重组质粒HF443-EGFP的构建及其在赤潮毒素检测中的应用初探

采用基因工程的方法 ,进行重组质粒HF443 EGFP的构建和在哺乳动物细胞中的表达 ,并进行了其用于赤潮毒素检测的可能性研究。结果表明 ,用PCR技术扩增EGFP基因 ,用XbaⅠ、HindⅢ双酶切并纯化 ,与同样双酶切并纯化的HF443质粒连接 ,可构建重组质粒HF443 EGFP ;利用LipofectAMINE 2 0 0 0转染体外培养哺乳动物BIU 87细胞。在培养体系中加入不同浓度的GTX ,而后加入Na+通道激活剂乌头碱以诱导绿色荧光蛋白表达 ,荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白表达的变化情况。细胞发出的荧光随毒素浓度的增加而减弱 ,存在一定的剂量效应关系 ,提示毒素GTX可显著影响绿色荧光蛋白的表达 ,重组质粒HF443 EGFP用于赤潮毒素检测有一定的可行性。

c-fos启动子与GFP重组质粒的构建及在pc12细胞中的表达

目的:构建c-fos启动子与GFP的重组质粒载体,并使其在体外培养哺乳动物pc12细胞中表达.方法:XbaI、HindIII双酶切含c-fos启动子的HF443质粒,纯化后与同样双酶切的绿色荧光蛋白基因连接;利用LipofectAMINE2000将重组质粒转染体外培养哺乳动物pc12细胞.结果:加入Na+通道激活剂乌头碱后,转染后的pc12细胞可发出较强的绿色荧光.结论:c-fos启动子与GFP重组质粒构建成功,并可用于哺乳动物活细胞c-fos基因的检测.