m6A去甲基化酶ALKBH5在肝细胞癌发生发展中的功能作用

目的探讨m6A去甲基化酶ALKBH5在肝细胞癌(HCC)发生发展中的功能作用。方法分析公共数据库(TCGA、CPTAC)中ALKBH5在肝癌和癌旁组织中的mRNA和蛋白表达情况。采用qRT-PCR检测ALKBH5在正常肝细胞LO2和肝癌细胞系HepG2、Hep3B和Huh7中的表达;采用siRNA干扰技术和慢病毒技术构建稳定敲减的肝癌细胞株,并检测ALKBH5 mRNA及蛋白质水平的干扰效率;随后通过CCK-8、平板克隆、细胞划痕及Transwell等实验研究ALKBH5对HCC增殖活性及迁移、侵袭能力的影响。结果对TCGA、CPTAC数据库分析显示,相比于癌旁组织,ALKBH5在肝癌组织中的mRNA[(5.78±0.62)vs(5.41±0.25)]和蛋白表达[(0.09±0.35)vs(-0.01±0.16)]水平呈高表达。ALKBH5在正常肝细胞系LO2(1.0±0.1)中的表达显著低于肝癌细胞Hep3B(1430.7±103.9)、Huh7(1515.6±162.4)和HepG2(311.0±29.6)。通过慢病毒法成功构建ALKBH5稳定敲减的Hep3B、Huh7肝癌细胞株。抑制ALKBH5的表达后,Hep3B和Huh7细胞的增殖活性、迁移和侵袭能力均明显减弱(P<0.05)。结论ALKBH5在肝癌细胞中呈高表达,低表达ALKBH5后,对HCC的恶性生物学行为具有抑制作用,但是ALKBH5在HCC中其他的生物学功能及其关联的调控网络仍需进一步探讨。

昆明小鼠3.5d囊胚分离培养胚胎干细胞并诱导分化为胰岛素前体细胞的实验

目的:自囊胚内细胞团分离培养患者自身的胚胎干细胞并将其诱导分化为目的细胞可用于特定疾病的治疗。实验采用昆明小鼠3.5d囊胚分离培养胚胎干细胞,并将其诱导分化为胰岛素前体细胞。方法:实验于2005-09/2006-11在哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室完成。①选取妊娠3.5d昆明雌性小鼠123只,至13.5d时取11只用于胚胎成纤维细胞饲养层制备。剩余112只妊娠3.5d小鼠冲胚后,挑取扩展充分、囊胚内细胞团明显的囊胚采用胰酶+乙二胺四乙酸机械法分离培养胚胎干细胞,进行碱性磷酸酶染色和Oct-4免疫荧光染色鉴定。②在细菌培养皿的盖上用不含人重组白血病抑制因子的胚胎干细胞培养液制备液滴,选取生长旺盛、形态典型的胚胎干细胞集落,采用胰酶+乙二胺四乙酸机械法悬浮培养4d,形成拟胚体,行巢蛋白免疫荧光染色。③将胚胎干细胞诱导分化为胰岛素前体细胞,首先需要L-多聚赖氨酸和纤维粘连蛋白包被培养皿,然后用ITSFn筛选液(含5mg/L胰岛素、50mg/L转铁蛋白、30nmol/L亚硒酸钠、5mg/L纤维粘连蛋白的DMEM/F12培养液)筛选巢蛋白阳性细胞6d,碱性成纤维细胞生长因子扩增及初步诱导6d,再以烟碱诱导功能成熟的胰岛素前体细胞27d。应用DTZ染色、Insulin免疫荧光染色对诱导的细胞进行鉴定。结果:①胚胎干细胞的分离培养:将扩展充分的囊胚放置在饲养层上4d后,可见囊胚内细胞团自透明带中孵出,呈柱状生长,中央颜色深于周边,并将周边的饲养层细胞推开。胚胎干细胞传代后呈典型的克隆样生长,相差显微镜下折光性强。②胚胎干细胞碱性磷酸酶染色和Oct-4免疫荧光染色结果:两种染色均呈阳性表达。③拟胚体的形成及向巢蛋白阳性细胞的诱导:胚胎干细胞悬浮培养4d可形成拟胚体,经ITSFn筛选6d后可见90%巢蛋白阳性细胞。④巢蛋白阳性细胞向胰岛素前体细胞的分化:烟碱诱导6d后,上皮样细胞增多,细胞逐渐密集形成类胰岛样组织。诱导10dDTZ染色可见集落的边缘细胞被染成腥红色。诱导27dInsulin免疫荧光染色可见染色阳性细胞团簇。结论:采用昆明小鼠3.5d囊胚成功分离培养胚胎干细胞,并可以将胚胎干细胞诱导分化为胰岛素前体细胞。

运输密度和时间对大口黑鲈幼鱼生理生化和肝肠结构的影响

【目的】研究不同运输密度和时间对大口黑鲈(Micropterus salmoides)幼鱼生理生化指标及肝肠组织结构的影响,为其合理科学运输提供理论依据。【方法】将大口黑鲈幼鱼置于塑料盒中进行模拟运输实验,分别于运输前(0 h)和运输后的4、8、12、20 h取样,对存活率、水质、血清和肝脏理化指标进行了分析。【结果】与运输前相比,运输过程中水体总氨氮浓度和pH显著升高,即时存活率显著降低。运输密度和时间对大口黑鲈幼鱼即时存活率、水体总氨氮含量、应激及抗氧化指标均具有显著交互作用。1∶2、1∶4、1∶5密度组皮质醇含量在4 h达到最高,1∶3密度组在8 h达到最高,之后逐渐降低。肝脏总抗氧化能力和超氧化物歧化酶与运输前相比显著升高,还原型谷胱甘肽含量显著降低,各密度组肝脏和肠道均出现不同程度的组织损伤(α=0.05)。【结论】运输时长小于4 h时,可适当采用较高的鱼水比(1∶2)运输,运输时长大于10 h时,宜采用较低的鱼水比(1∶5)进行运输。

四肢皮瓣整形62例体会

四肢因创伤、肿瘤切除、烧伤、瘢痕切除、感染等引起大范围皮肤、骨骼、肌肉、神经或血管的缺损,甚至并发骨髓炎、骨不连,使治疗旷日持久,对社会和个人都增加很多负担。

手部套状撕脱伤显微外科治疗体会

手部套状撕脱伤是一种手部严重创伤，手部皮肤往往象脱手套一样被“脱掉”。由于皮肤被挤压、挫伤严重，以往的常规治疗为截除远节一节半手指，保留指埋入腹部皮瓣下，待保留的近节一节半手指肉芽生长良好时再植皮，由于治疗过程长，手指的致残率很高。作者通过显微外科血管移植重建剥脱皮肤的血液循环，保住了部分手指的完整性，恢复了手和手指的大部分功能，减少了手指的致残率，报道如下。

65例儿童手部鞭炮爆炸伤的诊断和治疗

目的探讨手部鞭炮爆炸伤的病理过程及治疗方法。方法手术修复、实验室检查和药物治疗相结合。结果术后配合头孢硫脒、丹参等药物对症治疗,65例中59例Ⅰ期愈合,6例Ⅱ期修复后完全愈合。结论认清鞭炮爆炸伤特殊病理过程,通过手术修复、结合实验室检查和头孢硫脒、丹参等药物的有效应用是鞭炮爆炸伤治愈的关键所在。

悬滴法检测小鼠胚胎干细胞AKP的表达

目的 采用悬滴法和传统细胞爬片法对胚胎干细胞等呈集落样生长的细胞进行检测。方法 取3．5天昆明小鼠胚胎放在KSOM培养液中，体外培养24h后，将孵出的ICM放在铺有饲养层的胚胎干细胞培养液中，4-5d待ICM呈柱状生长时，消化传代，并应用悬滴法和普通爬片法检测小鼠胚胎干细胞AKP表达。结果 分离、培养的小鼠胚胎干细胞体积小，细胞核大，细胞界限不清，呈集落样生长。应用悬滴法和普通爬片法对其进行AKP染色后，小鼠胚胎干细胞呈蓝紫着色。结论 悬滴法与传统的细胞爬片法相比，可以减少细胞丢失，利用较少的细胞即可成功的检测，明显提高了小鼠胚胎干细胞检测成功率。

四肢大面积逆行皮肤撕脱伤29例诊治

四肢大面积逆行皮肤撕脱伤临床急诊较为常见,早期诊断及处理不当,将造成皮肤成活后质量差或大面积皮肤坏死。1999年7月至2006年1月,作者对收治的29例大面积逆行皮肤撕脱伤患者,依照丁自海等[1]撕脱皮肤血运判断标准,进行撕脱皮瓣血运诊断,按皮瓣血运良莠分类手术并术后处理,修复皮肤的质量大大提高，现报道如下。

不同内固定物对前臂双骨折愈合的影响

对于不稳定型的开放性前臂双骨折,临床采取开放复位内固定术,所选用的内物固定物一般为钢板螺丝钉和髓内针。我们对临床21例前臂双骨折开放复位内固定术后的病人进行长期随访,对前臂双骨折愈合情况作如下比较。 1 临床资料 1.1 一般资料 本组21例,男15例,女6例;

一种治疗后踝骨折方法的改进

我们对10例三踝骨折病人的后踝骨折,采取新的内固定方法,临床随访,与老方法随机抽样的10例三踝骨折病人预后相比,新方法疗效好,现报告如下。

21例前臂切割伤周围神经断裂的修复治疗

目的探讨前臂切割伤周围神经损伤修复治疗。方法神经外膜对端缝合或缺损神经行游离神经移植桥接及后期功能的重建。结果21例中桡神经浅支损伤病人完全恢复,正中神经损伤病人除2例神经缺损移植外恢复良好,尺神经损伤中2例完全恢复,2例有效,1例出现爪形手畸形。结论神经损伤吻合口越少,恢复越好。

干细胞治疗糖尿病的研究现状及未来

目的:综述干细胞治疗糖尿病的研究现状及未来发展。资料来源:应用计算机检索Pubmed2000-01/2006-11有关干细胞治疗糖尿病方面文献,检索词“diabetes mellitus and stem cell not review”,限定文章语言种类为English。资料选择:对检索到的干细胞治疗糖尿病相关文献进行整理,选取针对性强文章。同一领域文献则选择近期发表或权威杂志文章。资料提炼:共检索到359篇相关文献,有关胚胎干细胞、胰腺干细胞、造血干细胞、神经干细胞、骨髓基质干细胞在糖尿病方面研究文章50篇,其中29篇符合要求。资料综合:干细胞极强的自我更新能力和多向分化潜能为糖尿病的细胞治疗开辟了新途径,按其发育阶段不同可以将干细胞分为胚胎干细胞和胰腺干细胞、造血干细胞、神经干细胞、骨髓基质干细胞等成体干细胞。干细胞移植是治疗糖尿病的一条新途径。干细胞生成胰岛素分泌细胞前需要经过诱导分化、细胞选择和细胞成熟3个阶段。干细胞治疗糖尿病研究已取得一定进展,部分实验已纠正糖尿病动物的高血糖状态。结论:干细胞定向分化为胰岛β细胞研究为糖尿病患者点燃了新希望,其勿庸置疑的成为治疗糖尿病的最佳种子细胞。

三氧化二砷体外诱导雌激素受体α表达的初步研究

目的本文拟探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导因高甲基化失活的雌激素受体重新表达的可能性。方法以雌激素受体高甲基化失活的人乳腺细胞系MDA-MB-231细胞系为研究对象,经不同浓度As2O3处理后,采用RT-PCR技术检测ER-α基因mRNA表达。结果经1.0μmol/L、2.0μmol/L和4.0μmol/L As2O3处理的MDA-MB-231细胞均能扩增出ER-α基因。结论一定浓度的As2O3可通过去甲基化作用诱导MDA-MB-231细胞系重新表达ER-α。

浅谈高中数学教学中解析几何的解题技巧

在高考数学中,解析几何通常以压轴题形式出现,有着极强的综合性,既考查解析几何自身方面的知识,还涉及其他方面的数学知识,计算量也比较大,对学生的做题方式、思维能力与综合知识的掌握水平均要求较高.在高中数学教学中,教师需格外关注解析几何方面的习题训练,帮助学生掌握一些有效的解题技巧与策略,提高他们的解题水平.本文主要对高中数学教学中解析几何的解题技巧及策略进行浅谈,同时分享部分解题实例.