响及其机制

目的探索异体毛乳头细胞(DPC)对小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响及其机制。方法该研究为实验研究。利用显微解剖结合胶原酶消化法自5只6周龄雄性C57BL/6J小鼠触须毛囊中提取DPC并成功鉴定。将18只8周龄雄性C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为磷酸盐缓冲液(PBS)组及DPC组(每组9只小鼠),在所有小鼠背部创建全层皮肤缺损创面模型。分别于伤后2、4、6 d,通过创面周围皮下注射给予DPC组小鼠含1×10^(6)个第4代DPC的细胞悬液100μL、PBS组小鼠等体积的PBS。伤后3、7、10、14 d,观察2组小鼠创面愈合情况及毛发生长情况并测量创面剩余面积;另测量2组小鼠伤后14 d创面毛发覆盖面积。伤后14 d,收集2组小鼠创面组织标本,行苏木精-伊红染色观察新生毛囊情况并计数,行Masson染色观察真皮层胶原沉积情况并测量胶原沉积面积,采用免疫荧光法检测Wnt/β连环蛋白信号通路相关分子β连环蛋白、淋巴增强结合因子1(Lef1)的蛋白表达,分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量反转录PCR法检测β连环蛋白、Lef1的蛋白和mRNA表达。各实验样本数均为3。结果与PBS组相比,DPC组小鼠伤后各时间点创面再上皮化速度加快,且在伤后10、14 d可见更多毛发生长。伤后7、10、14 d,DPC组小鼠创面剩余面积分别为(13.92±2.90)、(3.69±1.78)、(1.09±0.14)mm^(2),分别明显小于PBS组的(26.19±2.06)、(10.84±3.59)、(6.75±2.11)mm^(2)(t值分别为5.85、3.09、4.63,P值均<0.05)。伤后14 d,DPC组小鼠创面毛发覆盖面积为(62±7)mm^(2),明显大于PBS组的(35±6)mm 2(t=2.89,P<0.05)。伤后14 d,与PBS组比较,DPC组小鼠创面组织中新生毛囊数量明显增多(t=5.43,P<0.05),真皮层胶原沉积面积明显缩小(t=3.56,P<0.05)。伤后14 d,免疫荧光法和蛋白质印迹法检测均显示,DPC组小鼠创面组织中β连环蛋白(t值分别为5.49、4.25,P值均<0.05)和Lef1(t值分别为7.50、11.54,P值均<0.05)的蛋白表达均明显高于PBS组;DPC组小鼠创面组织中β连环蛋白和Lef1的mRNA表达均明显高于PBS组(t值分别为7.68、9.67,P<0.05)。结论DPC通过激活Wnt/β连环蛋白信号通路加快小鼠全层皮肤缺损创面再上皮化,并促进创面愈合过程中的毛囊再生。

吡咯并喹啉醌对氧化应激条件下大鼠骨髓间充质干细胞线粒体功能和细胞存活的影响及机制

目的:观察吡咯并喹啉醌(PQQ)在氧化应激条件下对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)线粒体功能和细胞存活的影响,并探讨其作用机制。方法:体外用含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基(下称正常培养基)培养大鼠BMSC,选取对数生长期的第3~5代细胞进行实验。(1)取细胞,分为正常对照组、正常对照+PQQ组、单纯过氧化氢组、过氧化氢+PQQ组。正常对照组细胞用正常培养基培养24 h;正常对照+PQQ组细胞用含终物质的量浓度为100μmol/L PQQ的正常培养基培养24 h;单纯过氧化氢组细胞用含有终物质的量浓度为200μmol/L过氧化氢的正常培养基培养24 h;过氧化氢+PQQ组细胞用含有终物质的量浓度为100μmol/L PQQ的正常培养基培养2 h后,加入终物质的量浓度为200μmol/L的过氧化氢培养24 h。于倒置相差显微镜下观察各组细胞形态,采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率。(2)取5个批次细胞,均分为正常对照组、单纯过氧化氢组、过氧化氢+PQQ组,各组细胞处理同实验(1)中相应各组。培养24 h后,采用流式细胞术对1个批次细胞进行细胞凋亡检测,计算细胞凋亡率;采用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒和倒置相差荧光显微镜对1个批次细胞分别进行线粒体膜电位检测和JC-1荧光染色观察;采用透射电镜观察1个批次细胞线粒体形态;采用过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性测定试剂盒对1个批次细胞分别进行CAT和SOD活性检测;采用蛋白质印迹法对1个批次细胞环磷酸腺苷活化交换蛋白1(Epac1)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK、剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、caspase-3蛋白表达进行检测,计算AMPK磷酸化水平、剪切型caspase-3/caspase-3比值。除形态观察外,其余各指标每组样本数均为6。对数据行单因素方差分析、独立样本等方差t检验。结果:(1)培养24 h后,单纯过氧化氢组细胞出现空泡且数量较正常对照组减少,细胞存活率为(74.3±2.9)%,较正常对照组的100.0%明显降低(t=6.39,P<0.01);与单纯过氧化氢组比较,过氧化氢+PQQ组细胞形态明显改善,细胞存活率明显升高至(116.9±4.2)%(t=6.92,P<0.01);正常对照+PQQ组细胞存活率为(101.2±1.1)%,与正常对照组相近(t=1.06,P>0.05)。(2)培养24 h后,与正常对照组的(13.6±1.0)%比较,单纯过氧化氢组细胞凋亡率明显增加[(37.1±2.0)%,t=10.57,P<0.01];与单纯过氧化氢组比较,过氧化氢+PQQ组细胞凋亡率明显降低[(17.0±0.7)%,t=9.49,P<0.01]。(3)培养24 h后,与正常对照组比较,单纯过氧化氢组细胞线粒体膜电位出现去极化,JC-1荧光染料主要以单体形式存在于细胞质中,发出绿色荧光,表现为膜电位明显降低(t=4.18,P<0.01);与单纯过氧化氢组比较,过氧化氢+PQQ组细胞线粒体膜电位升高至正常水平(t=4.43,P<0.01),JC-1荧光染料顺着极化线粒体膜电位进入线粒体聚集,发出红色荧光。(4)培养24 h后,与正常对照组的规则形态比较,单纯过氧化氢组细胞线粒体结构紊乱,线粒体嵴消失,线粒体基质密度降低;与单纯过氧化氢组比较,过氧化氢+PQQ组细胞线粒体结构规则完整,线粒体嵴清晰可见,线粒体基质密度增加。(5)培养24 h后,与正常对照组比较,单纯过氧化氢组细胞CAT活性明显升高(t=4.54,P<0.05),SOD活性明显降低(t=3.93,P<0.05);与单纯过氧化氢组比较,过氧化氢+PQQ组细胞CAT活性明显上升(t=8.65,P<0.01),SOD活性无明显变化(t=0.72,P>0.05)。(6)培养24 h后,与正常对照组比较,单纯过氧化氢组细胞Epac1蛋白表达明显降低(t=4.67,P<0.01),AMPK磷酸化水平、剪切型caspase-3/caspase-3比值明显升高(t=7.88、3.62,P<0.01);与单纯过氧化氢组比较,过氧化氢+PQQ组细胞Epac1蛋白表达、AMPK磷酸化水平均明显升高(t=4.34、16.37,P<0.01),剪切型caspase-3/caspase-3比值明显降低(t=3.17,P<0.05)。结论:PQQ预处理能够改善氧化应激条件下大鼠BMSC的线粒体功能,降低细胞凋亡率,提高细胞存活率,且可能与Epac1蛋白表达上调、AMPK信号通路激活和剪切型caspase-3蛋白水平降低有关。

人脂肪间充质干细胞外泌体对小鼠RAW264.7细胞的炎症反应和小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响

目的探讨人脂肪间充质干细胞(ADSC)外泌体对小鼠RAW264.7细胞介导的炎症反应和小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响。方法采用实验研究方法。取2020年6—9月于空军军医大学第一附属医院行腹部手术的3例女性患者(10~25岁)废弃脂肪组织,采用Ⅰ型胶原酶消化法提取ADSC,采用流式细胞术进行鉴定。使用差速超高速离心法提取人ADSC外泌体,采用透射电子显微镜观察形态,纳米颗粒跟踪分析仪检测粒径,蛋白质印迹法检测CD9、CD63、肿瘤易感基因101(TSG101)和β肌动蛋白的蛋白表达。将人ADSC外泌体与RAW264.7细胞共培养12 h后,观察RAW264.7细胞对人ADSC外泌体的吞噬情况。将RAW264.7细胞分为采用磷酸盐缓冲液(PBS)刺激适宜时间的PBS组及内毒素/脂多糖(LPS)刺激相应时间点的LPS刺激2 h组、LPS刺激4 h组、LPS刺激6 h组、LPS刺激12 h组、LPS刺激24 h组,每组3孔,采用实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)法检测白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6及IL-10的mRNA表达。将RAW264.7细胞分为PBS组、单纯LPS组、LPS+ADSC外泌体组,每组3孔,按前一实验筛选的时间进行相应刺激,采用实时荧光定量RT-PCR法检测IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10、转化生长因子β(TGF-β)及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达,采用蛋白质印迹法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg1)的蛋白表达。取24只8周龄雄性BALB/c小鼠,采用随机数字表法分为ADSC外泌体组和PBS组,每组12只,在背部造成1 cm×1 cm的全层皮肤缺损创面。伤后即刻,2组小鼠创面分别进行相应的处理。伤后1 d,采用酶联免疫吸附测定法检测血清中IL-1β和TNF-α的浓度,采用实时荧光定量RT-PCR法检测创面组织IL-1β、TNF-α及IL-6的mRNA表达。伤后3、6、9、12、15 d观察创面愈合情况,并计算创面未愈合率;伤后15 d,行苏木精-伊红染色和Masson染色,分别检测创面皮肤附件缺损长度及胶原容积分数(CVF);免疫组织化学法检测创面CD31表达及血管新生情况;免疫荧光法检测创面Ki67阳性细胞比、iNOS和Arg1双阳性细胞比、iNOS阳性细胞和Arg1阳性细胞的比值及两者的荧光强度。动物实验中样本数均为6。对数据行重复测量方差分析、单因素方差分析、独立样本t检验。结果培养12 h,细胞呈典型梭形结构,经流式细胞术鉴定为ADSC。外泌体呈囊泡状,粒径29~178 nm,表达CD9、CD63及TSG101而不表达β肌动蛋白。共培养12 h后,人ADSC外泌体成功被RAW264.7细胞吞入细胞质。LPS刺激2 h组、LPS刺激4 h组、LPS刺激6 h组、LPS刺激12 h组、LPS刺激24 h组RAW264.7细胞IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA表达均明显高于PBS组(t值分别为39.10、14.55、28.80、4.74,48.80、22.97、13.25、36.34,23.12、18.71、29.19、41.08,11.68、18.06、8.54、43.45,62.31、22.52、21.51、37.13,P<0.01),选择各种炎症因子表达均高表达的刺激12 h作为后续实验时间点。刺激12 h后,单纯LPS组RAW264.7细胞IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA表达均明显高于PBS组(t值分别为44.20、51.26、14.71、8.54,P<0.01);LPS+ADSC外泌体组RAW264.7细胞IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表达均明显低于单纯LPS组(t值分别为22.89、25.51、8.03,P<0.01),而IL-10、TGF-β和VEGF mRNA表达均明显高于单纯LPS组(t值分别9.89、13.12、7.14,P<0.01)。刺激12 h后,单纯LPS组RAW264.7细胞iNOS的蛋白表达明显高于PBS组和LPS+ADSC外泌体组(t值分别为11.20、5.06,P<0.05或P<0.01),Arg1蛋白表达明显低于LPS+ADSC外泌体组(t=15.01,P<0.01)。伤后1 d,ADSC外泌体组小鼠血清中IL-1β和TNF-α浓度及创面组织中IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表达均明显低于PBS组(t值分别为15.44、12.24,9.24、7.12、10.62,P<0.01)。伤后3、6、9、12、15 d,ADSC外泌体组小鼠创面未愈合率分别为(73.2±4.1)%、(53.8±3.8)%、(42.1±5.1)%、(24.1±2.8)%、0,均分别明显低于PBS组的(82.5±3.8)%、(71.2±4.6)%、(52.9±4.1)%、(41.5±3.6)%、(14.8±2.5)%(t值分别为4.77、8.93、5.54、7.63、7.59,P<0.01)。伤后15 d,PBS组小鼠创面皮肤附件缺损长度明显长于ADSC外泌体组(t=9.50,P<0.01),CVF明显低于ADSC外泌体组(t=9.15,P<0.01)。伤后15 d,ADSC外泌体组小鼠创面组织CD31阳性表达和新生血管数(t=12.99,P<0.01)明显多于PBS组,Ki67阳性细胞比明显高于PBS组(t=7.52,P<0.01)。伤后15 d,PBS组小鼠创面组织iNOS和Arg1双阳性细胞比为(12.33±1.97)%,明显高于ADSC外泌体组的(1.78±0.29)%(t=13.04,P<0.01),且iNOS荧光强度明显强于ADSC外泌体组,Arg1荧光强度明显强于ADSC外泌体组,iNOS阳性细胞和Arg1阳性细胞的比值明显高于ADSC外泌体组(t=35.16,P<0.01)。结论人ADSC外泌体可以减轻小鼠RAW264.7细胞的炎症反应,在小鼠全层皮肤缺损创面中减少巨噬细胞浸润和促炎性细胞因子分泌,增加抗炎细胞因子分泌,促进新生血管形成,增强创面细胞增殖,加速创面愈合。