基于ISSR-PCR体系鉴别樟芝单核体交配型

通过原生质体单核化技术获得樟芝单核体,基于内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列进行鉴定,采用14个引物对简单重复序列区间(inter-simple sequence repeats,ISSR)进行多态性扩增,筛选条带清晰、重复性好的引物用于樟芝单核体的交配型鉴定。结果表明,通过原生质体单核化技术获得31个樟芝单核体,经ITS序列分析确定获得的单核体为樟芝。以单核体S2、S10、S14、S27的DNA为模板,对14条ISSR引物进行初步筛选,得到4个条带清晰、重复性好的引物P7、P9、P21、P25用于交配型鉴定。单核体S9和S25为同一交配型,两者与S2为不同交配型,通过镜检进一步验证S9、S25可以与S2形成具有锁状联合的双核菌株。该方法可明显缩短樟芝单核体交配型的鉴定时间。

前体物和原位萃取剂对樟芝发酵产Antrodin A和Antrodin C的影响

在樟芝(Taiwanofungus camphoratus)液态发酵培养基中添加不同前体物(柠檬酸、顺丁烯二酸、谷氨酰胺、苯丙氨酸、肌醇、酪氨酸)和原位萃取剂(大豆油、花生油、菜籽油、玉米胚芽油、橄榄油),测定其对樟芝发酵产Antrodin A和Antrodin C的影响。结果表明:无论是否添加前体物,发酵产物中均未检测到Antrodin A,添加0.1 g·L^(-1)的柠檬酸、顺丁烯二酸和谷氨酰胺抑制Antrodin C的产生,而添加0.1 g·L^(-1)的苯丙氨酸、肌醇、酪氨酸对Antrodin C的产量没有显著影响;添加原位萃取剂能显著促进Antrodin A的产生,而对于Antrodin C的产量,除添加玉米胚芽油的处理外,添加大豆油、花生油、菜籽油和橄榄油均使Antrodin C产量降低;同时添加原位萃取剂(大豆油)和0.1 mg·L^(-1)苯丙氨酸,Antrodin A产量达268.30 mg·L^(-1);同时添加原位萃取剂(大豆油)和0.1 mg·L^(-1)肌醇,Antrodin C产量达475.00 mg·L^(-1)。