一种可检测细胞 凋亡多项指标的样品处理

目的：建立一种更为简便，可同时用ＤＮＡ电泳、流式的细胞仪，免疫组化分析检测细胞凋亡多项指标的样品处理方法。方法：用７５％乙醇预固定样品后，经柠檬酸缓冲液抽取凋亡细胞内降解的小分子量ＤＮＡ，而保持细胞形态完整，细胞的抗原，大分子ＤＮＡ完好，进而可用于流式细胞仪和免疫组化分析。结果：将柠檬酸抽提液用于琼脂糖电泳，出现典型的“ＤＮＡ梯形”图谱。其敏感性达２×１０６个细胞检出７．６％凋亡率。而标本可贮存５周之久。结论：本方法为对同一标本进行多种指标的同步分析提供了可能性。

急性非淋巴细胞性白血病免疫球蛋白和T细胞受体基因重排的研究及其意义

采用PCR法对25例不同时期急性非淋巴细胞性白血病（ANLL）患者免疫球蛋白重链（IgH）和T细胞受体γ链（TcRr）基因重排进行了研究。结果显示，3例（12．0％）发生IgH基因重排，3例（12．0％）出现TcRr基因重排，其中1例同时出现IgH和TcRr基因重排，对这种ANLL中序列失真现象的机制及其在白血病基因分型及检测微小残留疾病中的意义进行讨论。

人恶性淋巴瘤细胞系p53,p16与bcl-2/JH基因的研究

抑癌基因p53,p16的缺失和突变以及癌基因bcl-2/JH融合基因的出现是恶性淋巴瘤发生的分子生物学原因,p53和p16基因亦是诱导淋巴瘤细胞凋亡的重要基因,而bcl-2基因是抑制淋巴瘤细胞凋亡的重要基因。为研究这3种基因结构的变化,用PCR和PCR-SSCP,以及PCR扩增产物序列测定的方法测定了人9种恶性淋巴瘤细胞系,发现SU-DHL-1,SU-DHL-4,SU-DHL-6,SU-DHL-8,SU-DHL-10,Daudi,8392 7种恶性淋巴瘤细胞系有p53基因的点突变,分别在第五、六、七外显子;SU-DHL-9有p16基因的纯合缺失,而SU-DHL-1和Daudi细胞系有p16基因的第二外显子的突变,SU-DHL-1的测序结果为密码子30的GAC突变为AAC,密码子35的GCT突变为ACT,密码子40与41之间插入了一个C;SU-DHL-4和SU-DHL-6有bcl-2/JH基因的重排,讨论了基因结构的变化在恶性淋巴瘤细胞系发生发展中的意义。

联用重组的IL-3、GM-CSF对阿糖胞苷诱导的HL-60细胞凋亡的影响

为研究在阿糖胞苷（Ara－C）的作用下，基因重组的人白细胞介素3（rh－IL－3）、粒单祖细胞集落刺激因子（rh－GM－CSF）对白血病细胞凋亡的影响，选用了HL－60白血病细胞系，采用DNA电泳、流式细胞仪检测、单克隆抗体C－myc、bcl－2抗原表达的分析以及白血病细胞集落的培养观察方法，观察了0～36h8个不同时相凋亡率与其他指标的变化，表明Ara－C凋亡的作用随药物孵育时间的延长而逐渐增强，凋亡率从0h的1．5％升至36h后的36．4％，而IL－3和GM－CSF能使这种作用明显提高，使凋亡率从7．6％升至19．6％，并能增强Ara－C对白血病细胞的杀灭，引起HL－60细胞C－myc抗原表达下降，而bcl－2抗原表达变化不大，同时发现这两种细胞因子对正常造血细胞影响较小，这为临床上白血病诱导缓解期联用rh－IL－3、rh－GM－CSF和细胞毒药物，提高缓解率，提供了理论依据。

抗人T细胞单克隆抗体与商陆毒蛋白结合物的制备及其抗白血病细胞活性

将美洲商陆抗病毒蛋白通过二硫键与抗人T细胞单克隆抗体Wu71偶联制备免疫毒素。结合物经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫双扩散和间接荧光检测,表明该结合物对人T淋巴细胞白血病CEM细胞显示很强的杀伤作用,在10^(-9)mol/L浓度下可杀灭76.4%的靶细胞,而对抗原阴性的SP_2/O细胞杀灭作用很弱。^(14)C-亮氨酸掺入蛋白质合成抑制试验显示结合物在10^(-9)mol/L时可抑制72.4%的蛋白质合成。这一免疫毒素有可能用于白血病自体骨髓移植时白血病细胞的体外清除。

白血病、淋巴瘤分子生物学的研究及其意义

白血病、淋巴瘤分子生物学的研究及其意义陈燕，王辨明同济医科大学协和医院（汉口４３００２２）近年来分子生物学技术已广泛运用于血液学领域，在血液系统肿瘤的发病机理、临床诊断、疾病演变、治疗及预后方面显示愈来愈重要的作用。分子生物学的研究技术很多，在基因研...

极限稀释法的原理及其在造血细胞培养中的运用

长期以来,造血细胞体外培养计算克隆的方法一直沿用半固体法。由于支持物琼脂、甲基纤维素粘附于细胞表面,对于进一步采用电镜、染色体、同位素和单克隆抗体等分析带来很大困难,.且克隆计数由于35mm培养皿面积较大,人为误差很多。有无更好的方法?万景华等在此方面做了开创性工作,我们则在万氏的基础上加以发展,首先运用于多向祖细胞(CFU—Mix)的培养和白血病克隆形我的研究. 基本原理和计算公式在同一条件下,重复做几次独立试验,每次有两个对立的结果,事件A发生或不发生。根据这一基本原理设计了极限稀释法。

造血细胞体外培养在骨髓增生异常综合征中的应用及意义

骨髓增生异常综合征(MDS)是一组变异性较大的克隆性造血系统疾病,多死于感染和出血等并发症或转化为急性白血病,病程长短不一.随着造血祖细胞体外培养体系的发展和方法上的改进,为探讨包括MDS在内的各种造血异常性疾病的发病机理提供了一种十分有用的手段.MDS造血祖细胞体外培养研究概况1.粒单祖细胞的异常生长:对MDS造血细胞体外培养研究最多的是粒单祖细胞(CFU-GM),其结果在总体上是相似的.大多数MDS患者,CFU-GM的生长与正常造血细胞相比有明显的异常,只是各家报道这些异常出现的频率和严重程度不同而已.主要包括CFU-GM形成率减少或缺乏。

人急性髓系白血病细胞的无血清培养现况

本文比较了几种人急性髓系白血病细胞无血清培养(SFC)体系的组成,说明了体系中各血清替代物的作用。在SFC 中所形成的集落表明,人急性髓系白血病细胞呈现自发性生长、刺激因子依赖性生长及不生长等细胞群体异质性。同时对比了在有血清培养(SCC)体系中的生长,指出SFC 中,去除粘附细胞和T 淋巴细胞的必要性。

联合诱导分化方案治疗急非淋白血病的疗效分析和实验研究

本文应用阿克拉霉素或三尖杉酯碱和全反式维甲酸联合诱导分化33例急非淋白血病细胞原代培养后的结果显示:1.细胞形态趋向成熟,其胞浆内可见到Auer小体,且经组化染色证实;2.硝基兰四氮唑还原率和溶菌酶含量显著增高(P<0.01);3.表面抗原的转铁蛋白受体均转为阴性。14例急非淋患者联合诱导分化治疗结果的有效率为85.7%,其中完全缓解8例,部份缓解4例和未缓解2例。无DIC等副反应发生。

非霍奇金淋巴瘤bcl-2/IgH基因重排及微小残留病变的检测

探索bcl-2基因重排在非霍奇金淋巴瘤(NFIL)的发生及演变中的作用，以bcl-2／IgH重排为克隆标志，建立敏感的检测淋巴瘤微小残留病变的方法。用多聚酶链反应(PCR)检测bcl-2／IgH基因重排，用系列稀释试验检测该方法的灵敏度。经检测9种恶性淋巴瘤细胞系中Su-DHL-4和Su-DHL-6有bcl-2／IgH基因重排，用系列稀释试验检测该方法的灵敏度为1：10^5。29倒NHL，石蜡包埋的组织标本中，共检出6饲有bcl-2基因重排，其中滤泡型NHL(F-NHL)4例(36．4％)，弥漫型NHL(D-NHL)2例(18．2％)，全部在B细胞性NHL中检出。16例F—NHL患者中，4例外周血和骨髓中同时检出bcl-2(MBR)／IgH基因重排，化疗达CR后依然存在。结论提示，bcl-2基因重排主要与低度恶性的B细胞性淋巴瘤有关，重排方式以bcl-2(MBR)／IgH为主。bcl-2基因重排的检测为对滤泡性淋巴瘤微小残留病变的检测提供了一个快速、敏感、特异的方法，对该疾病的分期、疗效和预后的评估有一定的临床价值。

一种用于免疫组织化学检验的骨髓活检标本保存的新方法(英文)

为进行骨髓活检标本免疫组织化学检验,研究了冰冻置换低温塑料包埋技术处理骨髓活检标本的新方法。结果表明:此技术能良好地保持骨髓组织细胞形态,各种血液细胞抗原成分,尤其是敏感的淋巴细胞抗原保存良好,定位准确,没有弥散,没有背景染色。此方法适用于骨髓活检标本塑料切片的免疫组织化学检验,另外,也可用于处理其它穿刺和内镜活检标本的处理。

白血病患者多向造血祖细胞培养后的透射电镜观察

本文运用透射电镜证明,所运用的极限稀释多向造血祖细胞(CFu—Mix)微量培养体系是体外研究造血细胞分化的重要方法。在加入一系列生长因子后,正常人骨髓细胞可向红、粒、巨核细胞系方向分化,而白血病细胞却不能,其集落细胞仍带有明显的白血病性质,提示白血病可能为多向造血祖细胞阶段的恶性变。

fas/apo-1、bcl-2蛋白在急性髓系白血病细胞的表达特点及意义

用免疫印迹（Western blot）、碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法（APAAP）分析19例急性髓系白血病（AML）骨髓细胞fas/apo-1、bcl-2蛋白表达水平的变化。结果表明绝大部分AML骨髓过表达bcl-2蛋白,部分病例表达fas/apo-1,两者表达呈一定的负相关性。分析结果显示bcl-2蛋白过表达所致的凋亡抑制状态是化疗耐药的主要机制之一,而fas/apo-1的表达是预后较好的特征。

三种单抗偶联PAP-S制备的免疫毒素对人白血病T淋巴细胞的细胞毒性作用

混合应用3种抗人T细胞单克隆抗体与美洲商陆抗病毒蛋白(PAP-S)制备免疫毒素进行体外实验。这些免疫毒素均对人类T淋巴细胞具特异性杀灭作用。在浓度为10^(-9)mol/L时,3种免疫毒素混合可杀灭94.5％的自血病T细胞系CEM细胞而不致严重影响骨髓造血细胞功能。这些免疫毒素有可能用于白血病细胞的体外杀灭及白血病异体骨髓移植时T细胞的清除,以避免移植物抗宿主反应的发生。

支持人AML-CFU克隆生长的SFC体系的实验研究

本文报道了一适宜人类急性髓系白血病祖细胞(AML-CFU)良好克隆性生长的无血清培养(SFC)体系。采用正交设计,得出主要血清替代物牛血清白蛋白(BSA)、饱和人转铁蛋白(STf)、胆固醇(Chol)、牛胰岛素(Ins)和牛氯化血红素(Hem)浓度依次为0.6％、2×10^(-6)M、2.8μg/ml、15μg/ml和0.06mM。重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白介素3(rhIL-3)在SFC体系中的种植率分别为0.776±0.621％和0.574±0.510％((?)±s％),与有血清培养(SCC)体系中的种植率无显著性差异(n=14,P>0.05)。

干细胞因子及其作用

干细胞因子(SCF)是SI 基因编码的c-kit 受体的配体。SCF 为一多系刺激因子,与若干造血细胞生长因子具有协同作用,使集落数目增多、体积增大.急性髓系白血病(AML)细胞对SCF 刺激均产生反应,而不同的AML 细胞系对SCF 的反应性各异。

人恶性淋巴瘤细胞系P53,P16,Bcl—2/JH基因的研究(英文)

抑癌基因P53,P16的缺失和突变以及Bcl-2/JH融合基因的出现是恶性淋巴瘤发生的分子生物学病因,P53和P16基因亦是诱导淋巴瘤细胞凋亡的重要基因,而Bcl-2基因是抑制淋巴瘤细胞凋亡的重要基因,为研究这三种基因结构的变化,用PCR-SSCP,以及PCR扩增产物序列测定的方法测定了人九种恶性淋巴瘤细胞系,发现SU-DLH-1,SU-DHL-4,SU-DHL-6,SU-DHL-8,SU-DHL-10,8392六种恶性淋巴瘤细胞系有P53基因的点突变,分别在5,6,7外显子;SU-DHL-9有P16基因的纯合缺失,而SU-DHL-1和Daudi细胞系有P16基因的第2外显子的突变,SU-DHL-1的测序结果为密码子30的GAC突变为AAC,密码子35的GCT突变为ACT,密码子40与41之间插人了一个C:SU-DHL-4和SU-DHL-6出现Bcl2-2/JH基因,讨论了基因结构的变化在恶性淋巴瘤细胞系发生,发展中的意义.

集落刺激因子与白血病细胞生长和发育的关系

本文主要对白细胞介素3、粒巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞集落刺激因子和巨噬细胞集落刺激因子对急性髓细胞白血病细胞增殖、分化、克隆形成以及自我更新能力的影响作一综述。

近年来骨髓增生异常综合征发病机理的研究进展

骨髓增生异常综合征(MDS)是一组异质性造血组织干细胞性疾病。不同的致病因素所引起的基因改变使造血细胞分化和增殖调控失常,异常克隆扩增不依赖于正常的造血细胞生长因子,并对抑制因素不敏感,因此正常的造血细胞受抑,一系或多系骨髓造血细胞成熟障碍,并可发展为白血病。近几年来有关MDS发病机理方面的研究不断深入,本文试图从不同的研究水平对此作一简介。