UBE2L6在卵巢癌中的表达及其预后价值

目的探讨UBE2L6基因在卵巢癌组织中的表达,并分析其与患者预后的关系。方法收集2014年7月至2022年2月在山西白求恩医院住院治疗的150例卵巢癌患者及因子宫腺肌症进行全子宫+双侧附件切除的患者25例,采用免疫组化SP法检测卵巢组织中UBE2L6蛋白的表达情况,比较UBE2L6蛋白在卵巢癌组织与正常卵巢组织中的表达差异;并分析UBE2L6蛋白表达与卵巢癌患者临床病理特征之间的关系;通过χ2检验、COX风险回归分析筛选影响卵巢癌患者无进展生存期的独立危险因素,并采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。基于基因表达在线数据库分析UBE2L6表达与卵巢癌临床病理指标相关性,通过Kaplan-Meier数据库检索UBE2L6表达与卵巢癌预后的相关性;利用京都基因与基因组百科全书富集分析预测基因功能;通过肿瘤免疫估计资源(TIMER)数据库分析UBE2L6在卵巢癌高表达与局部免疫浸润的相关性。结果与正常卵巢组织相比,UBE2L6在卵巢癌中高表达(P<0.05),与患者不良预后相关;COX风险回归模型分析显示,UBE2L6高表达是卵巢癌无进展生存期的独立危险因素(P<0.05)。基因富集分析显示UBE2L6可能通过炎症通路影响卵巢癌的发生发展及预后;TIMER数据库表明UBE2L6表达水平与B细胞(P=9.87×10^(-11))、CD8+T细胞(P=9.64×10^(-13))、中性粒细胞(P=2.13×10-22)、树突状细胞(P=6.50×10-15)及CD4^(+)T细胞(P=3.51×10^(-4))呈正相关,与肿瘤纯度呈负相关(P=7×10-8)。结论UBE2L6可能通过影响免疫细胞进而导致不良预后,其可能是卵巢癌治疗的潜在靶点。

CD2基因对卵巢癌肿瘤微环境中免疫浸润的作用

目的:探讨CD2基因对卵巢癌肿瘤微环境中免疫浸润的作用。方法:利用GEPIA在线工具检索CD2基因在卵巢癌中的表达情况,使用GEPIA和Kaplan-Meier plotter数据库分析CD2基因评估卵巢癌预后的价值;通过Coexpedia构建CD2基因在卵巢癌中的共表达基因网络。按评分高低筛选出关键基因,并通过GEPIA及cBioportal进一步分析CD2基因与关键基因的相关性,推测相关基因在卵巢癌中的表达及对预后的评估价值。利用TIMER分析CD2与相关基因在卵巢癌中的表达及与肿瘤微环境中的6种免疫细胞的相互关系。结果:①在癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中,CD2基因在卵巢癌组织中的表达高于正常卵巢组织(P<0.05)。②GEPIA及Kaplan-Meier plotter均提示CD2基因高表达的患者总生存期更长(P<0.05)。③CD2基因的共表达基因有CD3D、LCK、ITK、CCL5、CD48、GZMK、PTPRC、TRAF31P3、SH2D1A、GZMA、CD247、CD52、IL10RA、CD3E、IKZF1、CD53、CD6、CXCR6及CD3G。④按评分高低排序,筛选出排序前5的关键基因,分别为CD3D、LCK、ITK、CCL5及CD48。CD2与CD3D、LCK、ITK、CCL5和CD48的表达呈正相关(P<0.05)。⑤利用TIMER分析得出CD2基因与卵巢癌中B细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和树突状细胞的浸润情况呈正相关(P<0.05)。通过构建COX回归模型提示,巨噬细胞、中性粒细胞浸润水平与患者预后呈正相关,CD4+T细胞浸润水平与患者预后呈负相关(P<0.05)。结论:CD2基因在卵巢癌组织中高表达,其可能通过影响肿瘤微环境中免疫细胞的浸润影响患者预后。

自噬基因Beclin 1在宫颈鳞癌中的蛋白表达及其临床意义

目的探讨自噬基因Beclin 1在宫颈鳞癌中的蛋白表达以及与肿瘤发生发展的关系。方法采用免疫组化SP法检测81例宫颈鳞癌、20例宫颈上皮内瘤样病变（CIN，Ⅱ～Ⅲ级）和20例正常宫颈组织中自噬基因Beclin 1的蛋白表达。结果宫颈鳞癌组织中Beclin 1阴性、弱阳性、强阳性表达率依次是43．2％（35／81）、34．6％（28／81）、22．2％（18／81），与正常宫颈和宫颈上皮内瘤样病变组相比，Beclin 1在宫颈鳞癌中的表达显著下调（P=0．011）。宫颈鳞癌中Beclin 1的表达在不同FIGO分期、年龄、宫颈肌层浸润深度、宫颈肿瘤大小、大体类型间的差异无统计学意义。但在有无盆腔淋巴结转移、不同肿瘤分化程度间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论自噬基因Beckn 1在宫颈鳞癌中蛋白表达下调，并与宫颈鳞癌盆腔淋巴结转移和肿瘤分化程度有关。

GPR27基因在卵巢癌组织中的表达及其与肿瘤免疫浸润及患者预后的相关性

目的应用生物信息学方法探讨GPR27基因在卵巢癌组织中的表达,并分析其与肿瘤免疫浸润及患者预后的关系。方法在人类蛋白质图谱数据库(human protein atlas,HPA)、基因表达谱交互分析数据库(gene expression profiling interactive analysis,GEPIA)中检索GPR27在卵巢癌中的表达情况;收集2011年1月至2016年12月在山西白求恩医院治疗的卵巢癌患者150例及因子宫平滑肌瘤进行全子宫+双侧附件切除的患者23例,采用免疫组化SP法检测GPR27蛋白的表达,比较GPR27基因在卵巢癌组织与正常卵巢组织中的表达差异,并分析GPR27蛋白表达与卵巢癌患者临床病理特征之间的关系;通过χ^(2)检验、COX风险回归分析筛选影响卵巢癌患者总生存期的独立危险因素,并采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。在Kaplan-Meier plotter,GEPIA在线数据库中检索GPR27对卵巢癌患者生存期的影响。Coexpedia数据库筛选GPR27基因的共表达基因,并将其在WebGestalt中进行富集分析,了解其可能涉及的分子通路;在肿瘤免疫评估资源数据库(tumor immune estimation resource,TIMER)中分析GPR27基因在卵巢癌组织中的表达与肿瘤微环境中的6种免疫细胞的相互关系。结果GPR27基因在卵巢癌组织中呈现高表达,与正常卵巢组织中表达差异具有统计学意义(P<0.05),且GPR27的表达水平与卵巢癌FIGO分期、残留病灶是否达R0、有无腹水相关(P<0.05)。进一步COX风险回归模型分析显示,GPR27高表达是卵巢癌总生存的独立危险因素(P<0.05)。GPR27基因的共表达基因有PROK2、EIF4E3、NFE2L3、A1CF和FUT6,并富集于多种细胞基本生物学功能的通路上。利用TIMER分析得出GPR27基因与卵巢癌中中性粒细胞、巨噬细胞和树突状细胞的浸润情况呈显著负相关(P<0.05)。结论GPR27基因在卵巢癌组织中高表达,其可能通过破坏肿瘤微环境中免疫细胞的浸润影响患者预后。

自噬基因Beclin 1 shRNA表达质粒的构建及其对宫颈癌细胞HeLa生长的作用

目的构建自噬基因Beclin 1小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,探讨Beclin 1抑制后对宫颈癌HeLa细胞生长的作用。方法根据人Beclin 1 mRNA编码序列,设计RNA干扰靶点,构建Beclin 1 shRNA表达质粒,脂质体法转染人宫颈癌HeLa细胞,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot检测其对HeLa细胞自噬基因Beclin 1 mRNA及蛋白表达的影响。MTT法分析其对细胞增殖、流式细胞仪检测其对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果构建的shRNA表达载体可以使HeLa细胞中自噬基因Beclin 1的mRNA及其蛋白含量降低,转染质粒的细胞生长增殖速度加快,凋亡率降低。结论成功构建了针对自噬基因Beclin 1的shRNA表达载体,通过转染HeLa细胞,可有效抑制细胞中Beclin 1的表达,并促进细胞生长,抑制凋亡。

内质网应激-自噬反应在顺铂诱导宫颈癌HeLa细胞死亡中的作用

目的研究内质网应激-自噬反应在顺铂诱导宫颈癌HeLa细胞死亡中的作用,以及自噬基因Beclin 1对HeLa细胞顺铂敏感性的影响。方法不同浓度顺铂作用HeLa细胞后,丹磺酰戊二胺染色法观察细胞中自噬体的形成,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin 1和LC3的表达及内质网应激相关蛋白IRE1、PERK和ATF6的表达。将自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Beclin1转染HeLa细胞,Western blot检测Beclin 1在HeLa细胞中的蛋白表达,噻唑蓝比色(MTT)法检测顺铂对HeLa细胞半数抑制浓度(IC50)的变化,流式细胞仪检测凋亡细胞的百分率。结果顺铂作用HeLa细胞后,细胞内自噬体形成增加,自噬蛋白Beclin 1和LC3表达增加,且均呈现时间依赖性(P<0.05),内质网应激相关蛋白IRE1、PERK和ATF6的表达增强。pcDNA3.1(+)-Beclin1转染HeLa后,Beclin 1蛋白表达增加(P<0.05);MTT检测IC50由转染前的1.0μg/ml下降到0.5μg/ml;凋亡细胞百分率升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论内质网应激-自噬反应参与了顺铂对宫颈癌HeLa细胞的细胞毒性作用,自噬基因Beclin 1过表达能够增加HeLa细胞对顺铂的敏感性。

自噬基因Beclin1抑制宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的研究

目的:研究自噬基因Beclin1对裸鼠宫颈癌细胞株HeLa移植瘤的抑制作用。方法:将自噬基因Beclin1真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Beclin1经脂质体包裹后转染人宫颈癌HeLa细胞,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Westernblot检测其mRNA及蛋白水平的表达,MTT法检测细胞生长抑制率;将HeLa细胞接种于裸鼠右前肢腋下建立裸鼠人宫颈癌移植瘤模型,待瘤结节直径≥5mm后,分别以重组质粒pcDNA3.1(+)-Bec-lin1、pcDNA3.1(+)和生理盐水200μl每两天1次直接瘤内注射,连用3周后,测量3组肿瘤大小并观察肿瘤组织形态学改变。结果:pcDNA3.1(+)-Beclin1能使HeLa中Bec-lin1mRNA及蛋白表达增加(P<0.05),并显著抑制HeLa细胞的生长,呈现时间依赖性,与其余两组相比,有显著统计学差异(P<0.05);经重组质粒治疗21天后,裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,相对于对照组瘤体明显缩小、瘤重明显减轻(P<0.05),病理检查可见,pcD-NA3.1(+)-Beclin1处理组瘤块内细胞坏死减少,结缔组织增生,而对照组中癌细胞分布呈弥漫性。结论:自噬基因Beclin1可以抑制HeLa移植瘤的生长。

自噬基因Beclin1在宫颈鳞癌中的表达及其与HPV感染的关系

目的探讨自噬基因Beclin1在宫颈鳞癌中的蛋白表达以及对人乳头状瘤病毒(HPV)16E6、E7感染的影响。方法采用免疫组化SP法检测81例宫颈鳞癌、20例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)Ⅱ-Ⅲ级和20例正常宫颈组织中自噬基因Bec-lin1的表达,采用PCR扩增法检测宫颈鳞癌组织中HPV16E6、E7的DNA状况。结果宫颈鳞癌组织中Beclin1阴性、弱阳性、强阳性表达率依次是43.2%(35/81),34.6%(28/81),22.2%(18/81),分别与正常宫颈组15.0%(3/20)、30.0%(6/20)、55.0%(11/20)和宫颈上皮内瘤样病变组20.0%(4/20)、30.0%(6/20)、50.0%(10/20)相比,Beclin1在宫颈鳞癌中的表达存在显著下调(P=0.009,P=0.033)。HPV16E6、E7在宫颈鳞癌中的阳性率分别为66.7%和58.0%,HPV16E6、E7感染与宫颈鳞癌中Beclin1蛋白的表达无相关性(r=-0.126,P=0.262;r=-0.125,P=0.270)。结论自噬基因Beclin1在宫颈鳞癌中表达下调,其表达对HPV16E6、E7感染无明显影响。

自噬基因Beclin 1 shRNA表达质粒的构建及其下调凋亡因子caspase-9效应的研究

构建自噬基因Beclin 1的小发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,脂质体包裹后体外转染人宫颈癌HeLa细胞株,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot检测其对HeLa细胞自噬基因Beclin 1 mRNA及蛋白表达的影响,并检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡情况以及凋亡因子caspase-9 mRNA及蛋白表达的变化。结果表明shRNA真核表达载体可以使HeLa细胞中自噬基因Beclin 1的mRNA及其蛋白含量降低,转染后细胞生长增殖速度加快,凋亡率降低,并伴有caspase-9 mRNA及蛋白量的显著下调。因此,Beclin 1不仅与自噬调控通路有关,而且可以调控凋亡的发生,同时参与两种程序性细胞死亡的过程。

HPV16基因联合细胞角蛋白对宫颈鳞癌淋巴结微转移检测的意义

目的探讨高危型人类乳头状瘤病毒16(HPV16)和细胞角蛋白(cyto keratin,CK)对宫颈鳞癌淋巴结微转移的诊断价值。方法以HPV16 E6/E7特异引物通过PCR方法,检测81例宫颈鳞癌组织及435枚盆腔淋巴结中HPV16DNA;采用免疫组化SP法检测上述组织中CK的表达。结果①宫颈鳞癌组织中HPV16的检出率为62.96%(51/81);CK的表达率为100%(81/81)。②HE染色有转移的淋巴结中,HPV16阳性检出率为90.38%(47/52),CK阳性表达率为100%(52/52);HE染色无转移的淋巴结中,HPV16阳性检出率为11.75%(45/383),CK阳性表达率为7.05%(27/383)。③盆腔淋巴结中HPV16存在和CK表达与患者的FIGO分期、年龄、宫颈肌层浸润深度、宫颈肿瘤大小、大体类型、肿瘤分化程度等临床病理特征均无相关性(P>0.05)。结论宫颈鳞癌中HE染色无转移的淋巴结内存在HPV16基因和CK阳性表达可以提示淋巴结微转移。

自噬基因Beclin 1对宫颈癌HeLa细胞顺铂敏感性的影响

目的:研究自噬基因Beclin 1对宫颈癌细胞株HeLa顺铂敏感性的影响并探讨可能的机制。方法:将自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Beclin1经脂质体包裹后转染人宫颈癌HeLa细胞。荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot分别检测Beclin 1及凋亡因子caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测顺铂对HeLa细胞的半数抑制浓度(IC50),Hoechest染色检测细胞凋亡。结果:pcDNA3.1(+)-Beclin1转染HeLa后,Beclin 1 mRNA和蛋白相对表达增加(P<0.05),caspase-3 mRNA和蛋白相对表达增加(P<0.05),顺铂对HeLa细胞的IC50由1.0μg/ml降至0.5μg/ml,HeLa细胞凋亡指数为(15.33±3.52)%,显著高于pcDNA3.1(+)组和未转染质粒组(P<0.05)。结论:自噬基因Beclin 1可以通过促进细胞凋亡提高宫颈癌HeLa细胞对顺铂的敏感性。

前哨淋巴结与宫颈癌

前哨淋巴结是原发肿瘤区域淋巴引流的第一站,是最早发生肿瘤转移的部位。前哨淋巴结定位有染料法、核素法、联合法3种方法,对前哨淋巴结进行病理连续切片和免疫组织化学染色提高了微小转移灶的检出率,进而能有效判断淋巴结的转移情况。前哨淋巴结在宫颈癌的应用尚处在起步阶段。

自噬与肿瘤

自噬(autophagy)作为程序性细胞死亡的另一种形式近来备受关注,自噬具有独特的形态学改变和特有的调控通路,是正常细胞的功能,自噬异常与肿瘤的发生、发展有关,可从多个层面影响肿瘤的进程,包括细胞周期、凋亡相关因子、血管生成及肿瘤治疗等。凋亡与自噬之间既相互区别又密切联系。自噬不仅揭示了生物自身调控的复杂性和多样性,同时随着自噬与肿瘤之间关系的逐步建立,也为肿瘤基因治疗及克服肿瘤耐药性的研究提供了新的靶点。

自噬在顺铂致宫颈癌Hela细胞死亡中的作用

目的:研究自噬在顺铂致宫颈癌Hela细胞死亡中的作用,以及自噬基因Beclin 1对Hela细胞顺铂敏感性的影响。方法:不同浓度顺铂作用Hela细胞后,丹磺酰戊二胺(MDC)法观察细胞中自噬体的形成,蛋白质印迹法(Western blot)检测自噬基因Beclin 1和LC3蛋白的表达;将自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Beclin1转染Hela细胞,Western blot检测Beclin 1在Hela细胞中的蛋白表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测顺铂对Hela半数抑制浓度(IC50)的变化,流式细胞仪检测自噬细胞与凋亡细胞的百分率。结果:顺铂作用Hela细胞后,细胞内自噬体形成增加,自噬蛋白Beclin 1和LC3表达增加,且均呈现浓度依赖性(P<0.05);pcDNA3.1(+)-Beclin 1转染Hela细胞后,Beclin 1蛋白表达增加(P<0.05),MTT检测IC50由转染前的1.0 mg/L下降到0.5 mg/L,凋亡细胞百分率和自噬细胞百分率均升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:自噬参与了顺铂对宫颈癌Hela细胞的细胞毒性作用,自噬基因Beclin 1过表达能够增加Hela细胞对顺铂的敏感性。

自噬基因Beclin1与上皮性卵巢癌发生、发展的相关性研究

背景与目的:有研究表明自噬的抑制与肿瘤的发生有关,沉默自噬基因Beclin1可导致多种恶性肿瘤的发生。本研究探讨Beclin1基因在上皮性卵巢癌发生、发展中的作用,并分析其过表达对人卵巢癌细胞株SKOV3体外生长的影响。方法:用免疫组化检测25例正常卵巢组织、25例良性上皮性卵巢肿瘤、19例交界性上皮性卵巢肿瘤及69例上皮性卵巢癌组织的Beclin1表达;构建真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,脂质体法分别将质粒pcDNA3.1/Beclin1、pcDNA3.1转染人卵巢癌细胞株SKOV3,用MTT法分析外源性Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,并用流式细胞仪检测凋亡情况。结果:正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤组织中Beclin1表达的积分光密度(integrated optical density,IOD)值均较高,两者之间的差异无显著性(P>0.05);交界性卵巢肿瘤组织中Beclin1的表达降低,而在上皮性卵巢癌中Beclin1表达的IOD值最低,与正常卵巢组织比较差异有显著性(P<0.05)。pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后细胞生长抑制率为(68.75±5.10)%,而pcDNA3.1转染组为(10.91±4.20)%,两者之间差异有显著性(P<0.05)。pcDNA3.1/Beclin1转染后72h SKOV3细胞的凋亡率为19.07%,高于pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有显著性(P<0.05)。结论:Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达下调,可能与上皮性卵巢癌的发生、发展有关;自噬基因Beclin1的过表达可抑制人卵巢癌细胞SKOV3的增殖,并诱导其凋亡。

自噬基因Beclin1对上皮性卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用

目的观察自噬基因Beclin1在人卵巢癌细胞株SKOV3中过表达对肿瘤细胞在体内、体外生长活性的影响。方法脂质体法将重组质粒pcDNA3.1/Beclin1转染人卵巢癌细胞株SKOV3,MTT法分析外源性Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,流式细胞仪检测转染后肿瘤细胞的凋亡及自噬情况。将重组质粒pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后,接种到裸鼠皮下,观察体内致瘤活性及生长情况;免疫组化检测瘤组织Beclin1蛋白的表达。结果Beclin1在SKOV3中的过表达后抑制肿瘤细胞在体外的生长,抑制率为58.68%;pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3的凋亡率为(21.26±3.89)%,高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有显著性(P<0.05);流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞MDC平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组。重组质粒pcDNA3.1/Beclin1使SKOV3细胞在裸鼠体内成瘤时间延长,瘤体体积及质量明显小于空质粒组和空白对照组,抑瘤率为50.27%。结论自噬基因Beclin1在人卵巢癌细胞SKOV3中过表达可抑制SKOV3在体内、体外的增殖,针对自噬基因Beclin1的卵巢癌基因治疗可能具有可行性。

上皮性卵巢癌中自噬基因Beclin 1的表达及其调控相关信号传导途径的研究

目的研究自噬基因Begin1及其调控相关信号传导途径磷酸肌醇-3激酶／蛋白激酶B（P13K／PKB）与上皮性卵巢癌发生发展之间的关系。方法用免疫组化的方法对25例正常卵巢组织、25例良性上皮性卵巢肿瘤、19例交界性上皮性卵巢肿瘤及69例上皮性卵巢癌组织进行Beclin1、ClassⅠP13K（p110α）、ClassⅡP13K（hvps34）及其下游的磷酸化PKB（p-PKB）的表达水平进行检测。结果Beclin1、hvps34在正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤组织中表达较高，在交界性卵巢肿瘤组织中开始下降，在上皮性卵巢癌中的表达最低（P＜0．05）；p110a、P-PKB在交界性卵巢肿瘤组织中开始升高，在上皮性卵巢癌中的表达高于其它3组（P＜0．05）。卵巢癌Ⅰ～Ⅱ期、高中分化、淋巴结无转移的卵巢肿瘤组织中Beclin1的表达分别高于Ⅲ～Ⅳ期、低分化、淋巴结有转移者（P＜0．05），而p110α及P—PKB的表达则分别降低（P＜0．05）。结论自噬基因Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达下词，对自噬起调控作用的P13K／PKB信号通路中的成分p110α、hvps34、P—PKB存在表达异常，可能与上皮性卵巢癌的发生、发展及临床预后有关。

促性腺激素释放激素类似物对卵巢肿瘤化疗患者卵巢功能的保护作用

卵巢肿瘤已成为严重威胁妇女生命和健康的主要疾病,虽然化疗药物的应用使得各种肿瘤治愈率得到提高,但其所带来的并发症也令众多临床医师不可小觑。其中,以卵巢生殖细胞肿瘤尤甚,青春期前患者可占60%~90%。然而,在女性生殖系统中,卵巢对化疗药物最敏感,长期大剂量的化疗会破坏卵巢组织,引起卵巢功能障碍,使得女性患者出现卵巢早衰（premature overy failure,POF）,

宫颈癌中HPV16E6蛋白诱导内质网应激-自噬反应的研究

目的:研究宫颈癌C33A细胞中HPV16 E6蛋白过表达对内质网应激-自噬反应的影响。方法:构建HPV16 E6的真核表达载体pc DNA3.1(-)-HPV16 E6,转染C33A细胞[pc DNA3.1(-)-HPV16 E6组],同时设空载体转染组[pc DNA3.1(-)组]和空白对照组(C33A组),荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测其C33A细胞中HPV16 E6 m RNA及蛋白表达的变化,及其对自噬蛋白Beclin 1、LC3Ⅱ、内质网应激标记蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长的变化;流式细胞仪检测细胞自噬的变化。结果:成功构建了HPV16 E6的真核表达载体pc DNA3.1(-)-HPV16 E6,其可以使C33A细胞中HPV16 E6 m RNA及蛋白表达增加;HPV16 E6在C33A中过表达可促进肿瘤细胞的生长,pc DNA3.1(-)-HPV16 E6转染后C33A的自噬率较pc DNA3.1(-)组和C33A组增高,差异有统计学意义(P<0.05);HPV16 E6过表达使Beclin 1、LC3Ⅱ和GRP78蛋白表达增加,阻断内质网应激通路后GRP78表达减少,细胞自噬率降低。结论:内质网应激-自噬反应在HPV16感染导致宫颈癌的过程中具有重要作用,这为宫颈癌的基因治疗提供了新靶点。