胰淀素Fab抗体的筛选及初步鉴定

目的:从人天然Fab噬菌体抗体库中筛选胰淀素(amylin又称为胰岛淀粉样多肽)Fab抗体,测定其特异性及抗原结合活性。方法:以胰淀素为抗原,对抗体库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"的富集筛选;将从人源噬菌体抗体库中筛选出的阳性克隆,提取其质粒、切除gⅢ、自身环化并转入大肠杆菌中,以IPTG诱导表达可溶性抗体,最后用SDS-PAGE鉴定抗体表达情况、ELISA鉴定抗原结合活性和特异性。结果:成功筛选并表达了抗胰淀素的可溶性Fab抗体,经SDS-PAGE蛋白电泳,在相对分子质量约为47 kD处可见一蛋白条带。ELISA和Western blot证实了该Fab片段与胰淀素抗原的结合活性和特异性。结论:利用噬菌体抗体库技术获得了人源性的特异抗胰淀素Fab抗体,为临床进行下一步研究奠定了基础。

MicroRNA-802对胰岛素抵抗的骨骼肌细胞PI3K/Akt通路的影响

目的探讨胰岛素抵抗的骨骼肌细胞模型中miR-802的表达及其与糖代谢及胰岛素敏感性的关系。方法复苏L6成肌细胞,培养并诱导分化为L6肌细胞,采用高脂(含0.25 mmol/L棕榈酸的培养基)孵育,随机分为正常对照组与棕榈酸组,24 h后分别测定培养基中葡萄糖浓度,判断造模是否成功。成功建立大鼠L6成肌细胞的胰岛素抵抗模型后,通过转染miR-802的模拟物或抑制剂来调节miR-802的表达,分为以下5组:正常对照组、棕榈酸组、棕榈酸+miR-802模拟物组、棕榈酸+miR-802抑制剂组、棕榈酸+转染对照组。采用RT-PCR及Western blotting检测胰岛素信号通路磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(又称Akt)及葡萄糖转运蛋白(GluT4)的mRNA及蛋白表达情况。结果与正常对照组(1.458±0.264)相比,棕榈酸组miR-802 mRNA表达(3.108±0.513)明显升高。与棕榈酸组和棕榈酸+转染对照组相比,棕榈酸+miR-802模拟物组的miR-802 mRNA表达明显升高(3.108±0.513,3.442±0.104 vs.11.743±0.933),PI3K(0.724±0.032,0.682±0.059 vs.0.494±0.025)、Akt(0.819±0.044,0.718±0.033 vs.0.754±0.028)及GluT4(0.719±0.038,0.666±0.056 vs.0.427±0.031)mRNA表达明显下降,p-PI3K/PI3K(0.349±0.056,0.351±0.019 vs.0.195±0.026)、p-Akt/Akt(0.639±0.002,0.557±0.04 vs.0.261±0.075)及GluT4(0.648±0.028,0.590±0.026 vs.0.413±0.096)蛋白表达水平明显下降(P<0.01)。与棕榈酸组及棕榈酸+转染对照组相比,棕榈酸+miR-802抑制剂组的miR-802 mRNA表达明显下降(3.108±0.513,3.442±0.104 vs.1.069±0.056),PI3K(0.724±0.032,0.682±0.059 vs.0.887±0.016)、Akt(0.819±0.044,0.718±0.033 vs.0.814±0.026)及GluT4(0.719±0.038,0.666±0.056 vs.0.908±0.054)mRNA表达升高,且p-PI3K/PI3K(0.349±0.056,0.351±0.019 vs.0.494±0.012)、p-Akt/Akt(0.639±0.002,0.557±0.04 vs.0.951±0.031)及GluT4(0.648±0.028,0.590±0.026 vs.0.756±0.007)蛋白表达水平也明显升高(P<0.01)。结论MiR-802调节了骨骼肌细胞胰岛素的敏感性及葡萄糖的转运,可能是2型糖尿病的潜在治疗靶点。

木丹颗粒联合西医常规治疗早期糖尿病肾病临床疗效及对患者Toll样受体4/核因子κB、转化生长因子β1/Smad信号通路的影响

目的观察木丹颗粒联合西医常规治疗早期糖尿病肾病(DN)的临床疗效及对患者Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)、转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad信号通路的影响。方法将90例早期DN患者按照随机数字表法分为2组。对照组45例予西医常规治疗,观察组45例在对照组治疗基础上加用木丹颗粒治疗。2组均治疗3个月后统计临床疗效,并比较2组治疗前后空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA 1c)、肾功能[血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、尿白蛋白排泄率(UAER)、肾小球滤过率(eGFR)]及外周血单核细胞(PBMCs)TLR4/NF-κB、TGF-β1/Smad信号通路关键因子mRNA的表达。结果观察组总有效率93.33%(42/45),对照组总有效率75.56%(34/45),观察组临床疗效优于对照组(P<0.05)。治疗后2组FPG、HbA 1c及Cr、BUN、UAER均较本组治疗前降低(P<0.05),且观察组均低于对照组(P<0.05)。治疗后2组eGFR均较本组治疗前升高(P<0.05),且观察组高于对照组(P<0.05)。治疗后2组PBMCs TLR4、MyD88、NF-κB mRNA及TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达均较本组治疗前降低(P<0.05),Smad7 mRNA表达均升高(P<0.05),且观察组改善均优于对照组(P<0.05)。结论木丹颗粒治疗早期DN疗效确切,并能改善患者血糖水平和肾功能,机制与调控TLR4/NF-κB、TGF-β1/Smad信号通路有关。

浅析安全评价如何降低火力发电厂事故发生

近些年来,随着我国国民经济的发展,人们对电力的需求也越来越大,因此,在全国范围内火力发电厂呈几何倍的方式增长,这些火电厂的成立在很大程度上缓解了我国的电荒,但是与此同时,伴随着电力企业的增加,也产生了很多的安全事故,这些安全事故的发生不仅影响着各地经济的发展,也影响着社会的稳定和团结,火力发电厂事故的产生因素有多方面,包括管理问题和设备问题。电力企业作为国民经济发展的基础性能源产业,是国民经济的发展重点,在我国经济的发展过程中,火力发展长频发的安全隐患严重的影响着社会的安定与团结。通过对火力发电厂的安全现状评价,如何能够发挥安全评价机构的作用,在评价过程中充分评价专业知识用以充分全面的辨识火力发电厂危险、有害因素,全面的进行定性、定量评价,提出可靠有价值的安全对策措施,用以降低火力发电厂事故发生,是本次讨论的重点。

儿童颅咽管瘤术后继发全血细胞减少1例及文献复习

颅咽管瘤(Craniopharyngiom,CP)是一种罕见的低组织学恶性颅内肿瘤,每年每百万人中只有1~2例患病,5~14岁儿童和50~74岁成年人的发病率最高.头痛、视力障碍、生长迟缓和多尿是儿童颅咽管瘤在初步诊断时的典型临床表现[1].颅咽管瘤首选手术治疗,但术后并发症多,尤其是内分泌功能障碍发生率高,主要表现为顽固性尿崩症、严重电解质紊乱及垂体前叶功能低下,这些是影响患者预后和生存的重要因素[2].本研究报道1例CP患儿术后继发全血细胞减少案例,并复习相关文献,旨在加强临床医生对CP术后患者激素补充、随访及并发症治疗等的重视.

2型糖尿病患者中性粒细胞与淋巴细胞比值、血小板与淋巴细胞比值、单核细胞与淋巴细胞比值、C反应蛋白与泌汗功能的相关性研究

目的探讨T2DM患者中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)、单核细胞与淋巴细胞比值(MLR)、C-RP与泌汗功能的相关性。方法选取2020年1~12月于河北省人民医院内分泌科住院的T2DM患者404例。根据双手皮肤电导率(HESC)和双足皮肤电导率(FESC)分为泌汗功能正常组(Con,n=250)、中度异常组(M,n=115)和重度异常组(S,n=39)。分析NLR、PLR、C-RP与泌汗功能的相关性。结果Con、M、S组年龄、血肌酐(Scr)、C-RP、NLR、PLR、MLR依次升高(P<0.05),eGFR、HESC、FESC依次降低(P<0.05)。Spearman相关分析显示,HESC、FESC与eGFR呈正相关(P<0.01),与年龄、DM病程、BUN、Scr、血尿酸、NLR、PLR、MLR、C-RP呈负相关(P<0.05)。Logistic回归分析显示,NLR、PLR、C-RP是T2DM患者泌汗功能的影响因素。受试者工作特征(ROC)曲线显示,NLR、PLR、C-RP判定HESC和FESC>60μs的ROC曲线下面积分别为0.732、0.658、0.816,NLR、PLR、C-RP对DM合并泌汗功能异常有重要诊断价值。当NLR、PLR、C-RP水平切点分别为2.085、128.125、3.585时,其诊断效率最高,灵敏度分别为74.7%、61.0%、61.7%,特异度分别为61.6%、61.2%、85.2%。结论T2DM患者NLR、PLR、C-RP水平升高与泌汗功能障碍密切相关,是重要影响因素。

二甲双胍通过AMPK/SIRT3通路促进脂肪酸培养的肌细胞自噬

目的探讨二甲双胍对高脂培养肌细胞自噬的作用及可能机制。方法用不同浓度棕榈酸(0.1、0.2、0.4、0.6 mmol/L)及二甲双胍(0.5、1、2、5、10 mmol/L)分别干预L6肌细胞24 h,CCK 8法检测肌细胞的存活率。棕榈酸和二甲双胍干预肌细胞24 h后,Western印迹检测微管相关轻链蛋白3(LC3Ⅱ)、自噬相关蛋白Beclin 1、泛素结合蛋白p62、沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)蛋白表达及腺苷酸活化的蛋白激酶(AMPK)磷酸化水平,RT-PCR技术检测上述基因的mRNA表达水平。结果棕榈酸剂量依赖性地降低肌细胞活力,2 mmol/L二甲双胍显示最佳的对抗作用。0.4 mmol/L棕榈酸和2 mmol/L二甲双胍干预肌细胞24 h后,棕榈酸显著减少LC3Ⅱ/LC3I、Beclin 1、SIRT3的蛋白及mRNA表达水平,降低AMPK磷酸化水平,显著增加p62的蛋白及mRNA表达水平(均P<0.05),棕榈酸的这些作用可被二甲双胍所对抗(均P<0.05)。结论二甲双胍可能通过刺激AMPK的磷酸化增加SIRT3的表达而增强脂肪酸培养的肌细胞自噬。

利拉鲁肽对2型糖尿病大鼠的保护作用

目的探讨利拉鲁肽对胰岛素抵抗(IR)2型糖尿病大鼠模型的影响,并分析其与胰岛素受体底物-1(IRS-1)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)信号通路的相关性。方法用高糖高脂饲料喂养联合35 mg·kg^-1链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病大鼠大鼠模型;另选大鼠普通喂食作为对照组。按照给药不同将造模成功大鼠分为对照组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、阳性对照组(0.36 mg·kg^-1罗格列酮)和低、高剂量实验组(0.2,0.4 mg·kg^-1利拉鲁肽),每组8只;均灌胃给药,连续给药4周。计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),用蛋白质印迹法检测IRS-1、磷脂酰肌醇3-激酶p85亚基(PI3Kp85)、磷酸化蛋白(p-AKT)及GLUT4的表达水平。结果对照组、模型组、阳性对照组、低、高剂量实验组的HOMA-IR分别为0.14±0.02,1.59±0.16,0.62±0.03,0.80±0.06和0.42±0.04;IRS-1蛋白表达水平分别为2.82±0.19,0.72±0.05,1.11±0.13,1.11±0.06和2.17±0.12;PI3Kp85蛋白表达水平分别为2.18±0.28,0.54±0.05,1.26±0.12,1.20±0.14和2.03±0.16;p-AKT蛋白表达水平分别为2.20±0.17,0.82±0.13,1.77±0.18,1.61±0.24和1.71±0.27;GLUT4蛋白表达水平分别为1.05±0.02,0.35±0.02,1.33±0.10,0.86±0.15和1.32±0.14。上述指标,对照组、低、高剂量实验组分别与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论利拉鲁肽可通过IRS-1/PI3K/GLUT4信号通路改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗。

视网膜血管直径与糖尿病肾脏病的相关性研究

目的探讨视网膜血管直径与糖尿病肾脏病(DKD)的相关性。方法选择2021年1至12月在河北省人民医院内分泌科住院治疗的309例2型糖尿病(T2DM)患者作为研究对象。收集患者的身高、体重、体重指数(BMI)、收缩压、舒张压、糖化血红蛋白(HbA1c)、血脂、尿微量白蛋白/肌酐比值(UACR)、估算的肾小球滤过率(eGFR)等指标。根据UACR和eGFR将T2DM患者分为非DKD组(212例)和DKD组(97例)。所有患者进行免散瞳彩色眼底照相, 采用全自动计算机图像分析软件测量视网膜血管参数(视网膜颞侧上静脉直径、鼻侧上动脉直径), 计算视网膜中央静脉等效值(CRVE)等指标。进一步按照视网膜颞侧上静脉直径水平的五分位数分为Q1组(<136.13 μm, 68例), Q2组(136.13~148.42 μm, 56例), Q3组(148.43~160.72 μm, 62例), Q4组(160.73~177.12 μm, 64例)和Q5组(>177.12 μm, 59例)。组间差异的比较采用独立样本t检验、Mann-WhitneyU检验。采用多因素logistic回归分析法探究视网血管直径与DKD的关系。结果 DKD组视网膜颞侧上静脉直径[分别为(161.87±22.47)和(152.93±21.98)μm]、CRVE[分别为(191.75±20.18)和(187.09±17.52)μm]均显著高于非DKD组, 鼻侧上动脉直径[分别为(84.62±15.09)和(88.15±13.94)μm]显著低于非DKD组(均P<0.05)。多因素logisitc回归分析结果显示, 视网膜颞侧上静脉扩张、CRVE升高是DKD的独立影响因素(OR=1.187, 95%CI 1.068~1.320, P=0.001;OR=1.018, 95%CI 1.002~1.034, P=0.027)。多因素logistic回归分析结果显示, 以Q1组为参照, Q2、Q4、Q5组视网膜颞侧上静脉扩张是DKD发生的影响因素(OR=5.194, 95%CI 2.025~13.326;OR=3.477, 95%CI 1.360~8.891;OR=4.895, 95%CI 1.912~12.530;趋势P值=0.007)。结论视网膜颞侧上静脉扩张、CRVE升高是T2DM合并DKD患者的独立影响因素。

糖原性肝病肝穿刺病理诊断一例

本文报道1例T1DM伴肝脏肿大患者转氨酶升高,经肝脏穿刺诊断为糖原性肝病,经严格控制血糖5个月后复查转氨酶降至正常。