16S与gyrB基因联合建树快速鉴定海水中的一株地衣芽胞杆菌

在保守序列高度相似的细菌鉴定中,单独使用16S rDNA/RNA序列进行比对和构建进化树通常无法准确鉴定到种,需要增加测序基因数并对多基因进行分析。为实现快速鉴定,课题组对16S与gyrB基因联合建树的方法进行了研究,将海洋来源的一株杆菌,分别用通用引物扩增16S和gyrB基因并测序,在GeneBank进行序列比对后,选择各菌种保藏中心16S和gyrB基因均相似的菌株,取16S和gyrB基因序列,采用Paup*4.0构建进化树。使用16S与gyrB拼接序列构建的进化树中属于同一种的菌株均很好的聚合在一枝,种间分枝自展值均高于98,分类结构准确,筛选得到的杆菌与地衣芽胞杆菌(Bacilluslicheniformis)聚合在一枝,自展值为100,鉴定为地衣芽胞杆菌。经生理生化试验验证,该菌株与地衣芽胞杆菌特征完全一致,使用16S和gyrB基因联合建树得到的鉴定结果准确且快速简便。

一株海洋来源蛋白酶产生菌Parengyodontium album HX2019006的鉴定及其发酵条件研究

为筛选1株产蛋白酶的海洋菌种,课题组从厦门市红树林中筛选得到1株产蛋白酶的丝状真菌,并对其细胞形态进行了扫描电镜观察,经提取其ITS序列于Genbank进行比对并构建进化树,将其鉴定为Parengyodontium album HX2019006。该菌株在海水培养基中可生产蛋白酶,通过对其培养基组分及发酵条件进行单因素优化,获得较高的蛋白酶产量后,选择培养基中麦芽糖浓度、蛋白胨浓度和培养时间3个因素进行3水平响应面优化,在优化后的培养基和发酵条件下,发酵液蛋白酶活力为71. 1 U/m L,较初始条件提高125. 7%。

16S与gyrB基因联合建树快速鉴定一株蜡样芽孢杆菌

开发一种可用于保守序列相似度较高的菌群快速鉴定的方法,并用其鉴定一株从土壤采集的芽孢杆菌。从厦门市同安国家农业科技园区施用动物肥的种植区采集土壤,稀释涂布平板,分离纯化菌株后,扩增16S与gyrB基因序列并测序,在Genbank选择序列相似的ATCC菌株进行比对,将16S序列与gyrB序列线性拼接后,利用Paup*4.0构建进化树,通过生理生化实验对鉴定结果进行验证。在16S序列与gyrB基因序列单独建树均无法鉴定到种的情况下,通过16S与gyrB碱基线性拼接序列联合建树,将土壤中分离得到的芽孢杆菌HX2016002鉴定为蜡样芽孢杆菌,该方法所构建的进化树自展值高,鉴定结果与生理生化实验一致。对Genbank中已知的蜡样芽孢杆菌序列建树分析表明,该方法在蜡样芽孢杆菌中具有普适性。利用16S与gyrB基因拼接序列联合建树,在保守序列相似度高的属内菌种鉴定中具有进一步研究的价值。

产DHA破囊壶菌Aurantiochytrium sp.HX2019010的筛选及其脂肪酸组成分析

为筛选产二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA)菌株,从厦门市红树林的海水腐木中分离到一株球状真菌HX2019010,通过扫描电镜观察,测定ITS序列,与Genbank数据库比对,该菌株与破囊壶菌相似性较高。选取ITS序列相似性较高的相近菌株构建的进化树表明,菌株HX2019010与Aurantiochytrium类群聚为一枝,自举检验值较高,初步定名为Aurantiochytrium sp.HX2019010。该菌株在发酵罐中可产生较高浓度的DHA,98 h发酵后生物量达108.27 g/L,总油脂达28.43 g/L,DHA达9.17 g/L。细胞脂肪酸组成分析结果表明,该菌株所产脂肪酸主要为棕榈酸、DHA、肉豆蔻酸等;脂肪酸组成受培养时间或培养条件的影响,总量可达细胞干质量的26.26%,其中DHA占脂肪酸总量的32.25%-45.86%。

采用差示扫描量热法半定量检测替格瑞洛片剂处方

本文采用差示扫描量热法(DSC)将替格瑞洛片剂("倍林达")及与处方一致的原辅料在干燥氮气环境下,20~200℃的温度范围内,加热速率为10℃/min扫描,计算物料熔化焓ΔHfcorr,通过熔化焓计算各原辅料在处方中所占比重,并结合替格瑞洛片剂规格,验证该计算方法可行性。经原料含量验证可知,该方法操作简便,稳定、快速,可行,可用于半定量测定替格瑞洛片剂处方组成。