来源于Reinekea thalattae的褐藻胶裂解酶酶学性质研究

褐藻胶裂解酶可将褐藻胶有效降解为褐藻寡糖(alginate oligosaccharides,AOS),AOS具有良好的物理特性和生理功能,在食品、化妆品和医药等领域有着广泛应用。为高效制备AOS,筛选并鉴定了一种来自Reinekea thalattae的PL-7家族新型褐藻胶裂解酶Reth-aly,将Reth-aly的编码基因克隆并在大肠杆菌BL21中高效表达。在pH 7.5(Tris-HCl缓冲液)、35℃、600 mmol/L NaCl的条件下,Reth-aly表现出最高的催化活性。以海藻酸钠为底物,其催化活性可达765.7 U/mg,降解产物包含聚合度(degree of polymerization,DP)2~4的AOS。与其他PL-7家族褐藻胶裂解酶相比,其在35℃下的半衰期为5.4 h,具有良好的稳定性。Rethaly在高盐环境中表现出良好的催化活性,在AOS生物生产中具有良好的应用前景。

Microbulbifer salipaludis褐藻胶裂解酶的酶学性质研究

为获得可高效生产褐藻寡糖的褐藻胶裂解酶,该文筛选出一种来源于Microbulbifer salipaludis的褐藻胶裂解酶(Microbulbifer salipaludis alginate lyase,Misa-aly),并在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)异源表达,分离纯化后进行酶学性质鉴定。结果表明,该酶最适pH值为8.5(Tris-HCl缓冲液),最适温度为45℃,偏好底物为聚甘露糖醛酸,40℃下保温1 h酶活下降约50%。Misa-aly对Na+依赖性较低,以海藻酸钠为底物通过3,5-二硝基水杨酸(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS)法测定酶活为(53.0±1.2)U/mg,反应产物是聚合度为2~4的寡糖,24 h后酶解转化率达到94.7%,底物海藻酸钠几乎全部酶解。