吸烟慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织内质网相关凋亡基因Caspase-12的表达

目的观察吸烟COPD模型大鼠肺组织内质网相关凋亡基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)的基因和蛋白表达。方法 40只成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、吸烟2个月组、吸烟4个月组及戒烟1个月组。采用单纯被动吸烟法复制大鼠COPD模型。检测各组大鼠第0.3秒用力呼气容积与用力肺活量比值(FEV0.3/FVC)和呼气峰流速(PEF)。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺内Caspase-12 mRNA表达,免疫组化、Western blot检测其蛋白表达,荧光酶标法检测其活性。结果大鼠吸烟2个月后,肺功能较对照组明显下降(P<0.05),肺结构出现破坏;吸烟4个月后,FEV0.3/FVC显著下降(P<0.05),肺结构破坏明显;戒烟1个月组肺功能较吸烟4个月组稍好转,肺结构破坏仍明显(P>0.05)。与对照组比较,Caspase-12表达及活性在吸烟2个月大鼠模型中升高(P<0.05),在吸烟4个月大鼠中明显升高(P<0.05),在戒烟1个月组较吸烟4个月组稍下降但无显著差异(P>0.05)。结论吸烟能够诱导肺内内质网相关凋亡基因Caspase-12表达增加,促进COPD的发生与发展。

现代企业生产外包风险及对策研究

回顾过去十年中国制造发展,伴随我国制造业崛起和制造规模不断壮大,越来越多企业开始采用生产外包来完成快速增长的业务量。生产业务外包的合理运用,可以大大降低企业制造成本,支持业务快速发展,提升企业核心竞争优势。但同时企业也必将面临很多挑战并为此付出一定代价。为控制和降低由此给企业带来的风险,企业在生产外包过程中必须制定组织机构重组、控制生产外包的比例规模、监控体系持续完善、加强供应商合作等应对策略,以进一步增强企业核心竞争优势。

吸烟COPD模型大鼠肺组织内质网相关凋亡蛋白CHOP的表达

目的:研究吸烟所致慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺组织CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的情况。方法:40只成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、吸烟2个月组、吸烟4个月组及戒烟组。采用单纯被动吸烟法复制大鼠COPD模型,测各组大鼠0.3秒用力呼气容积与用力肺活量比(FEV0.3/FVC)和最高峰值流速(PEF);采用TUNEL法检测肺结构细胞凋亡情况;采用原位杂交和RT-PCR检测肺组织CHOP的mRNA表达水平;免疫组化和Western blot检测其蛋白质水平;同时采用Western blot检测蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、p-PERK、真核生物起始因子(e IF)2α和p-e IF2α的蛋白水平。结果:大鼠吸烟2个月后,肺功能较对照组明显下降(P<0.05),肺结构细胞凋亡明显增加,凋亡细胞主要是肺泡上皮细胞、血管内皮细胞和支气管上皮细胞,肺结构出现破坏;吸烟4个月后,FEV0.3/FVC显著下降(P<0.05),肺结构凋亡细胞进一步增加,肺结构破坏明显;戒烟组肺功能较4个月组稍好转,肺结构破坏仍明显。与对照组相比,p-PERK、p-e IF2α和CHOP表达在吸烟2个月大鼠中升高(P<0.05),在吸烟4个月大鼠中进一步升高(P<0.05);戒烟组大鼠CHOP较吸烟4个月大鼠稍下降但差异无统计学意义;PERK和e IF2α在各组大鼠中表达的差异无统计学显著性。肺结构细胞凋亡与CHOP表达呈正相关;结论:吸烟可通过PERK/e IF2α/CHOP信号通路促进CHOP表达,从而促进COPD的发生与发展。

如何做好后进生的转化工作

一直以来,后进生始终是困扰教育的难题之一,对后进生的研究虽由来已久,但随着时代的发展也不断地出现新的问题和挑战。初中生的基础和各方面的能力存在着较大的差距。如何大面积提高教学质量,实现后进生的有效转化,推进科学教学质量,是每位老师必须面对的难题。下面是本人在这方面的几点探索,期与同行们一起讨论。一、加强思想教育,使后进生＂认定目标＂后进生容易受到社会不良风气的影响,认为学与不学一个样,抱有混学的态度。

吸烟COPD患者中内质网相关凋亡基因CHOP表达研究

目的:观察吸烟慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者中内质网相关凋亡基因肺内CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)基因和蛋白表达。方法:通过肺癌肺叶切除手术收集不吸烟非COPD、吸烟非COPD、吸烟COPD患者肺组织标本各10例;细胞凋亡情况选用TUNEL法检测,CHOP mRNA表达水平选用原位杂交和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测,CHOP蛋白的表达水平选用免疫组织化学和Western-blot方法检测。结果:TUNEL结果显示凋亡细胞主要是肺泡上皮细胞,血管内皮细胞和支气管上皮细胞。对照组人群肺组织的凋亡率最低(13.5±2.4)%,在吸烟非COPD组人群较对照组明显升高[(25.5±1.7)%比(13.5±2.4)%,P<0.05],在吸烟COPD组人群中则进一步明显升高[(32.0±2.9)%比(25.5±1.7)%,P<0.05],CHOP的表达在吸烟非COPD患者中明显增加,在吸烟COPD患者中则进一步增加。结论:吸烟能够诱导COPD患者肺内内质网相关凋亡基因CHOP表达增加,从而促进COPD的发生、发展。

Runt相关转录因子1调控上皮间质转化在卷烟烟雾诱导的气道上皮细胞中的作用

目的通过研究Runt相关转录因子1(Runt-related transcription factor 1,RUNX1)在经卷烟烟雾提取物(cigarette smoking extract,CSE)刺激的大鼠气道上皮细胞中的表达,探讨RUNX1对上皮–间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的调控作用。方法采用酶消化法提取大鼠的原代支气管上皮细胞,并用不同浓度的CSE进行刺激,采用CCK-8检测细胞的活性,探索合适的CSE处理浓度。用CSE处理细胞后,构建RUNX1干扰和过表达载体,转染入细胞,使RUNX1基因沉默或过表达,用免疫细胞化学法检测RUNX1蛋白的表达,用蛋白印迹法检测RUNX1、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、转录因子Snail、上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)以及间质细胞标志物波形蛋白(vimentin,VIM)的表达。结果支气管上皮细胞的活力可被CSE降低,且降低程度与CSE的浓度成正比。通过CSE的诱导,原代大鼠支气管上皮细胞E-cad表达水平显著降低(P<0.05),RUNX1、NF-κB、Snail、VIM的表达水平明显升高(均P<0.05)。干扰RUNX1基因后,E-cad表达上调(P<0.05),NF-κB、Snail、VIM的表达下调(均P<0.05)。而过表达RUNX1后,E-cad的表达下调(P<0.05),NF-κB、Snail、VIM的表达上调(均P<0.05)。结论CSE可促进气道上皮细胞RUNX1的表达,RUNX1通过NF-κB/Snail通路调控EMT的进程。

内质网应激与慢性阻塞性肺疾病

内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）反应是由于多种应急原引起的细胞内质网功能障碍，导致内质网腔内错误折叠、未折叠蛋白聚集和钙离子平衡紊乱，细胞为恢复内质网功能而进行的一系列调节反应。ERS广泛参与多种疾病的发病机制，是一把介导细胞适应性生存和凋亡／自噬的双刃剑。肺结构细胞凋亡是慢性阻塞性肺疾病发生、发展的重要机制。近年的研究表明，ERS在慢性阻塞性肺疾病肺结构细胞凋亡机制中发挥了重要的作用。

体外膈肌起搏对稳定期慢性阻塞性肺疾病患者的康复作用

目的评估体外膈肌起搏治疗对稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺通气功能、动脉血气、运动耐受能力及生活质量的影响。方法筛选出2017年1月至2018年2月在湖南省人民医院就诊过的稳定期COPD患者34例。按照GOLD2017慢性阻塞性肺疾病指南肺功能分级标准和综合评估分组标准进行亚组划分,均给予20d的体外膈肌起搏治疗。体外膈肌起搏治疗前后对患者进行CAT评分和mMRC评分,行肺通气功能检查和动脉血气分析检测,测定6分钟步行距离,采用自身前后对照分析评估治疗效果。结果(1)第1秒用力呼气容积(FEVJ变化:中度组、B组患者FEW治疗前后差异无统计学意义(t=1.78、2.47,P值均>0.05),重度组、极重度组、C组、D组患者治疗后FEV1较治疗前上升(t=6.81、11.15、3.07、7.22,P值均<0.05)。(2)PaO2变化:中度组、重度组、B组、C组患者治疗前后PaO2差异无统计学意义(t=2.27、0.77、1.53、0.15,P值均>0.05);极重度组、D组患者治疗后PaO2较治疗前上升(t=2.98、3.08,P值均<0.05)。(3)PaCO2变化:所有患者治疗后PaCO2均较治疗前下降(r=5.97、8.22、6.82、5.28、5.64、7.45,P值均<0.05)。(4)6分钟步行距离变化:所有患者治疗后6分钟步行距离均较治疗前增加(t=2.84、9.11、8.16、3.70、5.27、7.68,P值均<0.05)。(5)CAT评分变化:所有患者治疗后CAT评分均较治疗前降低(t=4.10、7.67、11.13、7.05、2.91.11.90,P值均<0.05)。(6)mMRC评分变化:中度组、E组、C组治疗前后mMRC评分差异无统计学意义(t=1.51、1.00、0,P值均>0.05),重度组、极重度组、D组患者治疗后mMRC评分较治疗前下降(t=2.74、3.00、5.34,P值均V0.05)。结论体外膈肌起搏治疗可以改善稳定期COPD患者的肺通气功能和动脉血气指标,减轻患者的疾病症状,提高患者的运动耐受能力,肺通气功能受损严重和症状严重的患者获益更多。

烟草烟雾诱导的慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肺组织中Derlin-1表达

吸烟是导致慢性阻塞性肺疾病（简称慢阻肺）的主要危险因素。烟草烟雾中的氧化性物质可导致肺结构细胞发生内质网应激，过度的内质网应激可引起肺结构细胞凋亡，从而促进慢阻肺的发生与发展。Derlin-1是位于内质网的跨膜蛋白，与内质网相关性降解有密切关系。本研究采用免疫组织化学法、Western blot法和聚合酶链反应检测烟草烟雾暴露大鼠模型的Derlin-1表达，为慢阻肺发病机制研究提供实验资料。

细菌感染/定植诱导慢性阻塞性肺疾病患者痰β-防御素2表达

目的:初步探讨下呼吸道细菌感染/定植对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者痰β-防御素2(BD-2)表达水平的影响。方法:36例戒烟COPD患者和30名不吸烟/戒烟对照人员纳入研究。在COPD患者的急性加重期和稳定期分别采集自然痰进行普通细菌培养(简称痰培养),并行细胞分类计数和BD-2浓度测定;采集对照人员诱导痰行细胞分类计数和BD-2浓度测定以资对照。结果:COPD患者急性加重期和稳定期痰培养阳性比例分别为30/36和14/36。COPD患者痰细胞总数和中性粒细胞比例、淋巴细胞比例高于对照组而巨噬细胞比例低于对照组;痰菌阳性和痰菌阴性的急性加重期COPD患者痰细胞总数、巨噬细胞比例、中性粒细胞比例分别为(6.0±0.9)×106/g、(23.6±3.9)%、(66.0±5.9)%和(3.1±0.5)×106/g、(34.3±4.3)%、(55.7±4.4)%,痰菌阳性和痰菌阴性的稳定期COPD患者痰细胞总数、巨噬细胞比例、中性粒细胞比例、淋巴细胞比例分别为(4.4±0.8)×106/g、(28.6±6.4)%、(64.0±7.2)%和(3.0±0.5)×106/g、(41.4±5.7)%、(45.4±5.1)%。COPD患者稳定期痰BD-2浓度[(211±98)ng/L]低于急性加重期[(300±83)ng/L]而高于对照组[(127±41)ng/L];痰菌阳性稳定期COPD患者痰BD-2浓度高于对照组而与急性加重期无统计学差异;痰菌阴性稳定期COPD患者痰BD-2浓度低于急性加重期而与对照组无统计学差异。结论:下呼吸道细菌感染/定植是COPD患者痰BD-2表达升高的重要诱导因素,也是COPD患者急性加重发作的重要原因。