超滤法结合UPLC-MS/MS法研究树豆酮酸A在不同种属血浆中的血浆蛋白结合率

目的:比较树豆酮酸A在不同种属血浆中的血浆蛋白结合率。方法:以超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)为检测手段,采用超滤法测定低、中、高质量浓度(2.5、5、20μg/mL)的树豆酮酸A分别在大鼠、家兔及人血浆中的血浆蛋白结合率。色谱条件:色谱柱为Waters BEH C18,保护柱为WatersVanGuard BEH C18;流动相为0.01%甲酸溶液(溶剂A)和含0.01%甲酸的乙腈溶液(溶剂B),梯度洗脱;流速为0.15 mL/min;柱温为30℃;进样量为2μL。质谱条件:电喷雾电离源;负离子模式采集;毛细管电压为1.5 kV;锥孔电压为30 V;离子源温度为100℃;脱溶剂气温度为400℃;锥孔气流量为50 L/h;脱溶剂气流量为800 L/h;扫描范围为质荷比(m/z)50→1 200。结果:在2.5、5、20μg/mL质量浓度下,树豆酮酸A在大鼠血浆中的血浆蛋白结合率分别为(75.63±0.90)%、(98.30±0.03)%、(99.42±0.01)%(n=3);在家兔血浆中的血浆蛋白结合率分别为(79.61±1.08)%、(98.48±0.10)%、(99.42±0.03)%(n=3);在健康人血浆中的血浆蛋白结合率分别为(76.74±1.22)%、(97.99±0.11)%、(99.37±0.01)%(n=3),其中在2.5μg/mL时树豆酮酸A在大鼠和人血浆中的血浆蛋白结合率明显低于在家兔血浆中的血浆蛋白结合率(P<0.05)。结论:5、20μg/mL的树豆酮酸A在大鼠、家兔及人血浆中的血浆蛋白结合率高于2.5μg/mL树豆酮酸A;仅在2.5μg/mL时,树豆酮酸A在不同种属血浆中的血浆蛋白结合率有明显差异;在5、20μg/mL时,树豆酮酸A在不同种属血浆中的血浆蛋白结合率均无明显差异。

五环三萜类化合物的口服吸收与代谢研究进展

五环三萜类化合物在自然界中分布广泛、资源丰富,我国多种传统中草药如甘草、柴胡、远志、人参、三七、白头翁和积雪草等皆含有五环三萜类化合物,且大量研究表明该类化合物是上述中草药的有效成分之一。国内外研究者发现五环三萜类化合物具有多种优良的药理活性,如抗肿瘤、抗糖尿病、抗炎、抗菌和抗病毒等,但由于其口服生物利用度偏低,极大地影响了进一步的开发及在临床上的应用。药物的吸收与代谢对生物利用度和药效的影响很大。因此,就近年来国内外有关五环三萜类化合物的口服吸收特征以及体内外代谢途径研究进行综述,以期对该类化合物的进一步研究及开发利用提供参考。

新型DPP-4抑制剂LGT-6在Caco-2细胞单层模型中的转运特性研究

通过建立Caco-2细胞单层模型探究降糖化合物LGT-6的转运特性。采用MTS法测定LGT-6的安全浓度范围,通过测定跨膜电阻、碱性磷酸酶活力、高渗透性药物普莱洛尔与低渗透性药物荧光素钠通透性实验的表观渗透系数P_(app)(AP→BL)来验证Caco-2细胞单层模型的致密性。考察LGT-6在从Transwell顶端(AP)到底端(BL)及底端到顶端的转运特性,计算表观渗透系数和外排比。分析转运时间、给药浓度和P-糖蛋白(P-gp)抑制剂对LGT-6转运特性的影响。Caco-2细胞单层模型建立成功,可用于LGT-6的转运特性研究。LGT-6的转运量随时间的延长及浓度的增大而增加,不同浓度的LGT-6在双向转运随浓度变化而变化,从AP→BL的P_(app)值为3.55×10^(-6)~5.64×10^(-6)cm/s,BL→AP的P_(app)为4.28×10^(-6)~8.76×10^(-6)cm/s,外排比(ER)均≥1.2。降糖化合物LGT-6在体外Caco-2细胞模型上的口服吸收较好,其转运方式主要以被动扩散为主,可能有P-糖蛋白参与其转运。

采用UPLC-MS/MS法研究树豆酮酸A在不同种属肝微粒体中的代谢差异

建立测定肝微粒体孵育体系中树豆酮酸A(CAA)质量浓度的方法,并比较其在不同种属肝微粒体中的代谢特征。方法:分别将CAA溶解于由还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)启动的大鼠、比格犬、人肝微粒体孵育体系中,置于37℃水浴中进行孵育,分别于孵育的0、5、10、15、30、45、60 min时用乙腈终止反应,以染料木素为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测各孵育体系中CAA的质量浓度。色谱柱为Waters BEH C18,流动相为水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸)(45∶55,V/V),流速为0.25 mL/min,柱温为30℃,进样量为2μL;采用电喷雾离子源,以选择反应监测模式进行负离子扫描,用于定量分析的离子对分别为m/z 353.14→309.11(CAA)、m/z 269.86→224.11(内标)。以孵育0 min时CAA的质量浓度为参照,计算其在不同孵育体系中的剩余百分比和酶动力学参数。结果:CAA检测质量浓度的线性范围为0.05~20μg/mL,定量下限为0.05μg/mL,最低检测限为0.01μg/mL;日内、日间RSD均小于10%,相对误差为-4.83%~8.94%,提取方法和基质效应均不影响待测物的测定。孵育60 min时,CAA在大鼠、比格犬、人肝微粒体中的剩余百分比分别为(62.79±9.99)%、(64.07±11.59)%、(96.66±5.71)%;在大鼠、比格犬肝微粒体中的半衰期(72.19、68.61 min)均显著短于人肝微粒体(364.74 min),清除率[0.019 2、0.020 2 mL/(min·mg)]均显著高于人肝微粒体[0.003 8 mL/(min·mg)](P<0.05)。结论:本研究建立的UPLC-MS/MS法简便、快速、专属性强、灵敏度高,可用于肝微粒体孵育体系中CAA质量浓度的测定及体外代谢稳定性的研究。CAA在大鼠、比格犬肝微粒体中的代谢稳定性均差于人肝微粒体。

DPP-4抑制剂LGT-6在不同种属肝微粒体中的代谢特征

研究降糖化合物LGT-6在人、比格犬、大鼠肝微粒体中的代谢稳定性,探讨其在不同种属肝微粒体中的代谢特征,为后期LGT-6的体内代谢提供参考依据。分别将LGT-6溶于由NADPH启动Ⅰ相代谢、UDPGA启动的Ⅱ相代谢以及二者共同启动的两相代谢孵育体系中,孵育至相应时间点终止反应,测定LGT-6的质量浓度,用以计算LGT-6的剩余百分率与酶动力学参数。LGT-6在Ⅰ相代谢、Ⅱ相代谢及两相代谢中稳定性良好,不易受Ⅰ相代谢酶与Ⅱ相代谢酶的影响,预测LGT-6可能在人体内的驻留时间长、作用持久、生物利用度高,体内药动学与药效学性质俱佳,对Ⅱ型糖尿病的治疗作用更加显著。所创建的UPLC-MS/MS法适用于LGT-6的体外代谢研究,为后续体内代谢、毒理研究及动物模型的选择提供参考依据。但在Ⅰ相孵育体系中人肝微粒体的T1/2明显大于比格犬与大鼠,这可能与物种之间的种属差异相关。

基因毒性杂质的控制策略及其在HPLC-MS中的应用

在药品研发中,基因毒性杂质的评估一直是药品质量评价的重点内容,关系到药品上市的安全性。基因毒性杂质危险系数高,对人体的危害性大,选用高灵敏度、专属性良好的分析仪器并结合TTC概念选择合适的分析方法是目前控制药物中基因毒性杂质含量的核心内容。其是药物开发的重要组成部分,贯穿于整个研发过程。高效液相色谱–质谱联用技术作为药物基因毒性杂质研究的有力分析工具之一,已广泛应用于多种基因毒性杂质的分析与鉴定。本文将从基因毒性杂质的概念、国内外的法规要求、以及HPLC-MS在基因毒性杂质中的应用进行概述,以期为基因毒性杂质的有效控制提供参考依据,保证患者用药安全。

斑蝥酸钠对卡培他滨在大鼠体内药动学行为的影响

目的考察斑蝥酸钠对卡培他滨在大鼠体内药动学行为的影响。方法将大鼠随机分为2个对照组和2个实验组,每组6只。2个对照组大鼠腹腔注射生理盐水,2个实验组腹腔注射斑蝥酸钠注射液0.5 mL/kg,连续给药7 d;第8天给药后,对照1组和实验1组大鼠灌胃卡培他滨5 mg/kg,对照2组和实验2组大鼠静脉注射卡培他滨5 mg/kg。于给药后不同时间点采集血样。血样经乙酸乙酯萃取后,以甲苯磺丁脲为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中卡培他滨的浓度,采用DAS 2.0软件计算主要药动学参数。结果与对照1组比较,实验1组无穷大时间内的平均滞留时间(MRT_(0-∞))、峰浓度(c_(max))、30 h内的药-时曲线下面积(AUC_(0-30 h))、AUC_(0-∞)和生物利用度(F)均显著升高,表观清除率(CLz/F)显著降低(P<0.01);与对照2组比较,实验2组的半衰期(t_(1/2))、MRT_(0-30 h)、MRT_(0-∞)、AUC_(0-30 h)、AUC_(0-∞)均显著升高(P<0.01)。结论斑蝥酸钠能增加卡培他滨在大鼠体内的血浆暴露量,提高口服生物利用度,延长平均滞留时间,降低清除率。

UPLC-Q-TOF-MS/MS法鉴定大鼠中树豆酮酸A代谢产物

本研究建立一种简便、快速、灵敏度高的超高效液相色谱串联四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)法,研究树豆酮酸A (CAA)在大鼠体内的代谢特征。通过灌胃给予大鼠CAA (30 mg·kg^(-1))后,收集血浆、尿液、胆汁和粪便采用UPLC-Q-TOF-MS/MS检测生物样品,收集和处理相关数据,将代谢产物的精确质量数和MS~2质谱与母体化合物进行比较。结果共检测到23种代谢物,其中尿液中有15种,胆汁中有11种,粪便中有11种,血浆中有9种。与CAA相关的主要代谢途径包括脱氢、还原、羟基化、甲基化和葡萄糖醛酸结合。本实验获得贵州医科大学动物伦理委员会批准(编号:1603137)。

常春藤皂苷元对体外人肝微粒体中5种常见细胞色素P450酶的抑制作用研究

目的 考察常春藤皂苷元对人肝微粒体中的5种细胞色素P450(CYP450)酶的抑制作用。方法 采用Cocktail探针药物法,在肝微粒体中加入常春藤皂苷元与混合探针底物[包含非那西丁(CYP1A2探针底物)、双氯芬酸钠(CYP2C9探针底物)、苯乙妥英(CYP2C19探针底物)、右美沙芬(CYP2D6探针底物)和咪达唑仑(CYP3A4探针底物)]共同孵育60 min。采用超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS),以甲苯磺丁酰胺为内标,定量检测底物的代谢物含量,并计算常春藤皂苷元和特异性抑制药对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9和CYP3A4的半数抑制浓度(IC_(50))。结果 常春藤皂苷元对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6与CYP3A4的IC;值均大于50μmol·L^(-1),对CYP2C9及CYP2C19的IC_(50)值分别为4.94μmol·L^(-1)和18.00μmol·L^(-1)。结论 常春藤皂苷元对肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6与CYP3A4无明显抑制作用,对CYP2C9和CYP2C19有一定的抑制作用。

基于在体单向肠灌流法探究刺囊酸的大鼠肠吸收特性

目的:考察刺囊酸在小肠不同肠段、不同条件下的吸收特性,探究刺囊酸的吸收机制。方法:采用大鼠单向肠灌流模型,考察不同浓度药物、不同肠段、不同p H条件以及P-糖蛋白(P-gp)抑制剂对刺囊酸吸收的影响,利用HPLC法测定药物浓度。结果:刺囊酸在十二指肠的吸收随浓度增加而增加,相同浓度下,各肠段间的有效渗透系数(Peff)和吸收速率常数(Ka)无显著性差异(P> 0.05),在小肠各段吸收均较好,不同pH条件下结果表明,刺囊酸在碱性条件下吸收较好。与P-gp抑制剂组相比吸收无显著性差异(P>0.05)。结论:刺囊酸在小肠全段均有吸收,且吸收完全,其吸收速率最快的部位是回肠;低浓度与中高浓度组间有显著差异,推测刺囊酸的吸收机制不是简单的被动转运;根据生物药剂学分类系统初步判定刺囊酸为Ⅱ类低溶解性/高渗透性药物。刺囊酸不是P-gp的底物,本实验初步探明刺囊酸的吸收特性,可为药物制剂及临床研究提供生物学依据。