氧化应激预适应减轻骨髓间充质干细胞氧化应激损伤

目的探讨氧化应激预适应对骨髓间充质干细胞(BMSC)氧化应激损伤的影响。方法通过密度梯度离心联合贴壁法分离培养BMSC,分为对照组(只加培养液)、预处理组(用50μmol/L H_(2)O_(2)预处理8 h,再用1000μmol/L H_(2)O_(2)持续处理24 h)、氧化损伤组(直接用1000μmol/L H_(2)O_(2)持续处理24 h)。采用2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色检测细胞活性氧(ROS)水平;JC-1染色法检测线粒体膜电位;原位末端脱氧核糖核酸转移酶标记技术(TUNEL)检测DNA损伤;硫代巴比妥酸(TBA)法检测丙二醛(MDA)含量;水溶性四唑盐1(WST-1)法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力;CCK-8法检测细胞活力及流式细胞术检测细胞凋亡。结果与氧化损伤组相比,预处理组ROS水平降低,线粒体膜电位升高,DNA损伤减轻,MDA含量明显减少,SOD活力及细胞活力提高,细胞凋亡率显著降低。结论氧化应激预适应可增强BMSC抗氧化应激能力,并促进其在氧化应激条件下的存活。

核桃嫩枝芽接技术应用研究

建立采穗圃,砧木以核桃共砧嫁接成活率最高;各品种间嫁接成活率无显著差异。用于芽接的砧木以长势中庸为好,长势过旺者嫁接成活率极低;芽接应在砧木达到要求粗度、接芽成熟时越早越好,应在雨季来临的6月2 0日之前完成嫁接,最晚不能超过6月3 0日;要合理选择穗枝、及时摘心以提高接芽的利用率;嫁接前后各7d内要严禁圃地浇水,并注意当地气象台中期气象信息,合理把握嫁接时机。

无公害防治云斑天牛幼虫试验初报

于云斑天牛幼龄幼虫期用线虫稀释液和灭幼脲注射虫道 ,12天后防治效果可达 95 %以上 ,此法无药害、无污染 。

章丘秋白桃优选初报

1 991年从章丘秋白桃中选出 7个优良单株 ,经过多年栽培观察 ,又从中选出“白桃王 1号”和“白桃王 2号”两个优系。两优系果型大 ,果面光洁 ,着色艳丽 ,品质优 ,耐贮运 ,抗逆性强 ,成熟期分别在 8月上旬和 8月中旬。

实生核桃改接技术应用研究

实生核桃改接良种,以4月中旬成活率最高,不宜过早或过晚;接穗要充实,芽子要饱满;要采用适当的嫁接方法(插皮舌接、双舌接)和接口保湿措施(保湿土筒、蜡封接穗);要“放水”以控制伤流;嫁接后要加强管理。

低浓度过氧化氢预处理增强骨髓间充质干细胞抗氧化应激损伤的能力

背景:骨髓间充质干细胞移植促进骨坏死区血管再生和骨重建,取得了一定疗效,但是骨坏死区氧化应激微环境极大地限制了移植后骨髓间充质干细胞的存活、增殖和成骨分化能力,降低了对骨坏死区的修复作用。目的:探讨低浓度过氧化氢预处理对骨髓间充质干细胞抗氧化应激损伤的影响。方法:取生长良好的第3代兔骨髓间充质干细胞,实验分为3组:空白对照组,高浓度过氧化氢持续处理组(500μmol/L过氧化氢处理24 h),低浓度过氧化氢预处理组(50μmol/L过氧化氢预处理8 h,恢复12 h,再用500μmol/L过氧化氢处理24 h)。根据实验分组条件进行过氧化氢处理,采用DCFH-DA荧光染料检测细胞活性氧水平,ELISA法检测各组细胞超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活力,比色法检测各组细胞丙二醛水平,JC-1法检测细胞线粒体膜电位,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪和TUNEL/DAPI双染法检测细胞凋亡。结果与结论:①与高浓度过氧化氢持续处理组相比,低浓度过氧化氢预处理组可有效减少骨髓间充质干细胞内活性氧产生(P <0.05);同时,低浓度过氧化氢预处理组超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活力明显升高(P <0.05),丙二醛水平明显降低(P <0.05),线粒体膜电位损伤减轻(P <0.05),细胞存活率提高(P <0.05),细胞凋亡减少(P <0.05);②结果表明低浓度过氧化氢预处理可显著增强骨髓间充质干细胞抗氧化应激损伤能力。

核桃嫁接技术

比较系统地总结了实生核桃大树改接良种技术和良种核桃苗木繁育技术 ,详细介绍了包括采穗圃建立 ,接穗采集与贮存、嫁接时间掌握和插皮舌接、双舌接、方块形芽接、“工”字形芽接等嫁接方法 ,提出了开展核桃嫁接工作所应该注意的问题。

NMNAT3调节NAD+水平对兔BMSCs线粒体功能及其抗氧化应激能力影响的研究

目的研究烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶3(nicotinamide mononucleotide adenylyl transferase 3,NMNAT3)调节烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)水平对体外模拟氧化应激状态下兔BMSCs线粒体功能及其抗氧化应激能力的影响。方法取新西兰大白兔股骨及胫骨骨髓,采用密度梯度离心联合贴壁培养法体外分离培养BMSCs并传代。取第3代细胞经流式细胞仪、多向诱导分化鉴定后,采用增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标记的NMNAT3基因过表达慢病毒(Lv-NMNAT3-EGFP)进行转染(BMSCs/Lv-NMNAT3-EGFP),采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)及Western blot检测BMSCs内NMNAT3基因及蛋白表达情况,细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)方法检测细胞增殖能力;以阴性对照慢病毒转染BMSCs(BMSCs/Lv-EGFP)以及未转染BMSCs作为对照。另采用H2O2模拟氧化应激处理兔BMSCs,根据处理条件分为4组:A组为正常BMSCs,不加H2O2处理;B、C、D组分别取未转染的BMSCs、BMSCs/Lv-EGFP和BMSCs/Lv-NMNAT3-EGFP,采用H2O2模拟氧化应激处理。处理24 h后检测NMNAT3对氧化应激状态下BMSCs线粒体功能的影响[线粒体膜电位改变、NAD+及三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)水平]、BMSCs抗氧化应激能力变化[活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、丙二醛(malondialdehyde,MDA)及锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn-SOD)含量、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性]、对改善BMSCs衰老及凋亡的作用[衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence associated-β-galactosidase,SA-β-gal)染色及TUNEL染色]。结果经鉴定,体外成功分离培养兔BMSCs;经慢病毒转染技术获得高表达NMNAT3基因的兔BMSCs稳定株,细胞内NMNAT3基因及蛋白明显提高(P<0.05),细胞增殖趋势与正常BMSCs无明显差异。使用H2O2处理后,各组线粒体功能均出现损伤、细胞凋亡增加,但D组与B、C组比较,线粒体功能改善,膜电位明显升高,线粒体NAD+水平及ATP合成增加;抗氧化应激能力增强,细胞内ROS、MDA含量减少以及抗氧化酶Mn-SOD、CAT活性均增加;SA-β-gal染色阳性细胞比例及细胞凋亡率明显下降。上述指标差异均有统计学意义(P<0.05)。结论NMNAT3通过增加线粒体内NAD+水平可有效改善氧化应激状态下兔BMSCs线粒体功能,并增强其抗氧化应激能力,提高BMSCs在应激条件下的存活。