PRRSV中和表位串联Fc分子的表达与免疫原性鉴定

为融合表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和表位和Fc分子,首先合成PRRSVGP3和GP5的串联B细胞中和表位与鼠IgG1-Fc的mFc-GP35-Bp基因片段,将其克隆到pFastBac载体上,构建重组质粒pFastBac-mFc-GP35-Bp,经蓝白斑筛选出重组杆粒Bacmid-mFc-GP35-Bp,并转染昆虫Sf9细胞,获得重组杆状病毒rBV-mFc-GP35-Bp。通过Western-blot分析重组蛋白的反应原性,免疫小鼠后,通过间接ELISA检验其免疫原性,病毒中和试验检测中和抗体水平。结果显示,mFc-GP35-Bp蛋白在昆虫Sf9细胞中获得表达,且可分泌至上清;用mFc-GP35-Bp蛋白免疫小鼠后,ELISA测定抗体效价可达1∶100000,三免后第4周仍可检测到较高抗体水平;中和抗体效价介于1∶40和1∶80之间。结果表明,表达的重组mFc-GP35-Bp蛋白具有良好的反应原性和免疫原性,可刺激机体产生中和抗体,与Fc分子融合表达延长了抗体在血清中存在的时间,本试验为PRRSV中和表位疫苗的研发奠定了基础。