研究生动物免疫学课程建设与效果分析

石河子大学兽医学和畜牧学二个一级学科的学硕和专硕研究生同时选修动物免疫学这门课程,在教学过程中发现教学内容和方式难以满足部分学科方向研究生的要求,学习的积极性不高。因而我们通过教学团队建设,课程设置、建设与改革,教材建设,教学模式与教学方法的改革,网络教学平台建设等方面的建设以期解决这个问题。经过两年的课程建设并调研分析了连续两年选课研究生修课前后的知识水平。结果表明,该课程能够有效提高学生学习的积极性,达到了促进研究生学习能力培养的预期目标。

单核细胞增生李斯特菌LLO-InlP缺失株的构建及部分生物学特性研究

目的构建单核细胞增生李斯特菌LLO-InlP缺失株,探究LLO、InlP基因对单核细胞增生李斯特菌生物学特性的影响。方法通过温度敏感型(Ts)质粒载体基因敲除法,构建单核细胞增生李斯特菌LM681ΔInlP、LM681ΔLLO-InlP基因缺失株,通过检测不同时间的OD 600 nm值绘制生长曲线分析LM681、LM681ΔInlP、LM681ΔInlP-ΔLLO三株菌的体外生长能力;以感染复数MOI值为10感染细胞,测定LM681、LM681ΔInlP、LM681ΔInlP-ΔLLO对人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SV40)、人绒毛膜癌细胞(JEG-3)黏附侵袭能力;动物水平上测定小鼠半数致死量、感染后的脑、肝、脾载菌量。结果成功获得片段大小为1125 bp的缺失株LM681ΔInlP、LM681ΔInlP-ΔLLO(亲本株LM681为2292 bp);生长曲线结果显示,各菌OD 600值无统计学差异;3株菌体外感染HTR-8/SV40细胞、JEG-3细胞黏附侵袭试验结果显示,LM681ΔInlP、LM681ΔInlP-ΔLLO较LM681对HTR-8/SV40细胞、JEG-3细胞黏附侵袭率均极显著降低(HTR-8/SV40细胞F LM681ΔInlP-LM681=102.792、F_(LM681ΔInlP-ΔLLO-LM681)=128.459,均P<0.01,JEG-3细胞F LM681ΔInlP-LM681=203.755、F_(LM681ΔInlP-ΔLLO-LM681)=81.279,均P<0.01);LM681亲本株的LD_(50)为10^(6.78),LM681ΔInlP缺失株的LD_(50)为107.45,在攻毒剂量范围LM681ΔInlP-ΔLLO不存在LD_(50),LM681ΔInlP-ΔLLO较LM681的LD_(50)提高了6.78个对数数量级,LM681ΔInlP-ΔLLO组织载菌量整体较亲本株LM681降低。结论LLO、InlP基因缺失在动物感染水平和体外培养细胞感染水平上均极大程度的降低了LM的的毒力,且InlP基因对LM681菌株黏附侵袭滋养层细胞具有一定意义,为研究InlP在单核细胞增生李斯特菌致病中的作用奠定基础。

新疆石河子地区牛支原体的分离鉴定及药物敏感性分析

【目的】确定引起新疆石河子地区集约化牛场常发性肺炎的主要病原同时进行病原的体外药物敏感性分析。【方法】采集有典型咳嗽、流涕症状的牛鼻拭子10份和病死牛肺脏组织1份,用牛支原体特异性引物进行PCR检测,将检测为阳性的样本进行病原培养纯化,对纯化后的分离株菌落进行形态学观察、Dienes染色、生化试验及16S rRNA测序和进化分析,通过测定颜色变化单位(CCU)测定分离株生长曲线,并对分离株进行药物敏感性试验。【结果】PCR结果显示,10份鼻拭子中检测出7份牛支原体阳性样本,1份病死牛肺脏组织也检测为阳性;在涂有肺脏组织研磨液培养液的PPLO固体培养基上长出针尖状的菌落,纯化后分离株菌落形态为典型的煎蛋状;Dienes染色可见明显的深蓝色中心脐;生化试验结果显示,分离株不水解明胶、精氨酸、七叶苷,不发酵乳糖、葡萄糖和甘露醇,不分解尿素,可还原氯化三苯基四氮唑;16S rRNA测序结果显示,分离株与牛支原体国际标准株PG45相似性为99.7%,与国内牛支原体地方流行株XBY01、Ningxia-1、NM2012、Tibet-10的相似性最高,均为99.9%;生长曲线测定结果显示,分离株在培养基中生长6 h后进入对数生长期,54 h时达到高峰进入稳定期,72 h后进入衰亡期;药物敏感性试验结果显示,分离株对呋喃妥因、四环素和多西环素、庆大霉素和卡那霉素敏感,对诺氟沙星和氧氟沙星中介,而对环丙沙星、洛美沙星及阿奇霉素和红霉素耐药。【结论】本研究成功从肺脏组织中分离鉴定出1株牛支原体,培养54 h是该分离株的最佳收获时间,与国内大多数牛支原体地方流行株差异较小,整体遗传进化相对稳定,有一定的耐药性,本研究结果可为当地对牛支原体的防控提供参考,也为牛支原体致病机制研究及疫苗研发奠定基础。

HBV相关原发肝细胞癌患者T淋巴细胞、壳酶蛋白和DR-70表达水平差异

目的探讨不同临床分型乙型肝炎病毒(HBV)感染患者外周血T淋巴细胞、壳酶蛋白、纤维蛋白降解复合物(DR-70)表达水平的变化及临床意义,分析肝细胞癌患者T淋巴细胞、壳酶蛋白和DR-70的相关性。方法回顾性选取2017年9月至2022年9月烟台市奇山医院收治的慢性HBV感染患者173例作为试验组[男114例,女59例,年龄(45.38±12.72)岁],再根据病情分为乙型肝炎病毒携带者59例、慢性乙型肝炎患者51例、肝硬化患者31例和肝细胞癌患者32例,以同期健康体检者40例作为对照组[男22例,女18例,年龄(39.15±14.95)岁]。运用流式细胞术检测各研究对象外周血T淋巴细胞亚群表达水平,采用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法定量检测外周血DR-70水平,应用磁微粒化学发光法检测外周血壳酶蛋白水平。两两比较采用Games-Howell检验,Welch方差用于分析组间方差不齐。Kruskal-Wallis H检验用于非正态分布的计量资料比较,采用χ^(2)检验和Pearson相关分析法进行计数资料组间比较和相关性分析。结果肝细胞癌组CD3^(+)表达水平[(61.43±19.26)%]最低,肝硬化组CD3^(+)CD8^(+)表达水平[(17.89±9.15)%]最低,与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);CD3^(+)CD4^(+)水平在试验组各小组中升高程度不同,肝硬化组最高[(37.16±13.84)%],与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。慢性乙型肝炎组、肝硬化组和肝细胞癌组外周血DR-70和壳酶蛋白水平均不同程度升高(均P<0.01),且均在肝细胞癌组中表达水平[(30.11±9.96)mg/L、(213.11±39.76)μg/L]最高(均P<0.01)。肝细胞癌组患者外周血CD3^(+)T淋巴细胞表达占比与DR-70水平呈负相关(r=-0.291,P=0.037)。结论血清DR-70和壳酶蛋白在细胞肝癌中高表达,与T淋巴细胞亚群联合检测可用于评估慢性肝病患者疾病进展程度,有助于慢性乙型肝炎的临床诊疗,特别是对肝脏肿瘤的早期诊断具有较大的应用价值。

精准护理模式对发热伴血小板减少综合征患者的干预效果

目的探讨精准护理模式对发热伴血小板减少综合征患者的干预效果。方法选取烟台市奇山医院2016年2月至2020年12月收治的发热伴血小板减少综合征患者97例,按随机数字表法分为对照组49例和观察组48例。对照组男性30例、女性19例,年龄(48.12±6.04)岁;观察组男性30例、女性18例,年龄(48.52±6.35)岁。对照组实施认知与行为护理,观察组在对照组基础上进行精准护理模式,护理时间均为2个月。对比两组患者的护理前后知信行认知水平、一般自我效能感量表(GSES)评分、生活质量和护理期间血小板输注次数。采用独立样本t检验、配对t检验、χ^(2)检验。结果护理后,观察组的知信行认知评分、GSES评分、生活质量评分均高于对照组[(22.71±1.35)分比(21.15±1.21)分、(28.61±1.48)分比(22.60±2.64)分、(87.37±11.55)分比(75.09±10.85)分],差异均有统计学意义(t=5.996、13.791、5.398,均P<0.001)。观察组护理期间血小板输注次数为(2.63±0.24)次,对照组为(3.68±0.52)次,差异有统计学意义(t=12.724,P<0.001)。结论精准护理模式在发热伴血小板减少综合征患者中,有利于提高知信行认知水平,改善患者自我效能、降低血小板输注次数,还可提高生活质量,值得在临床进行推广与应用。

共情护理联合多维度健康教育指导对肺结核患者的影响

目的探究共情护理联合多维度健康教育指导对肺结核患者生活质量及不良情绪的影响。方法选取烟台市奇山医院2017年5月至2019年9月收治的肺结核患者198例,根据随机数字表法将其分为两组。常规组99例,年龄(44.96±11.08)岁,给予多维度健康教育指导;试验组99例,年龄(45.14±11.15)岁,在常规组的基础上实施共情护理。比较两组生活质量量表(QOL)评分、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评分、依从率以及不良事件发生率。采用χ^(2)检验、t检验进行统计分析。结果护理干预前试验组与常规组QOL评分分别为(22.85±4.35)分、(22.85±4.96)分,护理干预后分别为(46.95±6.85)分、(40.54±5.32)分,两组护理后QOL评分均高于护理前,且试验组QOL评分高于常规组(t=7.354,P<0.001)。护理干预前试验组与常规组HAMA评分分别为(35.82±3.85)分、(35.06±3.72)分,护理干预后分别为(21.10±2.58)分、(26.85±2.14)分,护理干预后两组HAMA评分均降低,且试验组生活质量HAMA评分低于常规组(t=17.068,P<0.001)。护理1周后,试验组依从率[92.93%(92/99)]高于常规组[80.81%(80/99)](χ^(2)=6.373,P=0.012)。试验组不良事件发生率[3.03%(3/99)]低于常规组[12.12%(12/99)](χ^(2)=5.843,P=0.016)。结论共情护理联合多维度健康教育指导能够改善肺结核患者的生活质量及不良情绪,提高患者依从率,有效降低护理期间不良事件的发生。

轮状病毒VP4、VP7基因的克隆与核苷酸序列分析

用反转录聚合酶链式反应 (RT_PCR)技术 ,从轮状病毒感染的细胞中扩增 816bp、916bp的VP4、VP7片段中抗原表位区。通过T4DNA连接酶将其直接连接于克隆载体质粒pGEM_T上 ,转化至受体菌DH5α中。提取质粒经PCR扩增、酶切鉴定 ,证明重组质粒pT_V4、PT_V7中含有轮状病毒的VP4、VP7基因片段。经核苷酸序列分析 ,表明克隆了轮状病毒主要保护性抗原VP4。

脂多糖诱导下慢性阻塞性肺疾病大鼠模型远端肺动脉平滑肌细胞中Toll样受体4表达情况研究

背景慢性阻塞性肺疾病(COPD)是以不完全可逆的气流受限为特征的慢性支气管炎和肺气肿,也是导致肺动脉高压的主要原因之一,但其发生发展机制尚未完全清楚。目的探讨脂多糖(LPS)诱导下COPD大鼠模型远端肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中Toll样受体(TLR)4表达情况,以期为探讨TLR4信号通路在COPD炎性反应及免疫应答中的作用提供理论基础。方法 2015年12月—2016年3月,选取SPF级Wistar大鼠24只,雌雄对半,6~8周龄。适应性饲养大鼠1周后,将其随机分为模型组和正常组,各12只。模型组大鼠于实验第1、14天经气道注入1μg/ml的LPS 200μl,置于自制有机玻璃舱,烟熏1 h/d,共8周;正常组大鼠于实验第1、14天经气道注入等量0.9%氯化钠溶液,与模型组大鼠在同等条件下饲养8周。8周后,两组分别随机选取2只大鼠,开胸取肺组织,分别进行HE染色观察肺组织病理学改变和免疫组织化学染色观察肺动脉平滑肌层TLR4表达情况。从模型组剩余大鼠中随机选取6只,分离、培养远端PASMCs,选用第3~6代(对数生长期)细胞,光镜下(×100)观察PASMCs形态,采用免疫荧光法(荧光显微镜下,×200)观察其α-肌动蛋白表达情况,并随机分为对照组(不进行干预)、LPS 12 h组(加入1μg/ml的LPS 10μl作用12 h)、LPS 24 h组(加入1μg/ml的LPS 10μl作用24 h)、LPS 48 h组(加入1μg/ml的LPS 10μl作用48 h)、LPS 72 h组(加入1μg/ml的LPS 10μl作用72 h),采用Western blotting法检测各组PASMCs中TLR4表达水平。结果肺组织病理学改变:模型组肺泡壁断裂,肺泡融合,肺大泡形成,肺动脉平滑肌层明显增厚,大量炎性细胞浸润,病理表现符合典型的COPD病理改变。肺动脉平滑肌层TLR4表达情况:模型组倒置相差显微镜下可见TLR4表达阳性,且肺动脉平滑肌层染成黄色较正常组颜色明显加深。PASMCs形态及其α-肌动蛋白表达情况:光镜下PASMCs呈梭形、不规则生长,随着培养时间的延长,层数增多,堆积形成"峰-谷"状;荧光显微镜下可见PASMCs胞质α-肌动蛋白表达阳性,胞质中有向细胞两极呈放射状分布的条丝状物,与细胞长轴平行,形态清晰。LPS 12 h组、LPS 24 h组、LPS 48 h组、LPS 72 h组PASMCs中TLR4表达水平均高于对照组(P<0.05);LPS 24 h组、LPS 48 h组、LPS 72 h组PASMCs中TLR4表达水平均高于LPS 12 h组(P<0.05);LPS 48 h组、LPS 72 h组PASMCs中TLR4表达水平均高于LPS 24 h组(P<0.05)。结论 LPS诱导下COPD大鼠模型远端PASMCs中TLR4表达水平升高,猜测LPS可能通过TLR4信号通路诱导PASMCs的合成分泌功能,从而加重炎性反应及肺血管重塑。

槲芪散及槲寄生提取物对肝癌细胞内游离钙离子浓度的影响

目的探讨方剂槲芪散及其君药槲寄生提取物多糖、总碱对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用及其对细胞内游离钙离子浓度的影响。方法采用MTT法测定槲芪散对细胞增生的抑制作用;利用流式细胞仪分析细胞周期、凋亡;利用激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙离子浓度。结果槲芪散及槲寄生提取物有较好的抑制肿瘤细胞增生的作用,高剂量组除了槲芪散和槲寄生总碱48 h时间点外,OA值均较对照组明显降低(P<0.001),呈现出时间-剂量依赖性;经药物作用48 h后,槲寄生多糖及总碱组G1期细胞比例增加,S期细胞和G2期细胞比例降低,槲芪散组G1期细胞比例无明显变化,S期比例降低,G2期比例增加,3者均使细胞凋亡增加;加入不同浓度的槲芪散、槲寄生多糖及总碱,低浓度时荧光增强不明显,而高浓度均导致细胞内荧光强度瞬间增强,升高到一定水平后,基本维持在一高水平,除槲寄生总碱组有略微下降外,其余2组未见明显下降趋势。结论槲芪散、槲寄生多糖及总碱均能抑制肿瘤细胞增生,促进细胞凋亡,且这3种药物引起胞内钙超载可能是诱导HepG2凋亡的机制之一。

轮状病毒VP4基因和VP7基因原核表达载体的构建及表达

经PCR从含有VP4基因、VP7基因片段的重组质粒 pT VP4和 pT VP7中扩增VP4、VP7基因 ,连接至 pGEM 5zf(+ )。经筛选和鉴定正确后同时酶切目的基因和表达质粒 pET 2 8a(+ ) ,连接、转化受体菌 ,经PCR、酶切和序列分析证明 ,连接向位和阅读框架是正确的 ,从而构建了轮状病毒保护性抗原VP4基因、VP7基因片段的原核表达载体 pET2 8a VP4、pET2 8a VP7。重组质粒转化表达菌在IPTG诱导下 ,用SDS PAGE、薄层凝胶扫描分析表达的蛋白。结果表明 ,表达的目的蛋白以包涵体的形式存在 ,蛋白的分子量分别为 37.6 9和 36 .2 0ku ,表达量占菌体总蛋白的比例分别为 17.1%和 14 .4 %。

新疆分离株伪狂犬病病毒的致病机理研究

采用从本地发病猪采集的伪狂犬病病毒组织对家兔进行了人工感染 ,每天观察感染家兔临床表现。 2 0h后每隔一段时间处死 1只兔子 ,取其扁桃体、淋巴结、肝脏、肾脏、脾脏、脑等组织制成石蜡切片。用免疫酶组织化学染色法检测病毒在组织中分布情况。结果表明 :病毒首先在扁桃体内出现 ,淋巴结次之 ;4 0h后病毒分布于全身各组织脏器中 ,尤其在淋巴结、心脏、肾脏。

斜盘式轴向柱塞泵的单片机流量控制研究

介绍了一种由单片机控制斜盘式轴向柱塞泵的变量机构,以及以步进电机驱动的数字控制轴向柱塞泵,包括数字泵的工作原理,硬件的设计思路和主程序框图。通过控制步进电机的运动来实现对柱塞泵流量的精确控制。

TLR4与COPD肺血管重塑相互关系的研究进展

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是高发生、高死亡，严重影响患者生存质量，并带来沉重经济负担的疾病。肺动脉高压与患者预后密切相关。早期无缺氧的COPD肺组织中。已存在明显的血管炎性改变和病理学重建，但肺血管重塑的具体发病机制尚未完全明了。Toll样受体4（TLR4）是机体介导天然免疫转向获得性免疫的桥梁,与COPD的发病密切相关。

轮状病毒VP4蛋白与肠产毒性大肠杆菌热稳定肠毒素蛋白的融合表达

利用DNA重组技术将轮状病毒 (RotavirusRV)VP4蛋白主要抗原编码区基因与产肠毒素大肠杆菌 (Enteotoxi genicEscherichiacoliETEC)热稳定肠毒素 (Heat -stableenterotoxinEscherichiacoliST)基因融合 ,插入原核表达质粒 pET -2 8a(+)中 ,经PCR、酶切、测序分析表明已将vp4 -st片段克隆入PET - 2 8a(+) ,而且具有正确的读码框和方向性 ,正确构建了VP4 -ST的融合表达载体 pET2 8a -VP4 -ST。表达质粒转化受体菌BL2 1(DE3 ) plysS ,取经IPTG诱导后表达的目的蛋白进行SDS -PAGE、凝胶薄层扫描分析。结果表明 :表达的目的蛋白以包涵体的形式存在 ,大小约 4 0 2kDa,表达的蛋白量占菌体总蛋白的 13 0 4 8%。

TLR-4信号通路对COPD大鼠肺动脉平滑肌细胞合成分泌IFN-γ、PDGF-AB的影响

目的:探讨TLR-4信号通路在COPD大鼠肺动脉平滑肌细胞合成分泌IFN-γ、PDGF-AB中的作用。方法:消化、分离及纯化COPD大鼠原代肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),并随机分为:对照组、LPS组、TLR-4抑制剂组(TAK242)、LPS+TAK242组;RT-PCR、Western blot法检测各组PASMCs中TLR4和NF-κB的基因表达水平;ELISA法检测PASMCs上清液中IFN-γ、PDGF-AB的水平。结果:与对照组比较,LPS组TLR-4和NF-κB的基因表达水平及上清液中IFN-γ、PDGF-AB的表达水平显著升高(P<0.05),而TAK242组显著降低(P<0.05);使用TAK242预处理后,再给予相同浓度LPS刺激,与LPS组相比,其表达水平显著下降(P<0.05)。结论 :LPS介导的TLR4信号通路参与COPD大鼠PASMCs合成分泌IFN-γ、PDGF-AB因子的调控,进而影响炎症反应及肺血管重塑。本实验为临床早期干预COPD提供了理论依据。

猪轮状病毒的细胞培养

在猴肾传代细胞系 (MA 10 4 )上成功培养了猪的轮状病毒。病毒接种前用胰酶处理且维持液中不含血清 ,连续传代后出现明显的细胞病变 (CPE) :细胞先肿大变圆 ,边界不清 ,后聚集、萎缩 ,直到死亡脱落。

轮状病毒VP7基因的克隆及核苷酸序列分析

用反转录聚合酶链式反应 (RT PCR)技术 ,从轮状病毒感染的细胞中扩增了 916bp的VP7片段中抗原表位区。通过T4DNA连接酶将其直接连接于克隆载体质粒pGEM T上 ,转化至受体菌DH5α中。提取质粒经PCR扩增、酶切鉴定 ,证明重组质粒pT V7中含有轮状病毒的VP7基因片段。经核苷酸序列分析 。

轮状病毒VP4基因的克隆与核苷酸序列分析

用反转录聚合酶链式反应 (RT- PCR)技术 ,从轮状病毒感染的细胞中扩增了 816 bp的 VP4片段中抗原表位区。通过 T4 DNA连接酶将其直接连接于克隆载体质粒 p GEM- T上 ,转化至受体菌 DH5 α中。提取质粒经 PCR扩增、酶切鉴定 ,证明重组质粒 p T- V4中含有轮状病毒的 VP4基因片段。经核苷酸序列分析 ,表明克隆了轮状病毒主要保护性抗原

新疆石河子地区猪伪狂犬病的血清学调查

用乳胶凝集试验 (LAT)和斑点—酶联免疫检测法 (DOT ELISA)对石河子地区几个猪场进行了猪伪狂犬病的血清学调查。结果显示 ,阳性率占 5%～ 96%。由此可以得出此病在石河子地区存在 ,且有流行趋势。

小课时背景下普通动物学讲授中的几点体会

新教改下,对小课时背景下普通动物学的讲授,该文从教学内容上、教学手段上、教学过程中师生的互动几方面进行了阐述,对如何提高普通动物学的教学效果进行了初步探讨。