G6P[1]型牛轮状病毒的分离培养及鉴定

目的从轮状病毒阳性的牛粪便标本中,分离出一株G6P[1]型牛轮状病毒(Bovine Rotavirus,BRV),对其进行培养和鉴定。方法用PBS溶液重悬粪便标本并离心,将其上清过滤除菌和胰酶处理后,利用MA104细胞进行分离培养;通过逆转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription-polymerase Chain Reaction,RT-PCR)对样本VP4和VP7基因进行扩增和测序,与GenBank上的参考序列进行同源性分析,构建进化树,分析确定其G/P基因分型。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Polyacrylamine Gel Electrophoresis,PAGE)、噬斑实验和电镜(Transmission Electron Microscope,TEM)等技术对分离到的病毒进行鉴定和纯化。绘制病毒生长动力学曲线。结果分离培养了1株BRV毒株,将其命名BLL。VP7和VP4基因测序结果显示此毒株为G6P[1]型轮状病毒。PAGE胶结果显示分离株电泳型为长型,条带呈现A组轮状病毒排列电泳图谱;通过噬斑实验将毒株进行了纯化。电镜检测到典型的轮状病毒颗粒。病毒生长动力学曲线可发现病毒在感染后6 h已经开始复制。结论本研究成功分离到G6P[1]型牛型轮状病毒,为研究G6P[1]型轮状病毒的病原学特征提供实验基础和技术参考。

知识型员工的绩效评价

传统意义上的知识型员工绩效评价只是一种概念,缺乏量化标准及相关体系。本文通过对知识型员工特征的分析,建立一套知识型员工绩效评价指标体系,构建评判指标集、评语集和权重集,以模糊综合评价法建立知识型员工绩效评价模型。从群体角度对中小企业知识型员工进行绩效评价研究,利用熵理论构建针对中小企业知识型员工间的熵权模糊评价模型,并对相关模型进行实证分析。这种全面有效地对知识型员工进行评价已成为人力资源管理的一项重要研究内容。

30例糖尿病肾病患者动、静脉内瘘的保护及护理

随着人民生活水平提高，糖尿病逐渐增加，糖尿病肾病最终导致终末期肾功能衰竭，须维持性血液透析。而动静脉内瘘（AVF）是维持性血液透析患者重要的血管通路，内瘘良好的通畅性是血液透析患者透析的生命线。2008年1月-2010年5月，我院对30例糖尿病肾病患者采用动静脉内瘘行血液透析，效果满意，现报告如下。

今天阳光真好

今天阳光真好! 学校里阳光明媚，一切都灿灿的、亮亮的。太阳公公用手指轻抚着教学楼，那墙壁立即变得闪亮了，刺得我们不敢抬头望。太阳公公看我们在运动场上追逐嬉戏，羡慕校孓他禁不住把双脚踏入场地，场地变红了，映在我们脸上，笑盈盈的，喜滋滋的。

草原生态保护及畜牧业可持续发展

草原是最大的陆地生态系统,是最重要的自然资源,可以起到净化空气、防风固沙的效果,为我国畜牧养殖业的发展提供了重要的饲料支持。但是近年来,草原生态环境的破坏情况也越来越严重,给我国畜牧业的可持续发展也带来了较大的阻碍,在这样的情况下,探索草原生态保护以及畜牧业可持续发展的路径就显得十分紧迫。

今天阳光真好

今天阳光真好! 学校里阳光明媚。一切都灿灿的，亮亮的。

中国中南部G8P[8]型A组轮状病毒全基因组遗传特征研究

G8基因型轮状病毒已在我国出现并迅速增加。本研究拟对采集于中国中南部5岁以下急性胃肠炎患儿的7例G8P[8]型RVA毒株进行全基因组分子特征分析。对轮状病毒特异性扩增结合高通量测序方法对中国中南部14株G8P[8]型RVA毒株进行全基因组测序。利用MEGA11.0、Geneious Prime、Geneious9.0.2和DNASTAR软件对RVA毒株进行全序列及遗传变异和进化分析。7株G8P[8]型RVA的基因分型为G8-P[8]-I2-R2-C2-M2-A2-N2-T2-E1-H2,显示为DS-1样基因型。系统进化树结果显示,本研究中国中南部7株G8P[8]分为两大谱系G8-I(13株)和谱系G8-Ⅱ(1株),VP7的最大分支可信度(MCC)树表明,G8的平均进化率估计为1.4×10^(-3)替换/位点/年。G8P[8]基因型RVA在我国包括两个谱系,从该病毒在中国的出现到该病毒在中国的流行传播将经过1~2年,持续的全国RVA监测至关重要。

基于CRISPR/Cas9系统Ⅰ型干扰素受体亚单位1基因敲除的Caco-2细胞系的构建

目的利用成簇规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palinmic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(CRISPR-associated protein 9,Cas9)系统在人结肠腺癌细胞Caco-2中敲除Ⅰ型干扰素受体亚单位1(interferon alpha/beta receptor subunit 1,IFNAR1)基因,构建IFNAR1基因敲除Caco-2细胞系。方法利用CRISPR/Cas9技术设计特异性识别IFNAR1基因外显子区的sgRNA(single guide RNA)序列,构建LentiCRISPRv2-IFNAR1-sgRNA重组质粒,慢病毒包装后感染Caco-2细胞,嘌呤霉素抗性筛选,有限稀释法培养单克隆细胞系。通过靶基因测序和Western blot法验证IFNAR1基因敲除情况;通过加入外源性IFNβ检测IFNAR1基因敲除细胞CXC趋化因子配体10(CXC chemokine ligand 10,CXCL10)和干扰素刺激基因20(interferon-stimulatd gene 20,ISG20)mRNA水平。结果质粒LentiCRISPRv2-IFNAR1-sgRNA测序结果显示插入位置均位于BsmBⅠ酶切黏性末端。共获得2株IFNAR1基因敲除单克隆细胞株,测序结果显示Caco-2-IFNAR1-KO1的IFNAR1第6个外显子发生5 bp缺失,Caco-2-IFNAR1-KO2的第7个外显子发生18 bp缺失,同时有1 bp增加。与野生型Caco-2细胞相比,Caco-2-IFNAR1-KO1和Caco-2-IFNAR1-KO2细胞IFNAR1蛋白未见表达。相比于0 ng/mL IFNβ,在50 ng/mL外源IFNβ刺激下,Caco-2-IFNAR1-KO1和Caco-2-IFNAR1-KO2细胞CXCL10基因mRNA水平(t分别为0.566和1.268,P>0.05)和ISG20基因mRNA水平(t分别为1.522和1.733,P>0.05)均无明显升高;与野生型Caco-2细胞相比,在50 ng/mL外源IFNβ刺激下,Caco-2-IFNAR1-KO1和Caco-2-IFNAR1-KO2细胞CXCL10基因mRNA水平(t分别为6.763和6.777,P<0.05)和ISG20基因mRNA水平(t分别为5.664和5.653,P<0.05)均显著降低。结论利用CRISPR/Cas9技术成功获得了IFNAR1基因敲除的Caco-2细胞株,该细胞系依赖Ⅰ型IFN受体(interferon alpha/beta receptor,IFNAR)激活的下游分子被明显抑制,为进一步探讨病毒感染Caco-2细胞后的天然免疫反应及复制包装机制提供了有力的工具。

轮状病毒受体结合特征研究进展

轮状病毒(rotavirus,RV)是引起人类和动物急性胃肠炎的重要病原体。结构蛋白VP8*(viral protein 8*,VP8*)位于RV最外层的刺突状VP4的头部,VP8*在受体识别和结合中发挥重要作用。目前对RV受体结合特性的研究主要集中在A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)和C组轮状病毒(group C rotavirus,RVC)。本文对RV的蛋白结构、受体类型以及RVA和RVC受体结合特性及与受体相互作用的结构基础等研究进展进行综述。