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胸腺素α_1的DIC固相化学合成与鉴定 被引量:6
1
作者 甘一如 黄永东 +2 位作者 刘晋生 张雪竹 张贵峰 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第2期305-308,共4页
Thymosin α 1 was synthesized manually. The washing condition and the test of the degree of coupling were studied. In addition, the analytical method of crude product was set up. Thymosin α 1 was synthesized with the... Thymosin α 1 was synthesized manually. The washing condition and the test of the degree of coupling were studied. In addition, the analytical method of crude product was set up. Thymosin α 1 was synthesized with the solid-phase method, by using the base-liable Fmoc group to protect the α-amino acid and N,N′-diisopropylcarbodiimide (DIC) as the coupling regent. The crude product was analyzed by reversed-phase high performance liquid chromatography, SDS-PAGE and liquid chromatography/mass spectroscopy.The synthesis yield was 84.89%. The analytical results indicated that the crude product contained much thymosin α 1, and the purity was 50.3%. DIC solid-phase chemical synthesis of thymosin α 1 was applicable, and the yield was improved greatly compared to other known methods. 展开更多
关键词 胸腺素Α1 固相多肽合成 二异丙基碳二亚胺(DIC) 反相高效液相色谱法 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)法 液相色谱/质谱(LC/MS)
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低高径比喷射环流反应器结构的研究 被引量:5
2
作者 甘一如 张瑛 +2 位作者 吴鹏 陈越 胡宗定 《化学反应工程与工艺》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第3期268-274,共7页
在 70 L 低高径比釜式喷射环流反应器中,分别研究了单导流筒单喷咀、单导流筒多喷咀以及多导流筒多喷咀三种结构反应器的气液传质性能,得到了相应平均气含率和体积溶氧传质系数的关联式。研究结果表明多导流筒多喷咀是一种具有传... 在 70 L 低高径比釜式喷射环流反应器中,分别研究了单导流筒单喷咀、单导流筒多喷咀以及多导流筒多喷咀三种结构反应器的气液传质性能,得到了相应平均气含率和体积溶氧传质系数的关联式。研究结果表明多导流筒多喷咀是一种具有传质效率高、能耗低和便于放大的高效生化反应器。此外,还研究了 800 L多导流筒多喷咀结构反应器,得到体积溶氧传质系数关联式。 展开更多
关键词 喷射环流反应器 低高径比 反应器 结构 发酵罐
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应用液相色谱法分离纯化固相化学合成胸腺素α_1 被引量:4
3
作者 甘一如 黄永东 吴蕾 《磁流体发电情报》 EI CAS 2004年第3期497-500,共4页
By using ion-exchange preparative chromatography (IEPC) and reversed-phase high performance liquid preparative chromatography(RP-HPLPC), thymosin α 1 was isolated and purified from the crude product synthesized by th... By using ion-exchange preparative chromatography (IEPC) and reversed-phase high performance liquid preparative chromatography(RP-HPLPC), thymosin α 1 was isolated and purified from the crude product synthesized by the solid-phase peptide synthesis(SPPS) method. The purity of the final product reached 95% through ion-exchange chromatography on DEAE Sepharose Fast Flow chromatography and Delta-Pak TM C18 purification after optimizing the chromatographic conditions. The capacity of purification process was 50mg/circle. The total yield was 36%. The technology is simple and reliable, and can be scaled up easily. 展开更多
关键词 胸腺素Α1 液相色谱法 分离 纯化 固相化学合成
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固定床催化反应器参数敏感性的研究进展 被引量:2
4
作者 甘一如 吴鹏 +1 位作者 陈建新 李绍芬 《化工进展》 EI CAS CSCD 1999年第3期36-39,共4页
对于在固定床催化反应器中进行的强放热反应,当初始条件达到或超过某一限度时,反应系统瞬间产生的热量超过了反应系统本身所能承受的限度或负荷,造成热点温度急剧升高,导致反应系统失去控制,对反应的转化率、选择性以及催化剂的活性和... 对于在固定床催化反应器中进行的强放热反应,当初始条件达到或超过某一限度时,反应系统瞬间产生的热量超过了反应系统本身所能承受的限度或负荷,造成热点温度急剧升高,导致反应系统失去控制,对反应的转化率、选择性以及催化剂的活性和寿命等都有不良影响。对反应系统参数敏感性的研究,实质上就是从理论上揭示出反应系统安全操作上限,使之由于温度升高引起的不良后果能在反应器的设计中和操作前就能避免。文中对上述问题进行了详尽而完整的概括,对今后的发展提出了建议。 展开更多
关键词 固定床 催化反应器 飞温 参数敏感性 化工设备
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重组人白细胞介素-6融合蛋白的大肠杆菌发酵工艺
5
作者 甘一如 胡飞雄 +2 位作者 张瑛 林峰 马兰芳 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 1999年第5期82-85,共4页
研究了重组大肠杆菌表达人白细胞介素-6(rhIL-6)融合蛋白的发酵工艺。摇瓶实验对比了不同培养基对重组菌密度和rhIL-6表达量的影响,确定了以含0.1%葡萄糖的2×YT培养基为最适培养基。同时,还对诱导剂异丙基疏基半乳糖苷(IPTG)加入... 研究了重组大肠杆菌表达人白细胞介素-6(rhIL-6)融合蛋白的发酵工艺。摇瓶实验对比了不同培养基对重组菌密度和rhIL-6表达量的影响,确定了以含0.1%葡萄糖的2×YT培养基为最适培养基。同时,还对诱导剂异丙基疏基半乳糖苷(IPTG)加入量进行优化,按每升发酵液加入0.02mmol,就能有效诱导rhIL-6的表达。在10 L发酵罐间歇实验中,以含0.1%葡萄糖的2×YT为培养基,比较了溶氧、pH、诱导前培养时间、诱导后培养时间对rhIL-6的表达量和菌密度的影响,得到最优培养条件为pH为6.8~7.0,接种量4%,温度37℃,诱导前溶氧量30%,在O.D._(600)为1.2~1.8时加入IPTG诱导,控制诱导后溶氧为5%~10%,再培养5 h,最终rhIL-6表达量为38%,菌体密度为5.8 g/L。 展开更多
关键词 人白细胞介素-6 融合蛋白 发酵 重组大肠杆菌 化学诱导
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存在轴向扩散时固定床反应器的参数敏感性和飞温现象(英文)
6
作者 甘一如 樊勇 吴鹏 《Transactions of Tianjin University》 EI CAS 1998年第1期42-48,共7页
对固定床反应器存在轴向扩散的情况进行了研究,通过临界等扩散曲线得到飞温判据.计算结果表明:当轴向扩散相对较小时,轴向扩散对参数敏感性的影响可以忽略;但是,当轴向扩散相对较大时,轴向扩散对参数敏感性的影响显著,必须考虑.
关键词 一维均相扩散模型 等扩散最大值曲线 参数敏感性和飞温 飞温判据
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固定化分子伴侣GroE促进变性溶菌酶复性的研究 被引量:11
7
作者 董晓燕 杨晖 +2 位作者 甘一如 白姝 孙彦 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期169-172,共4页
利用重组大肠杆菌表达制备了分子伴侣GroE(GroEL和GroES),研究了GroE以及GroEL辅助变性溶菌酶复性的作用。结果表明,不仅游离GroEL单独作用可使溶菌酶复性收率达到90%以上,而且固定化GroEL亦可有效地促进蛋白质复性,最佳复性温度为37℃... 利用重组大肠杆菌表达制备了分子伴侣GroE(GroEL和GroES),研究了GroE以及GroEL辅助变性溶菌酶复性的作用。结果表明,不仅游离GroEL单独作用可使溶菌酶复性收率达到90%以上,而且固定化GroEL亦可有效地促进蛋白质复性,最佳复性温度为37℃,最佳pH值范围为6~8,复性酶的活性收率在85%以上。另外,固定化GroEL可反复回收利用,表明固定化GroEL有可能在实际生物下游过程中得到应用。 展开更多
关键词 分子伴侣 GroEL/ES 固定化 溶菌酶 复性
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高压匀浆破碎释放重组大肠杆菌提取包含体过程的研究 被引量:11
8
作者 吴蕾 洪建辉 +1 位作者 甘一如 张瑛 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第2期191-194,共4页
用高压匀浆机对重组大肠杆菌细胞进行破碎以释放重组人白细胞介素-6(rhIL-6)包含体,系统研究了高压匀浆过程中物理和化学因素的影响,包括匀浆次数,操作压力,料液的pH 及悬浮体系的影响。从而选择操作压力为80MPa,悬浮体系为去离子... 用高压匀浆机对重组大肠杆菌细胞进行破碎以释放重组人白细胞介素-6(rhIL-6)包含体,系统研究了高压匀浆过程中物理和化学因素的影响,包括匀浆次数,操作压力,料液的pH 及悬浮体系的影响。从而选择操作压力为80MPa,悬浮体系为去离子水,经3次破碎,表达量为20%的菌体可获得粗包含体的纯度约为40%。此外,本文还对该高压匀浆破碎过程进行了动力学分析。 展开更多
关键词 高压匀浆 重组人白细胞介素-6 重组大肠杆菌 动力学 包含体 破碎
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超声破碎重组大肠杆菌释放包含体的过程研究 被引量:15
9
作者 吴蕾 雷鸣 +1 位作者 洪建辉 甘一如 《化学工业与工程》 CAS 2002年第6期422-425,共4页
重组人白细胞介素 (rhIL - 6 )基因表达产物在大肠杆菌的细胞浆中以包含体的形式存在。用超声破碎法提取rhIL - 6包含体系统研究了该过程中的物理和化学因素 ,包括破碎时间 ,输出功率 ,菌体浓度 ,缓冲液pH值 ,菌体冻融及悬浮液体系等。... 重组人白细胞介素 (rhIL - 6 )基因表达产物在大肠杆菌的细胞浆中以包含体的形式存在。用超声破碎法提取rhIL - 6包含体系统研究了该过程中的物理和化学因素 ,包括破碎时间 ,输出功率 ,菌体浓度 ,缓冲液pH值 ,菌体冻融及悬浮液体系等。得到了破碎提取包含体的最适条件为 :超声功率 4 80W ,菌体浓度为 1 0 0g L左右。在去离子水中经过 1 5min超声破碎 ,表达量为 2 0 %的菌体可获得包含体的含量为 4 0 %(质量分数 ,下同 ) 展开更多
关键词 超声破碎 重组大肠杆菌 释放 包含体 重组人白细胞介素-6
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液相色谱电化学法检测猪肉及肝中残留的盐酸克伦特罗(英文) 被引量:9
10
作者 张雪竹 甘一如 赵福年 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期276-280,共5页
目的 建立高效液相色谱 库仑阵列电化学系统检测猪肉及肝中残留的克伦特罗。方法 猪肉及肝脏样品经处理后 ,用高效液相色谱法 电化学检测器测定残留的克伦特罗。流动相A为 50mmol·L- 1磷酸 3 0mmol·L- 1三乙胺 (pH 4 0 ... 目的 建立高效液相色谱 库仑阵列电化学系统检测猪肉及肝中残留的克伦特罗。方法 猪肉及肝脏样品经处理后 ,用高效液相色谱法 电化学检测器测定残留的克伦特罗。流动相A为 50mmol·L- 1磷酸 3 0mmol·L- 1三乙胺 (pH 4 0 ) ;流动相B为甲醇 乙腈 (3 0∶45) ;组成为A∶B =80∶2 0。实验中选用了 4个电极 ,电势分别为 450 ,60 0 ,650和 680mV。结果 校正曲线在 1 88~ 60 16ng·g- 1,线性良好 ,最低检测限均为 1 2ng·g- 1。结论 该法实用且精密准确 。 展开更多
关键词 液相色谱电化学法 检测技术 猪肉 猪肝 药物残留 盐酸克伦特罗
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胸腺素α1的Fmoc固相合成法 被引量:10
11
作者 吴蕾 韩香 +1 位作者 甘一如 黄鹤 《化学工业与工程》 CAS 2001年第6期323-330,共8页
本文用Fmoc固相方法合成了胸腺素α1。采用对碱敏感的Fmoc作为α -氨基的保护基 ,并确定与之配套的侧链保护策略。探索出了适宜的接肽方案 ,即前 9步接肽用对称酸酐法 ,后 1 8步用DCC -HOBt缩合法 ,从而保证了每步的高缩合率。试验结果... 本文用Fmoc固相方法合成了胸腺素α1。采用对碱敏感的Fmoc作为α -氨基的保护基 ,并确定与之配套的侧链保护策略。探索出了适宜的接肽方案 ,即前 9步接肽用对称酸酐法 ,后 1 8步用DCC -HOBt缩合法 ,从而保证了每步的高缩合率。试验结果表明各步的缩合率均在 96 2 %以上 ,多数达 99%以上。同时还对合成工艺条件进行了研究。合成粗品的纯度 (胸腺素α1的含量 )为 46 52 % (质量分数 ) ,胸腺素收率为 37 81 % 展开更多
关键词 N^α-芴甲氧羰基 FMOC 固相多肽合成 胸腺素Α1
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一种用于谷氨酸生产流加操作过程预测的模糊-神经网络 被引量:6
12
作者 元英进 苗志奇 +2 位作者 秦家庆 韩金玉 甘一如 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 1997年第5期553-559,共7页
提出了一种子空间可调的模糊-神经网络(FNN),通过采用新型的网络结构设计、模糊子空间均匀化设计和模糊子空间可调性设计,提高了网络的模拟、预测精度,明显缩短了训练时间.通过可调模糊-神经网络可以对系统进行预测、优化及因素分析,并... 提出了一种子空间可调的模糊-神经网络(FNN),通过采用新型的网络结构设计、模糊子空间均匀化设计和模糊子空间可调性设计,提高了网络的模拟、预测精度,明显缩短了训练时间.通过可调模糊-神经网络可以对系统进行预测、优化及因素分析,并将所提出的模糊神经网络应用于谷氨酸流加发酵过程的模拟与预测,取得了满意的结果. 展开更多
关键词 神经网络 流加操作 发酵 谷氨酸 模糊集
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液相色谱法分离纯化固相合成的胸腺素α1 被引量:7
13
作者 黄鹤 万里鹏 +1 位作者 吴蕾 甘一如 《化学工业与工程》 CAS 2001年第6期331-335,353,共6页
本文为以Fmoc(Nα-芴甲氧羰基 )固相合成法制备的胸腺素α1粗品提出了一条实验室规模的液相色谱法纯化路线 ,共分两步 :第一步采用DEAESepharoseFastFlow填料进行离子交换层析操作 ,分离除去粗品中的大部分杂质 ;第二步用制备型反相高... 本文为以Fmoc(Nα-芴甲氧羰基 )固相合成法制备的胸腺素α1粗品提出了一条实验室规模的液相色谱法纯化路线 ,共分两步 :第一步采用DEAESepharoseFastFlow填料进行离子交换层析操作 ,分离除去粗品中的大部分杂质 ;第二步用制备型反相高效液相色谱 (用C1 8色谱柱 )进行最后的纯化。终产物纯度可达 95% ,生物活性符合实验指标。 展开更多
关键词 胸腺素Α1 固相合成多肽 离子交换层析 反相高效液相层析 分离纯化
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重金属的生物吸附 被引量:77
14
作者 陈旻 甘一如 《化学工业与工程》 CAS 1999年第1期19-25,共7页
本文介绍了生物吸附重金属的原理及其应用研究现状。总结了生物吸附剂的来源及其预处理方法;
关键词 生物吸附 重金属 预处理 废水处理
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紫杉醇纳米粒注射液在荷瘤小鼠体内的组织分布及抗肿瘤作用 被引量:7
15
作者 高彦慧 厉保秋 +3 位作者 甘一如 董欣 程秀民 赵燕彪 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2006年第8期823-826,830,共5页
目的:研究抗癌药物紫杉醇纳米粒注射液在荷瘤小鼠体内的组织分布及抗H22肝癌的作用。方法:将昆明种小鼠前肢腋皮下接种H22肝癌细胞,待瘤体长到1 g,分别尾静脉注射紫杉醇纳米粒注射液及市售紫杉醇注射液,采用液相色谱-质谱-质谱联用的方... 目的:研究抗癌药物紫杉醇纳米粒注射液在荷瘤小鼠体内的组织分布及抗H22肝癌的作用。方法:将昆明种小鼠前肢腋皮下接种H22肝癌细胞,待瘤体长到1 g,分别尾静脉注射紫杉醇纳米粒注射液及市售紫杉醇注射液,采用液相色谱-质谱-质谱联用的方法测定荷瘤小鼠体内不同组织中紫杉醇的含量。结果:两种不同制剂的紫杉醇主要分布于胰腺、卵巢、脾脏,其抗肿瘤作用以2.5 mg/kg的紫杉醇纳米粒注射液更有效;紫杉醇纳米粒注射液在胰腺、卵巢、脾脏、实体瘤中的分布明显高于紫杉醇注射液(P<0.05);其它组织器官分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论:两种紫杉醇注射液均有明显抗肿瘤作用,但紫杉醇纳米粒注射液在胰腺、卵巢、实体瘤的靶向性高于紫杉醇注射液,其分布与疗效有一定关联性。 展开更多
关键词 紫杉醇 纳米粒 液相色谱-质谱-质谱 组织分布
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胸腺素a_1的分离纯化 被引量:5
16
作者 韩香 顾军 +1 位作者 苑庆兰 甘一如 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期335-337,共3页
化学合成胸腺素a1采用阴离子交换色谱和制备型RP-HPLC两步纯化。阴离子交换色谱以pH8.0的Tris-HCl为缓冲液,0~0.35mol/L NaCl溶液离子强度梯度洗脱;制备型RP-HPLC采用C18柱,流动相A为0.1%三氟乙酸-H2O,流动相B为0.1%三氟乙酸-90%乙腈,... 化学合成胸腺素a1采用阴离子交换色谱和制备型RP-HPLC两步纯化。阴离子交换色谱以pH8.0的Tris-HCl为缓冲液,0~0.35mol/L NaCl溶液离子强度梯度洗脱;制备型RP-HPLC采用C18柱,流动相A为0.1%三氟乙酸-H2O,流动相B为0.1%三氟乙酸-90%乙腈,线形梯度10%~35%B,0~60min洗脱,流速2.0ml/min,检测波长214nm。纯化结果采用分析型RP-HPLC和Tricine-SDS-PAGE检测,终产物纯度达98.8%以上。 展开更多
关键词 芴甲氧羰基(Fmoc) 固相多肽合成 胸腺素Α1 纯化:阴离子交换色谱 反相高效液相色
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人胸腺肽α_1的固相合成及体外活性研究 被引量:6
17
作者 韩香 顾军 +1 位作者 苑庆兰 甘一如 《中国药物化学杂志》 CAS CSCD 2004年第1期27-29,共3页
目的对胸腺肽α1的固相合成工艺进行研究 ,并对合成产物进行活性评价。方法采用对碱敏感的Nα 芴甲氧羰基 (Fmoc)作为α 氨基的保护基 ,以Fmoc Asn(Trt) WangResin为起点 ,逐个延伸固相合成法合成胸腺肽α1。与Nα Fmoc 基团配套的保... 目的对胸腺肽α1的固相合成工艺进行研究 ,并对合成产物进行活性评价。方法采用对碱敏感的Nα 芴甲氧羰基 (Fmoc)作为α 氨基的保护基 ,以Fmoc Asn(Trt) WangResin为起点 ,逐个延伸固相合成法合成胸腺肽α1。与Nα Fmoc 基团配套的保护策略还有 :叔丁氧羰基 (Boc)保护Lys的侧链氨基 ,叔丁酯基 (OtBu)保护Asp、Glu的侧链羧基 ,叔丁氧基 (tBu)保护Ser、Thr的侧链羟基 ,三苯甲基 (Trt)保护Asn的侧链酰胺基。采用DCC HOBt缩合剂法进行接肽反应 ,茚三酮定性显色法和水杨醛定量自由氨基检测法控制反应进程 ,肽段最后用TFA DCM(V∶V=1∶1 )定量地从树脂上切除。结果胸腺肽α1总产率为 3 3 2 %。纯化后的产物 ,经SDS PAGE和RP HPLC鉴定 ,纯度为98 8%以上 ,活性与日达仙对照品相当。结论Nα 芴甲氧羰基保护策略的固相合成方法操作简便、条件温和、副反应少 ,产品纯度高、收率高。 展开更多
关键词 药物化学 制备 固相多肽合成 胸腺肽Α1 N^α-芴甲氧羰基(Fmoc)
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反相高效液相色谱法分析化学合成胸腺素α_1 被引量:5
18
作者 黄永东 甘一如 韩彦丽 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第7期927-929,共3页
利用反相高效液相色谱 (RP HPLC)法 ,对化学合成的胸腺素α1进行了分析。采用PLATINUMC18柱 (2 5 0mm× 4 .6mmi.d .,5 μm ,10nm) ,柱温 :室温 ;流动相A :10 0 %H2 O(含 0 .1%TFA) ;B :90 %乙腈水 (含0 .1%TFA) ,18%B A的等梯度洗... 利用反相高效液相色谱 (RP HPLC)法 ,对化学合成的胸腺素α1进行了分析。采用PLATINUMC18柱 (2 5 0mm× 4 .6mmi.d .,5 μm ,10nm) ,柱温 :室温 ;流动相A :10 0 %H2 O(含 0 .1%TFA) ;B :90 %乙腈水 (含0 .1%TFA) ,18%B A的等梯度洗脱 ;流速为 1mL/min ;检测波长为 2 14nm ;进样量为 2 0 μL。用外标法定量。实验结果表明 ,该测定方法的检出限为 4mg/L ;平均回收率为 95 .8% ;日内精密度 (用相对标准偏差RSD表示 )均在 10 %以内 ,胸腺素α1在选定的浓度范围内具有良好的线性相关性。该方法简便、快速、准确 ,2 0min内就可以完成一个样品的分析 ,故对胸腺素α1的定量分析具有重要的实用价值。 展开更多
关键词 化学合成 胸腺素Α1 反相高效液相色谱法 固相多肽合成 辅助性药物 含量测定
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低高径比喷射环流生化反应器流体力学和发酵性能的研究 被引量:6
19
作者 吴鹏 甘一如 胡宗定 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第2期190-195,共6页
对高径比s≤2.5喷射环流生化反应器的流体力学和传质特性进行了系统的研究,选出反应器的最佳结构,关联出氧的体积传递系数(k_La)表达式。在此基础上,进行了谷氨酸发酵试验,摸索出用该设备进行谷氨酸发酵的最佳工艺条件,使5批一次性投糖... 对高径比s≤2.5喷射环流生化反应器的流体力学和传质特性进行了系统的研究,选出反应器的最佳结构,关联出氧的体积传递系数(k_La)表达式。在此基础上,进行了谷氨酸发酵试验,摸索出用该设备进行谷氨酸发酵的最佳工艺条件,使5批一次性投糖发酵的糖酸转化率达到50%以上。 展开更多
关键词 喷射环流反应器 流体力学 发酵 性能
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牛肠激酶轻链基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达 被引量:5
20
作者 黄鹤 甘一如 孙彦 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期685-690,共6页
为克隆表达牛肠激酶(enterokinase)轻链(EKL)编码基因,以期应用于融合蛋白的切割与纯化,从市售北方黄牛十二指肠组织中提取总RNA,以RT PCR方法扩增其cDNA片段,将此片段克隆于pUCmT载体中,经过特异性限制性内切酶酶切分析片段正确后,进... 为克隆表达牛肠激酶(enterokinase)轻链(EKL)编码基因,以期应用于融合蛋白的切割与纯化,从市售北方黄牛十二指肠组织中提取总RNA,以RT PCR方法扩增其cDNA片段,将此片段克隆于pUCmT载体中,经过特异性限制性内切酶酶切分析片段正确后,进行全序列分析。结果表明,克隆的cDNA与GenBank上的序列相比完全一致,得到了编码正确的牛肠激酶轻链基因全序列。随后,将目的基因片段插入pET39b中,构建了融合型表达载体pET39b EKL,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。所获得的pET39b EKL经过酶切鉴定和测序,证实其插入方向、读码框架正确,所表达重组蛋白经SDS PAGE分析,相对分子量为65kDa,表达量达28%,通过镍亲和层析纯化得到融合蛋白DsbA rEKL的单一条带。该粗酶经脱盐后在适宜的缓冲体系中21℃温育过夜,显示出较高的自催化切割活性,为进一步进行重组牛肠激酶活性的研究及应用奠定了基础。 展开更多
关键词 牛肠激酶轻链 克隆 表达 自催化切割 基因
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