基于多色流式降维聚类方法的自发性细菌性腹膜炎患者T淋巴细胞亚群分析

目的建立多色流式降维聚类分析方法,检测自发性细菌性腹膜炎(SBP)患者外周血和腹水中T细胞亚群,探讨SBP患者外周以及腹腔局部T淋巴细胞的表面标志物表达差异。方法选取2021年12月至2022年1月就诊于首都医科大学附属北京地坛医院的4例SBP患者为研究对象。根据多色流式荧光搭配原则,初步确立检测外周血及腹水T淋巴细胞亚群比例的多色流式配色方案。利用健康对照者外周血单个核细胞(PBMCs)调节最适检测电压及荧光补偿;设定条件后,检测4例SBP水样本。建立多色流式降维聚类分析方案以检测SBP患者外周血和腹水中T淋巴细胞的差异。结果采用统一流形逼近和投影(UMAP)结合FlowSOM插件的多色流式降维分析法将CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞均分为12个细胞群。该降维聚类方法通过可视化UMAP图定位,并结合统计学分析初步发现,与外周血相比,SBP患者腹水中CD69^(+)PD-1^(+)CD4^(+)T_(EM)(t=3.427、P=0.0416)以及CD25-TIGIT-CD4^(+)T_(EM)(t=3.203、P=0.0492)比例较高,差异有统计学意义。结论多色流式降维聚类分析法用于检测SBP患者外周血及腹水样本中T淋巴细胞分群及功能,具有快速、准确、多维度并且可视化强的优点。

内毒素打击后小鼠脾脏T淋巴细胞功能恢复动态研究

目的探讨脂多糖(LPS)打击后,小鼠脾脏T淋巴细胞亚群及功能的动态恢复过程。方法采用高剂量LPS(10 mg/kg)腹腔单次注射建立小鼠脓毒症模型,在LPS打击后第0 d、7 d,14 d和28 d,使用流式细胞术动态检测脾脏CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞中初始T细胞、效应记忆T细胞和中央记忆T细胞的比例以及细胞表面活化分子(CD38和CD69)和共抑制分子(PD-1和TIGIT)的表达水平,分泌细胞因子IL-2和IFN-γ及释放颗粒酶B的能力。正态分布数据采用one-way ANOVA检验进行方差分析,Holm-Sidak’s进行多重比较;偏态分布数据则采用Kruskal-Wallis检验进行分析,Bonferroni法进行多重比较。结果LPS打击7 d后,与基线相比,小鼠脾脏初始CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞比例均显著降低(F=52.22、P<0.0001,F=10.87、P=0.0019);效应记忆CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞比例均显著增高(F=20.54、P<0.0001,F=26.03、P<0.0001);CD4^(+)CD38^(+)(F=35.40、P<0.0001)、CD4^(+)CD69^(+)(F=45.65、P<0.0001)、CD4^(+)PD-1^(+)(F=20.55、P<0.0001)、CD4^(+)TIGIT^(+)(F=19.20、P<0.0001)、CD8^(+)CD38^(+)(F=56.76、P<0.0001)、CD8^(+)CD69^(+)(F=59.47、P<0.0001)、CD8^(+)PD-1^(+)(F=11.15、P=0.0013)和CD8^(+)TIGIT^(+)(F=21.21、P<0.0001)细胞比例均显著增高,差异均有统计学意义。与基线相比,LPS打击14 d后细胞活化水平、共抑制分子表达水平逐渐恢复,但至28 d时,初始CD4^(+)T细胞(F=52.22、P<0.0001)、效应记忆CD4^(+)T细胞(F=20.54、P=0.0093)、CD4^(+)CD69^(+)(F=45.65、P=0.0037)、CD4^(+)PD-1^(+)(F=20.55、P=0.0255)和CD4^(+)TIGIT^(+)(F=19.20、P=0.0087)未恢复至基线水平;CD8^(+)IFN-γ^(+)T细胞比例(F=14.33、P=0.0343)仍高于基线水平,差异均有统计学意义。结论LPS打击后28 d小鼠脾脏CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞恢复过程存在差异,CD4^(+)T细胞功能总体恢复较CD8^(+)T细胞更为缓慢。