2-酮基-L-古龙酸产生菌原生质体的属间融合

用配对法筛选得一株氧化葡萄糖酸杆菌 (Gluconobacter oxydans) 10 - 3的优良伴生菌短小芽孢杆菌 (Bacilluspumilus) 970 0 2。混合菌发酵产生 2 -酮基 - L-古龙酸 ,山梨糖的转化率达 90 %左右。两菌分别经诱变处理 ,获得耐利福平 B.pumilus 970 0 2 - 1- 6 Rifr和耐红霉素 G.oxydans 10 - 3- 2 0 Emr遗传标记菌株。并确定 B.pumilus 970 0 2 - 1- 6Rifr菌原生质体形成和再生最佳条件。初步尝试两菌属间原生质体融合。

新型降钙素的基因合成与克隆表达

借助计算机辅助设计了一种新的人降钙素类似物 (新型降钙素 )。根据密码子偏爱性原理及基因工程操作原则设计了它的基因 ,运用化学法和酶法相结合的技术合成了该基因 ,并克隆到质粒 pUC19中 ,DNA测序验证正确。该基因被克隆到融合型表达载体pGEX 2T中 ,重组融合型表达载体nCT/ pGEX 2T转化E coliBL2 1,培养表达 ,SDS PAGE分析可见Mr 约 310 0 0的融合蛋白带 ,融合蛋白占细胞内总蛋白的 34%。WesternBlotting分析证明该新型降钙素获得表达。