大鼠骨骼肌早期死亡时间推断的内参基因筛选

目的死亡时间推断是法医病理学实践的重点。运用mRNA定量技术进行死亡时间推断已成为目前研究的热点。在进行mRNA指标挑选时,为了排除其他干扰因素的影响,实验数据必须要经过内参指标的标准化。因此,内参基因的选择对实验结果具有重要影响。方法SD大鼠颈椎脱臼处死后置于4℃、15℃、25℃、35℃环境温度下,在死后0h、6h、12h、18h、24h五个时间点取骨骼肌组织。利用实时荧光定量PCR技术测定常用内参基因Ct值,并使用三种内参评估软件(geNorm、NormFinder、BestKeeper)综合分析内参稳定性。结论综合三种内参评估软件结果,在低温条件下,RPS29、RPL13是较合适的内参,而在高温条件下,5SrRNA、18SrRNA是较合适的内参。在35℃时,GAPDH、HPRT、PGK1、UBC、B2M与死亡时间有明显相关性。