内科胸腔镜下氩气等离子热消融术治疗难治性气胸的疗效分析

目的:观察内科胸腔镜氩气等离子热消融术(APC)治疗难治性气胸的疗效。方法:选取2012—2016年因反复气胸入住广西医科大学第二附属医院呼吸内科的难治性气胸12例患者,采用APC对Ⅱ型和Ⅲ型肺大疱进行凝固治疗,合并有黏连带者采用高频电切和活检钳钳咬对黏连带进行松解。术后随访1年(每半年复查1次胸片),观察同侧气胸近期有效率及远期有效率。结果:12例患者中,肺大疱位于下肺者10例,位于上肺者2例,其中Ⅱ型大疱9例,Ⅲ型大疱3例,共计发现肺大疱数58个。10例呈弥漫性表现,2例为单个薄壁透明状大疱。APC治疗肺大疱引起的气胸近期有效率100%,随访患者1年未见复发,远期有效率100%。结论:内科胸腔镜下APC治疗难治性气胸的疗效确切,安全有效、操作简便快捷,具有临床推广应用价值。

过表达血红素加氧酶-1对低氧训练小鼠骨骼肌纤维组成的影响

目的探讨过表达血红素加氧酶-1(Heme Oxygenase-1,HO-1)对低氧训练小鼠骨骼肌纤维组成的影响。方法将8 w雄性过表达HO-1转基因小鼠和野生小鼠分为6组:野生小鼠低氧静息组(C)、过表达HO-1转基因小鼠低氧静息组(H)、野生小鼠低氧训练30 d组(C+T30)、野生小鼠低氧训练60 d组(C+T60)、过表达HO-1转基因小鼠低氧训练30 d组(H+T30)和过表达HO-1转基因小鼠低氧训练60 d组(H+T60)。低氧训练(海拔2261m。20m/min,坡度5°,60min/d,5d/w,30d和60d)结束后记录各组小鼠力竭运动时间;行ATP酶染色后计算各型肌纤维的面积百分比;用real time PCR、western blot法检测骨骼肌肌红蛋白(myoglobin)及PGC-1α表达量。结果与各自静息组相比,低氧训练30 d组和60 d组小鼠力竭运动时间均延长(P<0.05);与野生小鼠相比,过表达HO-1的转基因小鼠经低氧训练后力竭运动时间延长显著(P<0.01)。与C组相比,C+T60组小鼠红肌纤维增多(P<0.05);与H组相比,H+T30组和H+T60组小鼠红肌纤维均显著增多(P<0.01);过表达HO-1转基因小鼠经过低氧训练后红肌纤维较野生小鼠增多显著(P<0.01)。与静息组小鼠相比,低氧训练后各组小鼠骨骼肌中myoglobin的表达增加(P<0.05),同时伴随PGC-1α表达增加(P<0.05),尤以过表达HO-1小鼠显著(P<0.05)。结论过表达HO-1在低氧训练中可显著提高小鼠运动耐力,其机制可能是HO-1通过增加PGC-1α的表达促进骨骼肌红肌纤维增加实现的。

长疗程抗生素联合雾化吸入在良性气管狭窄呼吸内镜治疗中的作用

目的探讨呼吸内镜介入治疗后,长疗程静脉用抗生素联合雾化吸入治疗良性气管狭窄的长期疗效。方法回顾性分析因不同病因致良性气管狭窄,并经呼吸内镜介入治疗术后,抗生素治疗时间≥1个月,同时雾化吸入阿米卡星和布地奈德悬液治疗6个月的67例患者的临床资料。测量呼吸内镜介入治疗术前后狭窄段气管的内径、气促评分;评价近期及6个月后治疗效果和并发症的发生情况。结果呼吸内镜介入治疗后,狭窄段气管内径由(3.82±0.91)mm增加到(12.16±1.57)mm;气促指数由(3.45±0.63)降低到(0.52±0.50),差异均有统计学意义(P<0.05),术后近期治疗疗效为100%;经静脉用抗生素治疗1个月,同时雾化吸入阿米卡星和布地奈德悬液6个月内的气管通畅率94.02%。二重感染等并发症均未出现。结论良性气管狭窄呼吸内镜介入术后长疗程静脉用抗生素联合雾化吸入治疗可提高长期疗效。

低氧训练中过表达血红素加氧酶1促进小鼠骨骼肌线粒体的生物合成

背景:近年对低氧训练机制的研究主要围绕低氧训练对机体血液系统的调节作用展开,但结果具有两面性,提示还有非血液系统调节机制。目的:探讨血红素加氧酶1在低氧训练中对小鼠骨骼肌线粒体含量及生物合成的调节作用。方法:SPF级8周龄雄性过表达血红素加氧酶1转基因小鼠20只,野生型小鼠20只,由兰州大学医学院提供。2种小鼠分别被随机分为2组(共4组):野生小鼠低氧静息组、野生小鼠低氧训练组、转基因小鼠低氧静息组和转基因小鼠低氧训练组。低氧训练组小鼠在青海大学基础医学研究中心进行跑台运动(速度20 m/min,坡度5°,60 min/d,5 d/周,共4周)。各组小鼠均于末次训练结束3 d后行速度20 m/min,坡度5°持续跑台运动并记录各组小鼠力竭运动时间,电镜检测骨骼肌线粒体数量,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,萤光素酶发光法检测线粒体ATP合成活性,Western blot检测骨骼肌血红素加氧酶1、COX Ⅳ和PGC-1α蛋白表达量。结果与结论:①与野生小鼠低氧静息组相比,野生小鼠低氧训练组和转基因小鼠低氧训练组力竭运动时间增加,线粒体数目略有增多,线粒体膜电位和ATP合成增加,血红素加氧酶1、COX Ⅳ和PGC-1α蛋白表达量增加;②与野生小鼠低氧训练组相比,转基因小鼠低氧训练组力竭运动时间明显增加,线粒体数目显著增多,线粒体膜电位和ATP合成增加,COX Ⅳ和PGC-1α蛋白表达量显著增加;③结果说明,血红素加氧酶1在低氧训练中具有延长小鼠力竭运动时间的作用,其机制可能与增加骨骼肌线粒体数量和生物合成有关。

小剂量红霉素对气管损伤后肉芽组织增生的影响

目的探讨小剂量红霉素对气管损伤后肉芽组织增生的影响。方法将42只家兔按随机数字表法分成A～G共7组各6只；其中A为空白对照组，B为青霉素组，C为红霉素组，D为红霉素＋青霉素组，E为布地奈德组，F为红霉素＋布地奈德组，G为红霉素＋布地奈德＋青霉素组。42只家兔行气管切开后均予尼龙毛刷来回刷20次进行造模。术前1周至术后第9天各组分别予上述药物处理。术后第10天采集血液标本检测转化生长因子β1（TGF－β1）、血管内皮生长因子（VEGF）、白细胞介素（IL）－6、IL－8浓度；并进行气管狭窄度测量。结果A～G组血清中TGF－β1浓度分别为（17.6±1.3）、（18.2±3.1）、（13.0±1.1）、（14.0±1.0）、（21.0±6.1）、（13.6±3.5）、（8.2±1.3）ng/L，VEGF浓度分别为（88.1±4.1）、（85.8±4.3）、（58.1±6.3）、（56.5±2.4）、（87.8±2.8）、（57.0±3.7）、（34.3±6.7）ng/L, IL－6浓度分别为（67.8±4.0）、（66.1±3.5）、（54.1±4.8）、（52.1±3.2）、（64.6±4.9）、（49.4±4.2）、（35.9±3.7）ng/L，IL－8浓度分别为（112.8±5.2）、（116.6±4.1）、（88.0±6.2）、（85.5±3.5）、（114.4±4.6）、（82.6±3.8）、（55.9±6.0）ng/L；C、D、F、G组血清中TGF－β1、VEGF、IL－6、IL－8浓度均显著低于A、B、E组（均P〈0.05），G组浓度均显著低于其他各组（均P〈0.05）。42只家兔气管内均有不同程度的肉芽组织增生致气管狭窄。A～G组气管狭窄度分别为（53.3±4.4）%、（48.2±5.0）%、（24.3±4.4）%、（29.5±3.2）%、（47.8±6.5）%、（27.9±3.1）%、（15.6±2.0）%，C、D、F、G组狭窄度均显著轻于A、B、E组（均P〈0.05），G组狭窄度均显著轻于其他各组（均P〈0.05）。结论小剂量红霉素能有效抑制气管损伤后肉芽组织的增生，与其他抗菌素及糖皮质激素联合用药效果更佳。

静脉用抗菌素对良性气管狭窄呼吸内镜介入治疗术后长期疗效的影响

目的探讨良性气管狭窄患者呼吸内镜介入治疗后静脉用抗菌素治疗1个月对长期疗效的影响。方法回顾性分析从2012年5月至2015年4月因不同病因致良性气管狭窄收住广西医科大学第一附属医院呼吸内科的75例患者的临床资料。按术后接受静脉用抗菌素治疗的时间分组，其中抗菌素治疗时间≤2周为抗菌素短期治疗组（即短期组），抗菌素治疗时间≥1个月为抗菌素持续治疗组（即持续组），同时所有患者住院期间及出院后均雾化吸入阿米卡星和布地奈德悬液治疗共计6个月。近期及6个月后分析2组患者的治疗效果和并发症。结果经呼吸内镜介入治疗后，短期组狭窄段气管内径由（3．8i±0．80）mm增加到（12．55±1．25）mm（t=-46．41，P〈0．05），持续组狭窄段气管内径由（3．78±0．66）mm增加到（12．35±1．43）mm（t=-50．60，P〈0．05），差异均有统计学意义；短期组气促评分由3．41±0．78降低到0．55±0．63（t19．53，P〈0．05），持续组气促评分由3．43±0．66降低到0．54±0．51（t=3．43，P〈0．05），差异均有统计学意义。术后近期治疗效果均为100．00%，持续组6个月的总体有效率显著高于短期组（93．48％vs44．83％，Х^2=22．26，P〈0．05）。2组均未出现二重感染等抗菌素治疗的并发症。结论良性气管狭窄者介入术后较长时间应用抗菌素可明显减少再狭窄率，提高长期疗效。

不同药物对基于TGF-β/mTOR信号通路所致兔气管狭窄的影响机制

目的探讨不同药物对基于转化生长因子-β/雷帕霉素靶蛋白(TGF-β/mTOR)信号通路所致气管狭窄的影响机制.方法将30只家兔完全随机分为正常对照组、生理盐水组、青霉素组、布地奈德组、红霉素组5组,正常对照组不做处理,其余各组均建立气管狭窄模型.建模后第1~10天,建模各组分别予以生理盐水灌胃(0.75 ml/kg,2次/d)、肌肉注射青霉素(40 000 U/kg,2次/d)、红霉素灌胃(12.5 mg/kg,2次/d)、雾化吸入布地奈德(0.05 mg/kg,2次/d)处理.术后第11天处死家兔,收集气管标本,测气管狭窄度.运用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测白细胞介素(IL)-6、TGF-β、Ⅰ型胶原蛋白(COL-1)、Ⅲ型胶原蛋白(COL-3)、沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT-1)mRNA的相对表达量;免疫组化检测mTOR、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、血管内皮生长因子(VEGF)、SIRT-1蛋白阳性表达情况;运用Western印迹法检测核因子(NF)-κB及其磷酸化(p-NF-κB)、AKT,p-AKT、mTOR蛋白表达情况.结果正常对照组、生理盐水组、青霉素组、布地奈德组、红霉素组气管狭窄度差异均有统计学意义[(14.02±2.86)%、(64.14±3.21)%、(49.11±2.96)%、(39.52±2.09)%、(32.60±4.27)%](均P<0.05).除红霉素组与正常对照组IL-6 mRNA外,其余各组IL-6 mRNA(1.00±0.00、9.02±1.50、4.25±0.87、2.53±0.17、1.31±0.56)、TGF-βmRNA(1.00±0.00、6.92±0.84、3.83±0.44、2.13±0.25、1.40±0.15)相对表达量差异均有统计学意义(均P<0.05).除红霉素组与布地奈德组SIRT-1蛋白外,其余各组SIRT-1mRNA(1.000±0.000、0.209±0.042、0.375±0.034、0.555±0.028、0.667±0.032)及SIRT-1蛋白(16.93±2.28、4.77±1.45、7.70±0.61、10.76±1.04、11.03±1.10)的相对表达量差异均有统计学意义(均P<0.05).免疫组化各组mTOR蛋白(9.28±4.56、58.18±8.12、44.75±5.56、32.82±5.99、24.73±3.56)、p-AKT蛋白(16.57±4.86、61.79±6.66、42.98±5.99、32.79±5.34、24.00±4.40)相对表达量差异均有统计学意义(均P<0.05).Western印迹检测各组NF-κB、p-NF-κB、AKT、p-AKT、mTOR蛋白表达与免疫组化相关蛋白趋势一致,生理盐水组NF-κB、AKT、mTOR的蛋白相对表达量均高于其他各组,红霉素组低于布地奈德组、且均低于青霉素组;除红霉素组与正常对照组mTOR蛋白外,其余各组差异均有统计学意义(均P<0.05).结论青霉素、红霉素、布地奈德可通过升高SIRT-1减轻炎症反应,减轻基于TGF-β/mTOR通路所致的兔气管瘢痕增生,改善气管狭窄程度.

红霉素联合顺钳对A549细胞的细胞周期和凋亡的影响

目的研究红霉素(EM)对顺钳(CDDP)诱导A549细胞周期的细胞凋亡作用的影响。方法以A549细胞为研究对象.配制CDDP浓度为0.25、0.5、1、2,4、8 mg/1。用不同浓度CDDP刺激A549细胞48 h.采用Cell Counting Kit-8法检测不同浓度CDDP处理A549细胞后的细胞活性,并分别计算CDDP各自的半数抑制浓度(IC50)。将试验分组为空白对照组(只加10%灭活胎牛血清的RPMI-1640细胞培养液〉、10 mg/L EM组、10 mg/1.EM+IC50-CDDP组、IC50-CDDP组.各组细胞培养48 h后,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡、细胞周期百分比。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HDAC2,Caspase^9、Caspask3、cyclinDl mRNA的表达;采用蛋白质印迹法检测HDAC2、Caspase-9,Caspase-3,cyclinDl蛋白的表达。结果不同浓度CDDP处理A549细胞48h,细胞生长受到不同程度抑制,并且呈浓度抑制依赖性.浓度越高.对细胞生长抑制作用越大(P<0.05)。IC50-CDDP为3.419 mg/L。流式细胞仪细胞周期结果显示:与空白对照组比较.其它3组细胞周期期比列均增加.差异均有统计学意义(P值均<0.05),细胞凋亡结果显示:与空白对照组比较.10 mg/L EM组的细胞凋亡有增加,但差异无统计学意义(P>0.05),而10 mg/L EM+IC50-CDDP组及IC50-CDDP组的细胞凋亡明显增加(P值均<0.05).与空白对照组比较,10 mg I.EM组及10 mg/L EM+IC50-CDDP组HDAC2、Caspase-9>Caspasr3 mRNA及蛋白表达均升高,cyclinDl mRNA及蛋白的表达均下降,差异均有统计学意义(P值均<0.05).结论EM可使A549细胞的cyclinDl的活性下降.增强CDDP对A549细胞的细胞阻滞作用。EM还可促进凋亡相关蛋白Caspase-9,Caspase3表达增加,增强CDDP对A549细胞的凋亡作用.其机制可能与EM提高A549细胞的HDAC2表达有关。因此.可考虑将EM联合CDDP作为治疗肺腺癌患者的新型药物组合。

气管狭窄肉芽组织中组蛋白去乙酰化酶2的表达及其与气管狭窄的关系

目的研究组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)在良性气管狭窄动物模型中的表达,并探讨HDAC2在气管狭窄发生中的作用机制,为治疗良性气管狭窄寻求新靶标。方法将18只家兔完全随机分成空白对照组、模型组和红霉素组,每组各6只。模型组和红霉素组家兔行气管切开并用尼龙刷来回刷20余次损伤气管内壁制作良性气管狭窄的动物模型。术前7 d至术后9 d模型组给予生理盐水灌胃,红霉素组给予小剂量红霉素15 mg·kg^(–1)·d^(–1)灌胃,空白对照组不做任何处理。术后第10 d处死各组家兔,切取狭窄段气管,测量气管狭窄度,并取狭窄段肉芽组织提取RNA和蛋白质。用实时荧光定量PCR检测肉芽组织中HDAC2、白细胞介素-6(IL-6)、IL-8的mRNA相对表达量,用蛋白免疫印迹检测肉芽中HDAC2蛋白的相对表达量。结果模型组与空白对照组比较,气管狭窄明显[(84.60±1.14)%比(27.00±6.44)%],HDAC2 mRNA和蛋白表达下调(0.29±0.07比1.00±0.00,0.20±0.02比0.49±0.04),IL-6、IL-8 mRNA表达上调(4.22±0.67比1.00±0.00,162.72±23.23比1.00±0.00)。红霉素组与模型组比较,气管狭窄度减轻[(64.00±12.25)%比(84.60±1.14)%],HDAC2 mRNA和蛋白表达上调(0.42±0.14比0.29±0.07,0.43±0.01比0.20±0.02),IL-6、IL-8 mRNA表达下调(0.72±0.24比4.22±0.67,130.22±7.93比162.72±23.23),差异均具有统计学意义(均P<0.05)。气管狭窄度与HDAC2 mRNA相对表达量呈负相关(Pearson相关系数r=–0.96,P<0.05)。结论良性气管狭窄动物模型中HDAC2表达下调与气管狭窄的发生发展有关。小剂量红霉素具有治疗良性气管狭窄的作用,可能是小剂量红霉素上调HDAC2的表达,进而抑制气管损伤修复时的炎症失调有关。

自噬在气管狭窄家兔模型中的表达及意义

目的初步探讨自噬在气管狭窄家兔模型中的表达及意义。方法18只家兔根据随机数字表法均分成空白对照组、生理盐水组、红霉素组3组。建立家兔气管狭窄模型后，术前7d至术后10d期间，空白对照组不予任何处理，生理盐水组予以生理盐水0．54mg／kg雾化，红霉素组予以红霉素7．5mg／kg喂食，均为2移’／d。术后第11天处死家兔，收集气管标本。利用Masson染色检测气管黏膜层及固有层中胶原纤维面积比例；运用实时荧光定量PCR检测气管黏膜中自噬相关基因3（ATG3）、自噬相关基因5（ATG5）的mRNA相对表达量；运用Western印迹法检测微管相关蛋白1轻链B3（MAP1-LC3B，简称LC3B）、ATG3、ATG5蛋白的表达量。结果空白对照组、生理盐水组、红霉素组气管黏膜层及固有层中胶原纤维面积所占比例分别为（6．79±0．67）％、（40．55±5．40）％、（27．48±0．43）％，组间差异均有统计学意义（均P〈0．05）。生理盐水组ATG3mRNA和ATG5 mRNA的相对表达量均显著低于空白对照组（均P〈0．01），红霉素组均显著高于生理盐水组（均P〈0．01）。生理盐水组LC3B-Ⅱ／Ⅰ蛋白比值、ATG3和ATG5蛋白表达水平均显著低于空白对照组（均P〈0．01），红霉素组蛋白表达水平均显著高于生理盐水组（均P〈0．01）。结论气管狭窄家兔自噬表达水平降低，小剂量红霉素可提高其表达，同时减轻气管黏膜纤维化程度；自噬可能通过上调其表达，从而改善气管纤维化。

红霉素预防兔气管损伤后气管狭窄研究

目的探讨红霉素在预防兔气管损伤后气管狭窄的作用及机制。方法18只新西兰大耳白兔随机分为阴性对照组、模型对照组、红霉素治疗组，每组均行气管切开，阴性对照组气管切开后直接缝合气管，其余2组气管切开尼龙刷刮除气管黏膜后缝合气管。红霉素治疗组术前7d开始给予红霉素13．6mg／kg，每日灌胃至术后10d，阴性对照组、模型对照组每日灌胃等量生理盐水。术后10d处死兔子，收集气管组织，HE染色检查气管组织病理学改变并测量气管狭窄率；实时定量PCR检测各组气管组织转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA表达；免疫组化法检测气管组织I型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果红霉素治疗组气管狭窄率为（35．11±4．50）％，阴性对照组气管狭窄率为（11．96±3．26）％，模型对照组气管狭窄率为（53．95±7．09）％，红霉素治疗组气管狭窄率低于模型对照组（t=13．98，P〈0．05）。组织病理学结果显示，模型对照组气管狭窄组织中较多炎性细胞浸润，成纤维细胞大量增殖，大量小血管生成，而红霉素治疗组炎性细胞浸润、成纤维化细胞增殖、小血管生成均减少。红霉素治疗组TGF-β1mRNA相对表达量较模型对照组减少（t=4．55，P〈0．05）。免疫组化结果显示，红霉素治疗组的Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的表达量均较模型对照组明显降低（P值均〈0．05）。结论红霉素可能通过抗炎，下调TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白表达，减轻兔气管损伤后气管狭窄。

血晶素对间歇性低氧大鼠作用的研究

目的研究血红素加氧酶-1(HO-1)激动剂血晶素对间歇性低氧大鼠血压的影响,探讨间歇性低氧致动物血压变化的机制和调控方法。方法将24只雄性SD大鼠随机分为血晶素组、间歇低氧组及正常组,每组8例。血晶素组大鼠接受腹腔内注射血晶素30 min后置于常压低氧有机玻璃箱内,使其间歇性低氧8 h/d;间歇低氧组大鼠接受腹腔内注射生理盐水30 min后置于常压低氧有机玻璃箱内,使其间歇性低氧8 h/d,箱体内氧气浓度与血晶素组相同;正常组大鼠接受每天早晨腹腔内注射生理盐水后置于玻璃箱中正常通气。三组大鼠均在同等条件下室温常规饲养。35 d后测定大鼠平均颈总动脉压力(mCAP),检测其血浆一氧化碳(CO)含量,应用逆转录聚合酶链反应检测相关组织器官中HO-1 mRNA的表达,用免疫组织化学检测相关组织器官中HO-1蛋白表达。结果 mCAP在间歇低氧组较血晶素组及正常组明显升高(P<0.05),在血晶素组较正常组高(P<0.05)。血浆CO含量在血晶素组较间歇低氧组、正常组高(P<0.05),间歇低氧组与正常组差异无统计学意义(P>0.05)。肝、脾、肺、肾HO-1 mRNA的表达在血晶素组较间歇低氧组及正常组高(P<0.05),在间歇低氧组较正常组高(P<0.05)。mCAP与HO-1 mRNA呈曲线趋势,二次方曲线拟合方程为Y=39.715+446.640X-334.353X^2。结论间歇性低氧可使大鼠的血压升高,相关组织器官中的HO-1表达增加,但血浆CO含量并不升高。使用血晶素可使间歇性低氧大鼠体内HO-1及CO均升高,并有一定程度的降血压作用。