小鼠抗KLH多克隆抗体的制备及TDAR实验间接ELISA定量检测方法的建立

目的:通过制备小鼠抗KLH多克隆抗体,优化反应条件建立KLH特异性抗体ELISA定量分析方法,以期提供一种特异性好、灵敏度高及误差低的TDAR实验检测方法。方法:利用盐析沉淀和亲和层析纯化技术分离和纯化小鼠抗KLH特异性多克隆IgG抗体;以纯化后的抗体作为标准品,建立TDAR实验间接ELISA定量检测方法,并对该方法进行线性范围、特异性、变异系数(CV)及检测限验证。结果:以KLH包被浓度为80μg/ml,山羊抗小鼠IgG/HRP酶标二抗的稀释倍率为1∶20000条件进行间接ELISA定量分析的方法学验证,检测线性范围为390.63~25000 ng/ml,R^(2)=0.9848,线性良好;批内和批间CV均<10%;检测限为194.83 ng/ml。结论:通过制备抗KLH多克隆抗体,并优化实验反应条件来建立间接ELISA定量分析方法,其线性范围、特异性及批内、批间CV均满足实验要求,是一种高灵敏度的TDAR实验检测方法。

用白花前胡戊素联合氨茶碱对哮喘小鼠进行治疗对其肺组织中NF-κB和IL-6水平的影响

目的:观察用白花前胡戊素(PE)联合氨茶碱对卵清蛋白(OVA)致哮喘小鼠进行治疗对其肺组织中核转录因子-κB(NF-κB)和白细胞介素-6(IL-6)表达水平的影响。方法:将36只BALB/c小鼠随机分为空白组、OVA组、氨茶碱组、氨茶碱+PE小剂量组、氨茶碱+PE中剂量组和氨茶碱+PE大剂量组。分别对各组小鼠进行不同的处理,然后观察其肺组织中NF-κBp65蛋白、NF-κBp65 mRNA和IL-6 mRNA的表达情况。结果:与空白组小鼠相比,OVA组小鼠肺组织中NF-κBp65蛋白的阳性表达率、NF-κBp65 mRNA和IL-6 mRNA的表达水平均较高,P<0.05。与OVA组小鼠相比,氨茶碱组小鼠接受治疗后其肺组织中NF-κBp65蛋白的阳性表达率、NF-κBp65 mRNA和IL-6 mRNA的表达水平均较低,P<0.05。接受治疗后,氨茶碱+PE小剂量组小鼠肺组织中NF-κBp65蛋白的阳性表达率、NF-κBp65 mRNA和IL-6 mRNA的表达水平均低于氨茶碱组小鼠,P<0.05;氨茶碱+PE中剂量组小鼠肺组织中NF-κBp65蛋白的阳性表达率、NF-κBp65 mRNA和IL-6 mRNA的表达水平均低于氨茶碱+PE小剂量组小鼠,P<0.05;氨茶碱+PE大剂量组小鼠肺组织中NF-κBp65蛋白的阳性表达率、NF-κBp65 mRNA和IL-6 mRNA的表达水平均低于氨茶碱+PE中剂量组小鼠,P<0.05。结论:与单用氨茶碱、用小剂量的PE联合氨茶碱、用中剂量的PE联合氨茶碱相比,用大剂量的PE联合氨茶碱对OVA致哮喘小鼠进行治疗的效果较好,可显著降低其肺组织中NF-κB和IL-6的表达水平,减轻其气道的炎症反应。

重组人钙调磷酸酶B亚基对免疫功能低下小鼠的影响

目的探讨重组人钙调磷酸酶B亚基(rhCNB)对环磷酰胺诱导免疫功能低下小鼠体液免疫功能的影响。方法将Balb/c小鼠随机分为阴性对照组、平行对照组、模型组、rhCNB治疗组。采用环磷酰胺(20 mg/kg)诱导小鼠免疫功能低下模型,治疗组及平行组给予rhCNB(20 mg/kg),阴性对照组和模型组给予等体积生理盐水。末次给药24 h后进行外周血常规、淋巴细胞亚群(CD4、CD8、CD19)及细胞因子IL-4、TNF-α、IL-6的检测;T细胞依赖性抗原抗体反应(TDAR)试验检测;计算胸腺及脾脏脏体比,观察脾脏、胸腺和胸骨组织病理学改变。结果rhCNB可明显改善和提高免疫功能低下小鼠胸腺及脾脏脏体比,增加外周血白细胞(WBC)、血小板(PLT)、淋巴细胞(LYM)、中性粒细胞(NEU)含量,增加CD4/CD8比值及CD19亚群比例,提升抗体lgG及细胞因子TNF-α、IL-6的水平(P<0.05)。结论rhCNB具有免疫调节作用,通过调节细胞因子水平,促进淋巴细胞分化增殖,改善机体体液免疫功能。