食管癌高发区严重污染主要产毒霉菌的诱变性研究

链格孢的诱变性检测:19菌株的粗提物在细菌回复突变试验和枯草杆菌DNA重组试验中阳性率分别为85.0％和84.2％,其中10株的SCE试验结果8株阳性,8株中2株同时发生染色体断裂。7个菌株的UDS和DSI试验结果6株阳性。在细胞诱变和转化试验中,D_(10)-a_2粗提粉末诱发了V_(79)细胞的突变和NIH/3T3细胞的转化。链格孢酊产毒素AME和AOH的细菌诱变试验和UDS,DSI试验结果与不同菌株粗提物的试验结果相似。 园弧青霉的诱变性检测:24株园弧青霉中4株用大米培养提取物的细菌诱变试验均阴性,但在SCE、UDS和DSI试验中均阳性。19株用Ranlin-Thom培养基培养,菌液和菌膜分别提取检测,菌液的细菌回复突变试验2株阳性,DNA重组试验13株阳性,菌膜的细菌回复突变试验15株阳性,DNA重组试验5株阳性。4株菌液与菌膜提取物的UDS与DSI试验结果与DNA重组试验结果完全一致。

严重污染林县粮食的圆弧青霉的诱变性研究

圆孤青霉也是严重污染林县粮食的主要产毒霉菌,在我们研究食管癌的霉菌病工作中,除已证明链格孢与人的食管癌有密切关系外,因考虑到霉菌病因也可能是多因素的问题,我们对圆孤青霉也作了多方面的诱变性研究。

交链孢酚单甲醚对人胚食管上皮的作用

用人胚食管上皮体外培养,经交链孢酚单甲醚(Alternariol monomethyl ether,AME)处理后,食管上皮底层细胞比对照组的层次明显增多,细胞排列紧密紊乱,细胞核浆比增加,核不规则,大小不等.浓染,可见核分裂相,且有乳头状向内增生。该变化与甲基硝基亚硝基胍(MNNG)和甲基苯基亚硝胺(MPNA)所诱发的人胚食管上皮癌前病变相类似。结果提示,AME与人的食管癌发生很可能有关。

交链孢酚激活人胎食管上皮组织细胞癌基因的研究

本文报道食管癌高发区粮食中优势污染菌互隔交链孢霉代谢产物交链孢酚(AOH)对人胎儿食管上皮组织癌基因的激活。结果表明,体外培养的人胎儿食管上皮组织经10gg/ml AOH作用4h后,其DNA具有转化活性,可转化NIH/3T3细胞。一轮转化率为0.17Foci/μg DNA,二轮转化率为0.58Foci/μg DNA(P<0.01)。转化细胞中含有人特异性高重复序列Alu,提示转化系人DNA转染所致。Southern blot检测表明,AOH处理后的人胎儿食管上皮组织内有H-ras和myc基因的扩增,经其转染的NIH/3T3细胞中亦有H-ras基因持久而稳定的扩增。对照组胎儿食管上皮和正常NIH/3T3细胞中均未发现相应的同源序列,说明正常胎儿食管组织中的H-ras和myc基因可经AOH短期处理而激活。该结果对AOH可能系人食管癌病因之一提供了直接证据。

中国林州市食管癌高发区人群病因学预防效果观察

[目的]探讨降低食管癌发病率的有效预防对策和措施。[方法]根据食管癌流行病学和病因学研究发现的主要可疑致癌因素、促癌因素和保护因素,组织实施五项综合性病因学预防措施。应用自身前后对照的类实验研究方法,以林州市居民食管癌标化发病率为终点指标,以食管癌的主要致癌、促癌因素和保护因素的暴露水平为中间指标,评价其预防效果。[结果]林州市居民20年来食管癌标化发病率呈显著下降趋势,2003年与1980年相比男性下降了56.33%,女性下降45.07%;林州市居民体内致癌性亚硝胺和霉菌毒素的暴露水平明显下降;体内维生素A、B2水平明显增高,个人行为与社会环境危险因素明显减少、保护因素明显增加。[结论]林州食管癌高发区居民食管癌发病率的显著降低可能与实施针对病因的五项综合性预防措施有关。

交链孢醇单甲醚诱发V_(79)细胞突变的研究

交链孢醇单甲醚是从林县污染粮食中分离的互隔交链孢霉的提取物,经进一步纯化结晶获得,它是该霉菌的主要代谢产物之一。本文用V_(79)细胞突变的方法进行了交链孢醇单甲醚的致突变性研究。结果表明,在不加S-9和加S-9情况下,交链孢醇单甲醚均能诱发V_(79)细胞6-巯基鸟嘌呤抗性突变,随交链孢醇单甲醚剂量增大,突变频率增高,具有直线回归关系(P<0.01),但不加S-9时比加S-9时致突变作用更强,提示交链孢醇单甲醚是直接致突变物,可能与食管癌病因有一定关系。

交链孢酚单甲醚对人胎儿食管和胃上皮脂质过氧化的影响

本文报道食道癌高发区粮食中分离的互隔交链孢霉的代谢物交链孢酚单甲醚(AME)在体外攻击人胎儿食管及胃上皮后对相应组织脂质过氧化的影响。采用硫代巴比妥酸试验测定丙二醛含量反映脂质过氧化程度。AME可使胎儿食管及胃丙二醛含量明显升高(P<0.01),其程度与AME剂量相关,说明AME可引发这两器官上皮组织的脂质过氧化。随作用时间的延长,脂质过氧化程度愈来愈高,至4小时达高峰。食管对AME的反应较胃更强烈,提示AME有一定的器官选择性。根据本研究结果。推测AME可能是林县地区人食管癌的病因之一。

真菌类及其毒素在人食管癌中的病因学意义互隔交链孢霉与食管癌发生关系的研究

河南省林县为食管癌高发区,发病率之高居世界之冠,它严重地威胁着人民健康。要预防食管癌,研究食管癌病因是十分重要的。关于食管癌的病因,国外强调饮酒、吸烟、热食、亚(?)胺、微量元素缺乏、营养不足和遗传因素的作用。关于霉菌在食管癌病因学中的作用,仅南非有几篇研究粮食中霉菌毒素的报道。

交链孢酚单甲醚对食管癌旁上皮组织脂质过氧化的影响

用从林县粮食中分离的互隔交链孢霉提取材交链孢酚单甲醚(AME),对22例培养的食管癌患者的癌旁上皮组织进行了攻击。并用抗氧化剂维生素E做了抑制实验。结果发现:(1) AME可以使食管癌旁上皮组织的丙二醛含量升高,与对照组相比较有明显的统计学差异(P<0.01)。在实验浓度范围5～50μg/ml内,存在剂量效应关系(r=0.9740,P<0.025)。(2) 每毫升培养基加入25μg的AME一个小时后,丙二醛含量就升高,八个小时达到高峰,与对照组相比较有明显的差异(P<0.01)。(3) 加入抗氧化剂维生素E后,可以降低AME所诱发的组织中的丙二醛含量,实验组和对照组之间存在着明显的统计学差异(P<0.01)。实验结果说明:AME可以引发食管癌旁上皮组织的脂质过氧化,使丙二醛含量升高,维生素E可以降低这种变化。

交链孢酚和交链孢酚单甲醚对大鼠不同器官细胞DNA损伤的器官亲和性研究

用污染食管癌高发现场粮食的优势菌互隔交链孢霉(Alternaria alternata)的主要毒素交链孢酚(AOH)和交链孢酚单甲醚(AME),诱发大鼠不同器官细胞的程序外DNA合成(UDS)。结果表明,AOH及AME在最高有效浓度时,诱发肝细胞掺入指数分别为0.45及0.55;诱发食管上皮细胞掺入指数分别为2.32和1.75;诱发肺细胞掺入指数分别为1.7和1.05;该结果提示,AOH及AME对食管上皮细胞具有显著的器官亲和性,大鼠食管可能为AOH及AME的重要靶器官之一。

交链孢酚单甲醚对人胚食管DNA结合作用的研究及其结合键型的鉴别

应用吸收光谱分析法研究了交链孢酚单甲醚(Alterariol Monomethyl Ether,AME)对人胚食管DNA之间的结合作用并对结合的键型作了鉴别。研究表明,AME和DNA在37℃条件下,二者的最大吸收峰向长波方向明显位移。而且在AME和DNA结合之间存在剂量效应关系。AME和人胚食管DNA结合的最大分子比例(以AME:脱氧—磷酸核苷计)为5:1000,结合反应的平衡常数K=2.8×10~6,结合作用发生迅速而稳定。结合部位可能在碱基,无明显的碱基特异性。热变性DNA能结合更多的AME分子,说明二者的结合不需要DNA具有完整的二级结构。盐离子可严重干扰二者的结合,而脲对此则不产生明显影响,提示AME与DNA结合的主要键型为离子键而不是氢键型。AME与人胚食管DNA这种以离子键结合的方式可能在AME的诱变性/致癌性中起重要作用。

互隔交链孢霉素AME、AOH天然品、人工合成品TLC鉴定

霉菌毒素在肿瘤病因学中的作用日益受到人们的重视。互隔交链孢霉毒素是继黄曲霉毒素被证明具有致肝癌作用之后又一个引起肿瘤病因研究者关注的霉菌毒素。食管癌高发区林县粮食中互隔交链孢霉的污染率及其毒素的检出率均高于低发区商丘相应粮食中的污染率及其毒素检出率。该菌培养物的粗提物又具有诱变作用和细胞转化作用。

污染水果中霉菌的分离及毒性和微核试验

市场销售水果中,因不同程度的受霉菌污染而霉变,食用后对人体产生危害。如霉变后的梨可引起消化道过敏,类过敏性皮炎,食物中毒。为了解霉变水果的主要污染菌及其产毒致突作用,我们对霉变桔子、梨、苹果、西红柿和香蕉作了霉菌分离与鉴定,并以梨、桔子污染霉菌的提取物作了LD_(50)和微核试验。

交链孢酚单甲醚(AME)特异性抗体研制(Ⅰ)

交链孢霉是污染粮食、蔬菜、烟草等植物的常见霉菌,该霉菌能产生多种毒性代谢物,交链孢酚单甲醚(Alternariol Monomethyl Ether简称AME)是其中主要毒素之一,本文介绍了将AME重氮化,然后将AME偶氮化合物与牛血清白蛋白(BSA)进行交联制成完全抗原,用AME-BSA完全抗原免疫家兔制备抗AME抗体。并将AME标记上半乳糖苷酶,用标准AME与之竞争,通过ELISA竞争试验,绘出标准曲线图,证明所制备的抗AME抗体能与标准AME进行特异性结合,可用于粮食中AME含量的检测。

交链孢酚单甲醚对人胚肺2BS细胞DNA含量和细胞周期的影响

用显微分光光度计方法研究了食管癌高发区林县粮食中分离的优势污染菌互隔交链孢霉提取物交链孢酚单甲醚(AME)对人胚肺成纤维细胞(2BS株)的DNA含量和细胞周期的影响。结果发现:AME作用人胚肺2BS细胞两个倍增时间后,随着AME浓度的加大,G_1期细胞峰(2C细胞)降低,出现了较高的G_2+M期细胞峰(4C细胞),S期细胞增加,分裂指数降低.并出现了一些非整倍体的细胞,这些改变与对照组相比较有显著性差异。说明AME可以抑制人胚肺2BS细胞的周期,使S期细胞受阻,堆积和损伤,导致非整倍体细胞出现,这些将有可能成为细胞突变的遗传基础。从而为互隔交链孢霉与林县人食管癌的发生可能有一定关系的说法提供了实验佐证。

交链孢酚和交链孢酚单甲醚诱发人淋巴细胞DNA损伤的研究

用从食管癌高发区林县严重污染粮食的链格孢(Alternaria alternata)培养物中分离纯化的交链孢酚(AOH)和交链孢酚单甲醚(AME)诱发正常人外周血淋巴细胞程序外DNA合成(UDS)。结果表明:AOH及AME均可不同程度地诱发UDS,并发现AOH比AME作用更强。结果提示,AOH及AME可引起人外周血淋巴细胞DNA损伤,其提示与食管癌发生可能有关。

互隔交链孢霉菌对甲基苄基亚硝胺合成的影响

季川等,曾报道串株镰刀菌与异戊胺共同培养,然后加入亚硝酸钠可以形成致癌的甲基异戊基亚硝胺。杂色青霉、娄地青霉、圆弧青霉也有不同程度地促进亚硝胺的合成。目前国内外尚未见到互隔交链孢霉菌能否利用甲苄胺(BZA)和亚硝钠含成甲基苄基亚硝胺(NMBZA)的报道。

互隔交链孢霉提取物261-B_2-3在体外对DNA、RNA和蛋白质合成的影响

大多数化学致癌物均可影响DNA、RNA和蛋白质合成的过程。本文研究了从食管癌高发区林县粮食中分离出的互隔交链孢霉菌株261提取物261-B_2-3对这些大分子物质合成的影响。研究表明261-B_2-3对DNA和蛋白质的合成有明显的抑制,其作用强度呈明显的浓度相关性。但是它对RNA的合成无明显影响。三种大分子物质的合成对于261-B_2-3的敏感性顺序为:蛋白质>DNA>RNA。261-B_2-3对DNA和蛋白质抑制作用的类型和机理并不相同。在中止261-B_2-3的作用后,DNA的合成率持续下降,形成一谷值,属于模板损伤型,而蛋白质则呈递增型合成曲线,为干扰代谢型。261-B_2-3对大分子合成的干扰导致了细胞生物学和生化过程的紊乱,并有可能在诱变过程中起到一定作用。

分离互隔交链孢霉毒素最佳柱层析条件探讨

用薄层层析法对互隔交链孢霉粗提物进行了分析,了解其组成情况及各成分极性大小,然后用小型色谱法进行预试,选择到硅胶柱层析最佳洗脱系统,并为洗脱过程中监测分离效果和外环境中毒素的检测找到了简单可靠的方法。

林县互隔交链孢霉素x_4结构鉴定

从林县粮食中分离的优势菌株互隔交链孢霉培养物中提取出七种代谢物,对其中成份之一x_4,经质谱、红外光谱、核磁共振光谱测定,同时与标准品及人工合成品作比较,证明x_4成份是交链孢酚(Alternariol AOH)。