IL-17A敲除对帕金森病模型小鼠神经退变及神经炎症的影响

目的:研究白细胞介素(interleukin)-17A对帕金森病(Parkinson′s disease,PD)模型鼠神经退变及神经炎症的影响。方法:IL-17A基因敲除的C57BL/6雄性小鼠通过腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)制备PD模型,注射的第7天取小鼠全脑,用TUNEL试剂盒检测中脑黑质部细胞的凋亡,用免疫组织化学法和Western Blot法检测黑质部小胶质细胞CD11b的表达。结果:IL-17A-/-的PD模型小鼠黑质部位细胞凋亡的数目较野生型PD模型小鼠减少,小胶质细胞的形态改变较轻且CD11b蛋白表达减少。结论:IL-17A基因敲除后减轻了PD模型小鼠的神经退变和神经炎症的变化。

α-突触核蛋白的突变体A53T对小胶质细胞激活的影响

目的:探究重组人的野生型α-突触核蛋白(wild type alpha-Synuclein,WTα-Syn)和重组人的α-突触核蛋白突变体A53T(α-Synuclein mutant A53T,α-Syn A53T)对原代小胶质细胞的影响。方法:无菌培养原代小胶质细胞,细胞静息状态下加药处理,通过免疫荧光染色观察小胶质细胞的形态和Western Blot半定量分析CD11b的变化。结果:高浓度的WTα-Syn可以激活小胶质细胞;CD11b蛋白表达量明显升高;而2μmol/L和5μmol/L的α-Syn A53T均能激活小胶质细胞,CD11b蛋白表达量均升高。结论:相同浓度的WTα-Syn和α-Syn A53T,α-Syn A53T更容易激活小胶质细胞。

Th17细胞对MN9D细胞凋亡的影响

目的:利用多巴胺合成的MN9D细胞株,观察Th17细胞对MN9D细胞凋亡和损伤的影响。方法:免疫磁珠分选获得Th17细胞,经体外活化后,与MN9D细胞株共培养,然后用免疫荧光法检测TH阳性细胞数目;TUNEL和Hoechst染色观察MN9D细胞凋亡及细胞数目的变化;Western Blot法检测MN9D细胞中活化的凋亡酶3(caspase-3)的表达。结果:经体外活化的Th17细胞与MN9D细胞共培养后,MN9D细胞数目显著降低,凋亡率明显增加,且MN9D细胞中促凋亡酶caspase-3的活化水平升高。结论:活化的Th17细胞促进了MN9D细胞的凋亡,具有损伤作用。

Th17细胞对链脲佐菌素诱导MIN6细胞凋亡的影响

目的:探究辅助性Th17(helper T17,Th17)细胞对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导MIN6细胞凋亡的影响。方法:取5~6周龄的C57BL/6雄性小鼠的脾脏,体外诱导分化Th17细胞5 d。取生长状态良好的MIN6细胞,单独使用STZ(2.65 μg/mL)或Th17细胞(1︰1)处理以及用STZ处理MIN6细胞24 h后再与Th17细胞共培养24 h。采用CCK-8试剂盒检测MIN6细胞活力;Hoechst和TUNEL双染检测MIN6细胞凋亡;Western Blot法检测cleaved-caspase-3蛋白表达水平。结果:STZ或Th17细胞单独处理的MIN6细胞,细胞活性降低,细胞凋亡增多,cleaved-caspase-3蛋白表达水平升高;经STZ处理24 h后与Th17共培养的MIN6细胞,较单独处理组而言,细胞活性明显降低,细胞凋亡显著增多,cleaved-caspase-3蛋白表达水平升高明显。结论:STZ和Th17细胞均可诱导MIN6细胞凋亡;Th17细胞可加重STZ诱导的MIN6细胞凋亡。