卤米松、黄芩提取物联合用药对白癜风小鼠模型的影响

目的探讨卤米松、黄芩提取物联合用药对莫诺苯宗(monobenzone)诱导的白癜风小鼠模型发生发展的影响。方法应用40%莫诺苯宗乳膏诱导C57BL/6小鼠脱色,建立白癜风小鼠模型;研究卤米松(halometasone)联合黄芩提取物(scutellaria baicalensis georgi)用药对白癜风小鼠的脱色作用;通过肉眼观察小鼠的毛发脱色,反射共聚焦显微镜(reflectance confocal microscopy,RCM)观察皮肤的黑色素和黑素细胞,免疫荧光检测CD8+T细胞,酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定血清中白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的含量。结果模型组小鼠在用药部位及非用药部位有毛发脱色现象。黄芩组疗效不明显,卤米松组和卤米松联合黄芩组小鼠脱色减少,包括其发生率、出现时间和面积评分较模型组低;且局部CD8+T细胞浸润减少;卤米松联合黄芩组小鼠血清中IL-6、TNF-α的含量减少明显。结论卤米松、黄芩提取物联合用药对白癜风小鼠有一定的作用,且效果优于单独使用卤米松组和黄芩组,可为临床白癜风的治疗提供参考。

黄芩苷对白癜风小鼠模型的作用机制研究

目的:探讨黄芩苷对莫诺苯宗诱导的白癜风小鼠模型发生发展的影响及其机制。方法:C57BL/6小鼠共40只分为4组,即阴性对照组、模型组、卤米松组及5%黄芩苷组,每组10只。应用40%莫诺苯宗乳膏诱导C57BL/6小鼠脱色,建立白癜风小鼠模型;进行5%黄芩苷对白癜风小鼠的疗效观察及其机制研究等;连续给药50 d,通过肉眼观察小鼠的毛发脱色,反射共聚焦显微镜(RCM)观察皮肤的黑色素和黑素细胞,免疫荧光检测CD_8^+T细胞。选取与白癜风相关的5个基因(CXCL9,CXCL10,CXCR3,RAB27A,PI3K)进行荧光实时定量PCR检测。结果:模型组小鼠在用药部位及非用药部位有毛发脱色现象。卤米松组和5%黄芩苷组小鼠脱色减少,较模型组发生率明显降低、脱色出现时间明显延迟,脱色面积减小,且局部淋巴细胞和CD_8^+T细胞浸润较模型组明显减少。荧光实时定量PCR检测提示卤米松组和5%黄芩苷组CXCL9、CXCL10、CXCR3和RAB27A表达较模型组明显降低,而PI3K则升高明显。卤米松组和5%黄芩苷组之间无明显差异,但卤米松组用药30 d后,用药部位出现皮肤萎缩等不良反应。结论:卤米松组和5%黄芩苷组均具有治疗效果,黄芩苷组更安全有效,可为临床白癜风的治疗提供参考。

核骨架结合元件功能研究的进展

细胞核骨架结合元件（ｎｕｃｌｅａｒｓｃａｆｏｌｄ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｒｅｇｉｏｎ，ＳＡＲ）或称核基质结合元件（ｎｕｃｌｅａｒｍａｔｒｉｘ－ａｔｔａｃｈｍｅｎｔｒｅｇｉｏｎ，ＭＡＲ），是８０年代发现的一个新的ＤＮＡ元件。到９０年代初，由于发现ＳＡＲ／...

黄芩苷对H_2O_2氧化损伤人黑素细胞的保护机制研究

目的:探讨黄芩苷对H_2O_2氧化损伤正常人黑素细胞的保护作用及其机制研究。方法:构建H_2O_2氧化损伤黑素细胞模型,通过观察不同浓度的黄芩苷处理H_2O_2氧化损伤正常人黑素细胞,采用倒置显微镜观察黄芩苷对黑素细胞形态的影响;cell counting kit-8(CCK-8)法检测黄芩苷对黑素细胞增殖活力作用;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测黄芩苷对黑素细胞LDH表达的影响,并通过流式细胞仪检测活性氧(ROS)水平,荧光实时定量RT-PCR检测过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶1(peroxidase 1,GPX1)m RNA表达情况,通过ELISA试剂盒检测黄芩苷和H_2O_2处理黑素细胞后分泌的热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)。结果:镜下观察黄芩苷给药后细胞较对照组形态明显改变,细胞数增多;黄芩苷作用黑素细胞后增殖率较对照组升高(P<0.05);黄芩苷明显抑制黑素细胞中LDH表达,呈剂量-效应关系(P<0.05)。黄芩苷能显著促进CAT和GPX1m RNA表达,且明显抑制HSP70分泌。结论:黄芩苷对H_2O_2氧化损伤的正常人黑素细胞具有明显保护作用,可为临床白癜风的治疗提供参考。

九种植物提取物对鼠永生化黑素细胞抗氧化能力的作用

目的检测枸杞多糖、银杏叶提取物、山茶花提取物、蒺藜提取物、天麻提取物、槲皮素、白藜芦醇、茶多酚、人参皂苷rg2对鼠永生化黑素细胞(B10BR)抗过氧化氢(H2O2)诱导的氧化应激保护作用,并且检测其对酪氨酸酶活性的影响。方法建立过氧化氢损伤模型,分别设空白对照组、H2O2组、药物预处理+H2O2组。MTT法测细胞活性,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平,多巴氧化法测酪氨酸酶活性。结果 H2O2损伤模型中,半致死H2O2浓度是250μmol/L,筛选最佳作用浓度枸杞多糖为8 g/L、银杏叶提取物20μmol/L、山茶花提取物200 mg/L、蒺藜提取物0.2 g/L、天麻提取物0.8 g/L、槲皮素40μmol/L、白藜芦醇0.3μmol/L、茶多酚200 mg/L及人参皂苷50μmol/L,此9种植物提取物对H2O2诱导的黑素细胞损伤都有保护作用,且其降低ROS含量(P<0.01),增强细胞活性(P<0.01)。此外,枸杞多糖、蒺藜提取物、槲皮素、天麻提取物可抑制H2O2造成的酪氨酸酶活性降低(P<0.01)。结论此9种植物提取物均可保护黑素细胞,提高细胞抗氧化活性,而且有些药物能增强酪氨酸酶活性,这可能是其治疗白癜风的部分作用机制。

茶多酚有效成分对淋巴细胞增殖的抑制和抗氧化作用

研究表明，茶多酚具有很强的消除有害自由基、抗衰老等多种药理作用，茶多酚临床治疗白癜风具有较明显的效果，但其各类组分在临床治疗白癜风所发挥的作用还未见报道。

研究五种植物提取对4羟基壬烯醛损伤黑素细胞的保护作用

目的：检测辣椒碱、姜黄素、银杏叶提取物、茶多酚、青石莲提取物对4HNE（4羟基壬烯醛）诱导的人表皮黑素细胞氧化损伤的保护作用,比较5种植物提取物保护4羟基壬烯醛损伤黑素细胞作用的强弱。方法：4HNE损伤黑素细胞,WTS法测细胞活性,流式细胞仪测细胞内活性氧（ROS）水平及细胞凋亡率,ABTS测细胞总的抗氧化能力。结果：50μmol/L 4HNE处理后,细胞活性大约下降至对照组50%~60%（P〈0.05）,筛选最佳作用浓度辣椒碱5μmol/L、姜黄素4μmol/L、银杏叶提取物40μmol/L、茶多酚50μg/m L、青石莲提取物40μg/m L,此5种植物提取物对50μm 4HNE诱导的黑素细胞损伤都有保护作用。其中,增强黑素细胞活性最强的是姜黄素（P〈0.05）、降低细胞内活性氧最强的是茶多酚（P〈0.01）、降低细胞凋亡率最强的是银杏叶（P〈0.05）、提高黑素细胞总的抗氧化能力辣椒碱的作用最强（P〈0.05）。对4羟基壬烯醛损伤黑素细胞的保护作用由强到弱排序：辣椒碱、银杏叶和茶多酚。结论：此5种植物提取物均可保护4HNE损伤的黑素细胞,提高细胞抗氧化活性,增强黑素细胞活性,这可能为其临床治疗白癜风提供理论依据。

复方中药对小鼠B-16黑素瘤细胞株黑素合成和酪氨酸酶的激活作用

目的 研究复方中药对小鼠 B－ 16黑素瘤细胞株细胞增殖、黑素合成的影响，及其对细胞内酪氨酸酶的激活作用。方法 四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法测定中药对细胞增殖的影响；酶学方法研究中药对酪氨酸酶活性的作用； 470 nm比色标准曲线法测定黑素含量。结果 研究发现复方 3号（补肝肾为主）促进黑素细胞增殖和色素合成的能力高于复方 1号（光敏感性药物）或复方 2号（活血化瘀），而酶激活能力复方 1号较为稳定。结论 在白癜风治疗中补肝肾类中药不可忽视。同时也说明影响黑素合成的因素是多方面的，可能不仅仅与酪氨酸酶活性有关。

局部针刺对莫诺苯宗诱导C57BL／6小鼠白癜风样模型的影响

目的探讨外伤对莫诺苯宗诱导白癜风小鼠脱色的影响。方法将40只C57BI）6小鼠随机分为对照组、模型组、针刺组和针刺配合莫诺苯宗组4个组，每组10只。模型组应用40％莫诺苯宗乳膏诱导C57BL／6小鼠脱色，建立白癜风动物模型；针刺配合莫诺苯宗组通过针刺配合40％莫诺苯宗乳膏的方法，研究针刺对小鼠脱色的影响。实验过程中肉眼观察毛发颜色以及共聚焦激光扫描显微镜（RCM）观察皮肤脱色。实验结束后麻醉小鼠，取非用药部位脱色皮肤行组织学检查，HE染色检测淋巴细胞浸润情况，免疫荧光染色检测CD8＋T细胞表达。结果模型组小鼠在用药部位及非用药部位均有不同程度脱色。针刺配合莫诺苯宗组小鼠同样具有以上特点，且其脱色出现时间早，面积大并稳定。实验第65天，模型组和针刺配合莫诺苯宗组用药部位的脱色面积指数分别为3．45±0．17和3．90±0．25，两组比较差异有统计学意义，t=7．433，19〈0．05；非用药部位分别为1．90±0．12和2．85±0．27，两组比较差异有统计学意义，t=7．529，19〈0．05。免疫荧光显示非用药部位脱色区CD8＋T细胞荧光强度模型组为175．528±10．711，针刺配合莫诺苯宗组为645．928±12．652，两者比较差异有统计学意义，t=8．105，P〈0．05。针刺配合莫诺苯宗组在非用药部位脱色斑局部淋巴细胞和CD8’T细胞浸润更明显。结论局部皮肤屏障破坏可以促进莫诺苯宗诱导的白癜风小鼠脱色。

酪氨酸激酶抑制剂帕唑帕尼引起毛发变白一例

患者男，23岁，因头发胡须变白1个月就诊。患者自诉1个月前，部分胡须、头发根部同时变白，无自觉症状。追问病史，2010年6月，因右上颌窦间叶性软骨肉瘤。在全麻下行右上颌骨恶性肿瘤扩大切除 ＋ 右上颌骨全切及生物膜植入术，术后予盐酸吉西他滨针及贝伐珠单抗注射液化疗。

中药对培养小鼠CD8＋细胞毒性T淋巴细胞的影响

目的建立CD8＋细胞毒性T淋巴细胞（CTL）体外增殖模型，筛选免疫抑制性中药。方法制备小鼠脾脏单细胞悬液，通过特异性抗体分离CD8＋T淋巴细胞，CD3／CD28抗体诱导淋巴细胞活化增殖，分别加入23种中药提取物共培养，通过四唑盐MTS法检测各中药对淋巴细胞增殖的抑制效果，对抑制作用最强的4种中药作12．5。400mg／L的浓度梯度分析。酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测这4种中药对CD3／CD28抗体诱导CD8＋T细胞分泌干扰素-γ（IFN-γ）的作用。结果23种中药提取物中，14味中药对淋巴细胞增殖有不同程度抑制，抑制作用最强的前4味分别为黄连、黄芩、木香和姜黄，其对CD8＋T细胞增殖的50％抑制浓度（IC50）分别约为25、35、50和60mg／L，100％抑制的最低浓度分别为200、100、200、200mg／L。黄芩、木香和姜黄在100mg／L的浓度下对CD3／CD28抗体诱导CD8＋T细胞分泌IFN-γ均有明显抑制作用，而黄连对CD8＋T细胞分泌IFN-γ的抑制作用不明显。结论成功建立CD8＋CTL体外增殖模型，并筛选出对小鼠脾脏CD8＋T淋巴细胞增殖具有显著抑制作用的4味中药即黄连、黄芩、木香和姜黄。

Janus酪氨酸激酶及其抑制剂与皮肤病的研究进展

Janus蛋白酪氨酸激酶是一种非受体酪氨酸激酶,参与了许多细胞因子、生长因子的信号传导,在多种细胞分化过程中发挥重要作用,与多种炎症、免疫性及肿瘤性皮肤病有关.Janus蛋白酪氨酸激酶活性的改变既可导致信号通路过度活化,也能出现信号通路失活,两种状态均能导致疾病.Janus蛋白酪氨酸激酶也是研发药物的一个重要靶点.不同的皮肤病会有不同的Janus蛋白酪氨酸激酶的异常活化,针对不同的Janus蛋白酪氨酸激酶而研发的多种抑制剂对多种皮肤病有较好的疗效.

全乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯对氧化应激导致黑素细胞损伤的保护作用研究

目的研究全乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯（AcEGCG）对H20：诱导的人表皮黑素细胞损伤的保护作用，探讨其可能的作用机制。方法体外培养人表皮黑素细胞，采用H20：诱导细胞损伤模型。实验分对照组、H20：组、不同浓度表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）组和AcEGCG组。MTS法测定细胞存活率，LDH测试盒检测乳酸脱氢酶（LDH）的漏出量，流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）的表达水平；Western印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9（caspase-9）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）的表达情况。多个样本均数比较采用单因素方差分析，各样本间多重比较采用SNK—q检验。结果与对照组相比，H20：处理组黑素细胞存活率明显降低（22．99％±0．53％，P〈0．01），细胞内LDH漏出量增加（36．58％±0．73％，P〈0．01），细胞内ROS水平明显升高（19．08±0．57，P〈0．01），caspase-9和caspase-3表达升高（分别为2．65±0．079和2．36±0．057，均P〈0．01）。与H202组相比，细胞存活率在10、20、40μmol／LAcEGCG组（79．50％±3．62％、86．52％±5．13％、97．81％±5．21％）及EGCG组（43．19％±1．68％、63．34％±3．60％、70．82％±2．1％）明显增加（均P〈0．01），caspase-9分别降低为1．44±0．067、1．26±0．059、1．10±0．072及2．31±0．085、2．13±0．091、1．35±0．064，caspase-3分别降低为1．70±0．053、1．57±0．057、1．24±0．068及2．09±0．076、1．98±0．093、1．79±0．056，差异均有统计学意义（P〈0．05）；LDH含量均明显下降（P〈0．01）；40μmol／LAeEGCG或EGCG处理后，ROS含量明显下降（均P〈0．01）。结论AcEGCG对H202诱导的黑素细胞氧化应激损伤有显著的保护作用，且显著优于EGCG，可能通过清除自由基、抗氧化、降低easpase-9及easpase-3表达等途径发挥作用。

卡泊三醇对白癜风黑素细胞和CD8＋细胞毒T细胞的影响

目的探讨卡泊三醇对白癜风患者黑素细胞及皮损周边CD8＋细胞毒T细胞（CD8＋CTL）增殖及其细胞因子分泌的影响。方法实验分黑素细胞组、CD8＋CTL组、黑素细胞与CD8＋CTL共培养组，细胞计数法检测卡泊三醇处理前后细胞数变化情况，ELISA测定卡泊三醇处理前后分泌白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）及干扰素γ（IFN-γ）的变化；细胞计数法检测卡泊三醇处理过的黑素细胞与CD8＋CTL共培养组在添加与不添加抗人IL-6抗体时，黑素细胞及CD8＋CTL数量的变化。筛选10^-8、10^-9mol／L卡泊三醇用于实验。结果在凋亡检测中发现，CD8＋CTL与黑素细胞共培养中黑素细胞有显著凋亡。加卡泊三醇后黑素细胞组的黑素细胞计数与未加药对照组相比，差异无统计学意义（P〉0．05），而黑素细胞与CD8＋CTL共培养组黑素细胞数明显增加（P〈0．05）；CD8＋CTL组和黑素细胞与CD8＋CTL共培养组的CD8＋CTL细胞数也明显增加（P〈0．05）。与黑素细胞和CD8＋CTL单独培养组相比，黑素细胞与CD8＋CTL共培养组分泌的IL-6、IFN-γ和TNF-α显著减少；经104mol／L卡泊三醇处理后的黑素细胞与CD8＋CTL共培养组分泌的IL-6减少更加明显，与未加药组减少率比较，差异有统计学意义（t=2．89，P〈0．05），而IFN-γ和TNF-α在加药前后无明显变化（P〉0．05）。在卡泊三醇处理过的共培养组中添加5mg／L抗IL-6抗体后，黑素细胞显著增加，而CD8＋CTL减少，其差异有统计学意义（t=3．53，P〈0．05；t=3．15，P〈0．05）。结论白癜风皮损处的CD8＋CTL对黑素细胞有一定的特异性杀伤作用，卡泊三醇可以减少炎症细胞因子IL-6的分泌，从而减少CD8＋CTL对黑素细胞的杀伤，可能是卡泊三醇治疗白癜风的机制之一。